金钗石斛干鲜品的质量比较研究*

朱南南，孙志蓉，杨春宁，程丽丽，周　杨，杨　薇

金钗石斛干鲜品的质量比较研究*

朱南南，孙志蓉，杨春宁，程丽丽，周杨，杨薇

（北京中医药大学中药学院，北京100102）

［目的］对金钗石斛干鲜品的化学成分及抗氧化活性进行比较研究，了解两者的差别，为金钗石斛干鲜品的区别应用提供依据。［方法］采用气相色谱法和紫外-可见分光光度法进行成分含量测定比较。采用比色法及试剂盒测定干鲜品对羟自由基的清除作用及抗氧化能力。利用傅利叶变换红外光谱法对干鲜品粉末样品的全息化学特征谱进行比较。［结果］金钗石斛鲜品的总生物碱和多糖含量及其对羟自由基的清除率和抗氧化能力均显著高于干品。金钗石斛干品与鲜品的红外谱图相似，在1 630 cm-1、1 506 cm-1、1 243 cm-1处，贵州赤水的官渡、长期与红花3个基地的金钗石斛鲜品峰强均大于干品，各个产地金钗石斛鲜品的图谱与多糖对照品图谱的相关系数均大于干品。［结论］金钗石斛干品与鲜品在化学成分及抗氧化活性方面存在着一定的差异。

金钗石斛；干鲜品；化学成分；抗氧化活性

DOI：10.11656/j.issn.1672-1519.2015.11.13

中药在临床应用上常有生品、熟品及鲜品之分，现代研究表明，多种中药的干品和鲜品在化学成分和药理作用上存在差异［1-4］，其用途也不同。金钗石斛为兰科石斛属植物金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl．）的新鲜或干燥茎，为历版药典收载的石斛主要品种。鲜石斛性寒，对热证的疗效优于石斛干品［5］。随着石斛资源量的恢复及人们保健意识的增强，越来越多的人开始使用石斛鲜品进行治疗与保健，石斛鲜条、鲜榨汁、冻干粉受到青睐，但目前尚未见石斛干鲜品质量比较方面的研究报道。冷冻干燥方法对物料原有结构、形状和成分的破坏程度最小，能较好地保持鲜品的品质［6］，是目前中药鲜品处理和保存中常采用的方法。文章采用烘干法和冷冻干燥法处理金钗石斛新鲜茎条获得干品和鲜品，对两者的化学成分含量进行测定比较，同时对两者的抗氧化能力及红外谱图进行比较分析，从多个层面揭示金钗石斛干品与鲜品之间存在的差异，为金钗石斛干鲜品的区别应用提供理论依据。

1　材料与方法

1.1实验材料

1.1.1样品来源金钗石斛的2年生新鲜茎条于2013年3月采自道地产区贵州赤水鸭岭、官渡、长期、红花4个规范化生产基地，经北京中医药大学孙志蓉副教授鉴定为金钗石斛（Dendrobium nobile Lindl.）。鲜品为新采摘鲜茎经冷冻干燥（-60℃、1 pa下预冻7 h，干燥10 h）后粉碎处理得到。干品为同批采摘的鲜茎经55℃鼓风烘干，分别粉碎，过60目筛，装入塑料封口袋，置于干燥器中保存备用。

1.1.2仪器与试剂LGJ-12冷冻干燥机（松源华兴公司）；METTLER-AE240型1/100000电子分析天平（瑞士梅特勒公司）；U-3010紫外-可见分光光度计（日本）；安捷伦7890A型气相色谱仪，安捷伦7683B自动进样器（美国安捷伦公司）；Spectrum GX FTIR红外光谱仪（美国Perkin Elmer），DTGS检测器；Epoch酶标仪（美国BioTek）。总抗氧化（TAC）试剂盒（Bioassay，DTAC-048），溴化钾（KBr）纯度为99.9%；无水葡萄糖（批号110833-201205）、石斛碱（批号111876-201102）购自中国药品生物制品检定所；乙醇、苯酚、浓硫酸均为分析纯（北京化工厂）。金钗石斛粗多糖对照品为实验室自制（热回流提取，滤液烘干打粉）。

1.2实验方法

1.2.1石斛碱含量测定按照《中国药典》2010年版一部石斛项下的金钗石斛含量测定方法进行，每份样品重复测定3次。

1.2.2总生物碱、多糖含量测定总生物碱、多糖的含量测定参照文献［7］方法进行，多糖含量为相对粗多糖含量，每份样品重复测定3次。

1.2.3抗氧化活性测定1）样品制备：精密称取1 g金钗石斛（干品与鲜品）粉末，加50 mL水，浸泡30 min。加热回流提取1 h，抽滤。回收粉末，加30 mL水进行2次回流提取30 min，抽滤。合并两次滤液，定容至25 mL容量瓶内（生药浓度为40 mg/mL），置4℃冰箱保存备用。2）对羟自由基清除率的测定：参考郭红英［8］的方法，稍作改变。硫酸亚铁与双氧水混合产生羟基自由基，它能够氧化水杨酸，得到的产物在510 nm处会有吸光度，吸光度越大，证明羟基自由基越多，样品抗氧化能力越强，则产生的羟基自由基越少，吸光度则越少。在离心管中依次加入2 mL的6 mmol/L的硫酸亚铁溶液，2 mL的2.4 mmol/L的双氧水（H2O2）溶液，不同浓度的样品溶液2 mL（将上述制备好的样品溶液稀释至生药浓度为30 mg/mL），混匀，静置10 min，再加入2 mL的6 mmol/L水杨酸溶液，混合均匀，37℃水浴0.5 h，离心后取上清液在510 nm下测定。空白组用蒸馏水代替样品溶液，对照组用蒸馏水代替水杨酸。清除率（%）计算公式：羟基清除率（%）=［A空白-（A样品-A对照）］/A空白×100%。3）TAC的测定：将上述制备好的样品溶液稀释至生药浓度为20 mg/mL，采用总抗氧化试剂盒（DTAC-048）测定。

1.2.4红外光谱测定采用溴化钾压片法，对压片进行扫描，获得样品的红外谱图。扫描条件：光谱测量范围（400～4 000）cm-1，光谱分辨率为4 cm-1，扫描次数为16次，邻苯二胺（OPD）速度为0.2/（cm·s），扫描时实时扣除水和二氧化碳（CO2）的干扰。采用Perkin-Elmer公司的SpectrumV6.3.5操作软件，对样品进行数据采集和图谱预处理，预处理过程包括基线校正和比对。

1.2.5统计学处理采用SPSS 20.0进行统计学分析，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用方差分析，相关性分析采用Pearson相关系数，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1　不同基地金钗石斛干鲜品中石斛碱、总生物碱、多糖含量比较（x±s）Tab.1　 Comparison of the contents of dendrobine，total alkaloids and polysaccharide of fresh and driedDendrobium nobileLindl.（x±s）%

2　结果与分析

2.1化学成分含量比较由表1可见，4个基地金钗石斛干品与鲜品的多糖含量之间的差异有显著性（P＜0.01），鲜品的多糖含量（7.31%）高于干品（5.773%），其中官渡的金钗石斛多糖含量较高。金钗石斛干品与鲜品的总生物碱含量差异有显著性（P＜0.05），而石斛碱含量差异无显著性（P＞0.05）。

2.2抗氧化活性比较由表2可见，4个基地金钗石斛干品与鲜品对羟基清除率及抗氧化能力之间均具有显著性差异（P＜0.05），而各基地鲜品对羟基的清除率及抗氧化能力均明显高于干品。

表2　金钗石斛干品与鲜品的抗氧化能力Tab.2　Antioxidative activities of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

2.3红外谱图比较分析贵州赤水4个基地金钗石斛干品与鲜品的一维红外叠加谱图如下图所示（图1～5）。由图1可见，3 400 cm-1为O-H伸缩振动吸收峰，2 927 cm-1为亚甲基C-H反对称伸缩振动吸收峰；1 739 cm-1处为酯羰基C=O伸缩振动吸收峰；1 630 cm-1处可能同时包含芳香环骨架伸缩振动吸收以及共轭羰基C=O伸缩振动吸收峰；1 506 cm-1为芳香环骨架伸缩振动吸收峰；1 461 cm-1附近的吸收峰可能包括多种成分，如芳香环骨架伸缩振动和CH弯曲振动；1 373 cm-1是C-H弯曲振动吸收峰；1 243、1 155、1 077、1 036 cm-1处为各类C-O的伸缩振动峰；在950 cm-1以下，为糖环骨架振动吸收等多个指纹特征峰［9］。以上各种振动吸收峰也与已有金钗石斛中所含的主要成分为生物碱、多糖、酚类、联苄类、菲类、芴酮类等研究结果相一致［10-11］。

各产地金钗石斛干品与鲜品的一维红外谱图在整体上比较相似（图2～5灰线为鲜品，黑线为干品），但在一些细节处还是存在差异的。在1 630 cm-1附近，长期和官渡的金钗石斛鲜品峰强均大于干品，而红花和鸭岭则相反；在（1 500～1 300）cm-1范围内，长期的金钗石斛鲜品峰强均大于干品，而官渡则相反，红花和鸭岭的干鲜品差异较小；在1 154 cm-1处，长期、红花与鸭岭3个基地的金钗石斛鲜品峰强均大于干品。

图1　长期基地金钗石斛干品的一维红外谱图Fig.11D-IR of dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

图2　长期基地金钗石斛干鲜品一维红外谱图比较Fig.2Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Changqi plantation base

图3　官渡基地金钗石斛干鲜品一维红外谱图比较Fig.3Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Guandu plantation base

图4　红花基地金钗石斛干鲜品一维红外谱图比较Fig.4Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Honghua plantation base

图5　鸭岭基地金钗石斛干鲜品一维红外谱图比较Fig.5Comparison of 1D-IR of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.in Yaling plantation

表3　金钗石斛干鲜品与金钗石斛多糖对照品红外光谱相似度分析Tab.3　Infrared spectrum similarity analysis of polysaccharide reference spectrum and fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

对于纯化合物来说，只有结构一样的分子才可能具有相同的红外光谱；结构越相似的分子，其红外光谱也越相似。相关系数可反映样品所含成分的相对含量高低［12］，采用红外相关系数法对不同产地金钗石斛干鲜品与粗多糖的红外光谱进行相关系数比对，结果与特征峰强度呈正相关，结果见表3。鲜品中相关系数均大于干品相关系数，表明金钗石斛鲜品比干品多糖含量高。

3　讨论

金钗石斛干品与鲜品的粉末色泽存在差异，干品呈黄色，鲜品呈青绿色。这与物料干燥的温度有关，干燥温度越高，样品的褐变情况就越严重。对道地产区贵州赤水4个基地的金钗石斛干品和鲜品的石斛碱、总生物碱、多糖含量进行比较，发现不同基地金钗石斛干品与鲜品的石斛碱含量各有高低，但经过配对t检验处理，发现整体上差异不显著，而钱桂敏等［13］采用冷冻干燥法将金钗石斛新鲜茎脱水后，与采用烘干法获得的样品做比较，所得鲜品石斛碱含量比干品高0.022%。鉴于测定的样品量有限，笔者认为这方面还需进一步研究确定。另外，本实验中测得的总生物碱含量数值普遍低于石斛碱含量，分析原因可能是由于石斛碱含量由气相色谱法测得，精确性高，而测定总生物碱含量的溴甲酚绿酸性染料比色法虽然为目前常用的方法［14-15］，但其操作步骤繁琐，实验误差较大，因此今后还需寻找更精确的金钗石斛总生物碱含量测定方法。红外谱图研究结果表明，金钗石斛鲜品中所含的芳香类物质较干品多，这些物质可能是一些挥发油成分或者是芳香类生物碱化合物、黄酮类、酚类等成分，产生这种现象的原因可能是金钗石斛鲜茎在烘干过程中由于受热，芳香类物质不稳定而分解损失；相关系数结果表明不同产地金钗石斛鲜品的多糖含量均大于干品。抗氧化活性方面，金钗石斛鲜品对羟基自由基的清除率和总抗氧化能力均高于干品。由文献［16-17］得知，植物色素多为黄酮类及酚类成分，具有很好的抗氧化作用，金钗石斛干品与鲜品具有明显的色泽差异，推测可能鲜品较好地保存了色素，起到了一定的抗氧化作用。

石斛在古代常会使用鲜药，清热疗效颇佳。然而由于储存、携带不便，现代鲜药应用较少，且目前对中药鲜药也缺少深入系统的研究。但科学技术的发展以及中药材大规模的人工种植，都为鲜药开发奠定了基础。鲜药的优质性不仅仅是某些活性成分含量的变化，而是同加工、炮制一样，可能改变药性，最终影响疗效。文章研究结果表明，金钗石斛干鲜品的化学成分及抗氧化能力方面均存在差异，今后还应对金钗石斛干鲜品的药效进行深入研究，为金钗石斛干鲜品的正确使用提供理论依据。

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（本文编辑：高杉，滕晓东）

Study on the quality of fresh and dried Dendrobium nobile Lindl.

ZHU Nan-nan，SUN Zhi-rong，YANG Chun-ning，CHENG Li-li，YANG Wei
（Beijing University of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100102，China）

［Objective］To compare the component of chemical components and antioxidative activities of fresh and dried Denelrobium nobile Lindl.，understand the difference of them，and provide reference for reasonable application of Denelrobium nobile Lindl.［Methods］GC-MS and UV spectrophotometry was carried out for chemical components analysis；the salicylic acid colorimetry and kit assay were used for determination of the scavenging effects on hydroxyl radical and TAC，respectively；the Fingerprint Features of Denelrobium nobile Lindl.were studied by Fourier Transform Infrared Spectroscopy（FT-IR）.［Results］We found the content of total alkaloids，polysaccharide and hydroxyl radical and total antioxidant capacity in fresh Denelrobium nobile Lindl were significantly higher than dried one. There were some similarity infrared spectrum features for both Denelrobium nobile Lindl.At1 630 cm-1，1 506 cm-1，and 1 243 cm-1，the peak height of fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried Denelrobium nobile Lindl.in Guandu，Changqi，Honghua plantation base of Guizhou province.The infrared correlation coefficient with polysaccharide reference spectrum of the fresh Denelrobium nobile Lindl.was higher than dried one in all origins.［Conclusion］There is a certain difference in the component of chemical components and antioxidative activities in fresh Denelrobium nobile Lindl.and dried one.

Denelrobium nobile Lindl.；dried and fresh herb；chemical component；antioxidative activity

R223.11

A

1672-1519（2015）11-0689-04

贵州赤水石斛产业科技合作项目［赤中药科合（2013）号］；北京中医药大学大学生科研课题（201210026060）。

朱南南（1989-），女，硕士研究生，主要从事中药质量与开发研究。

孙志蓉，E-mail：zrs67@126.com。

（2015-07-20）