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参芪鲫鱼药膳汤对大鼠早期动脉粥样硬化血脂及肝脏的影响

2015-08-22唐妮高静吴晨曦叶艳吴霜朱蓉苟朝琴

中国疗养医学 2015年11期
关键词:鲫鱼汤方组药膳

唐妮 高静 吴晨曦 叶艳 吴霜 朱蓉 苟朝琴

参芪鲫鱼药膳汤对大鼠早期动脉粥样硬化血脂及肝脏的影响

唐妮 高静 吴晨曦 叶艳 吴霜 朱蓉 苟朝琴

目的 探讨参芪鲫鱼药膳汤对大鼠早期动脉粥样硬化(AS)血脂及肝脏的影响。方法 采用高脂饲料+腹腔注射VitD3建立AS动物模型。将72只大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、参芪鲫鱼药膳汤组(简称药膳方组)、丹参黄芪汤拆方组、鲫鱼汤拆方组共6组,每组12只;在造模同时给予干预:药膳方组灌喂丹参黄芪鲫鱼汤,丹参黄芪汤拆方组灌喂丹参黄芪汤,鲫鱼汤拆方组灌喂鲫鱼汤,阳性对照组灌喂阿托伐他汀钙溶液,空白组与模型组灌喂生理盐水,1次/d,剂量均为1 mL/(100 g·d),共干预12周。期间每日观察大鼠一般情况并测体质量;于第12周末采血后处死大鼠,测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度,并计算动脉粥样硬化指数(AI);HE染色光镜下观察胸主动脉变化,取肝脏称重,计算肝系数,取部分肝脏HE染色光镜下观察病理组织变化。结果 共8只大鼠未完成实验,其中药膳方组和鲫鱼汤拆方组各死亡大鼠1只,模型组、阳性对照组和丹参黄芪汤拆方组各死亡2只。成功建立了大鼠早期AS模型:与空白组相比,模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C浓度、AI值及肝质量与肝系数升高,血清HDL-C浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。模型组大鼠胸主动脉中膜弹性纤维排列紊乱、疏松,内皮细胞部分缺失,内膜下大量泡沫细胞聚集,可见炎细胞浸润等;肝脏出现大泡样脂肪变性,炎细胞浸润,肝窦扩张充血,出现局部性坏死及少许纤维组织增生,均提示形成早期AS。药膳方组体质量均高于模型组及丹参黄芪汤拆方组,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,药膳方组血清TC、TG、LDL-C浓度及AI降低、肝质量和肝系数均降低,HDL-C升高,差异有统计学意义(P<0.05),主动脉病变及肝脏病变明显减轻;与丹参黄芪汤拆方组相比,药膳方组肝系数较低(P<0.05),肝脏病变略轻于丹参黄芪拆方组。结论 参芪鲫鱼药膳汤可调节大鼠早期AS血脂代谢异常,并减轻AS大鼠肝脏损害,可预防早期AS的发生发展。

参芪鲫鱼汤药膳;动脉粥样硬化;血脂;肝脏;动物实验

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种功能、形态损害共存的常见全身动脉系统的慢性炎症性病变,以大量脂质沉积到血管壁为主要特点。AS病因复杂,其中血脂代谢异常是促成AS形成和发展的重要因素[1]。作为心血管疾病的病理基础,AS所诱发的心血管疾病是发达国家及发展中国家常见死因之一[2],故预防AS是目前医学界研究重点。2013年国际动脉粥样硬化协会发布《全球血脂异常诊治建议》,强调通过长期饮食干预调节血脂异常以预防AS[3]。中医药膳作为饮食干预的一种,在预防早期AS中以其辨证施食、顾护脾胃、祛邪扶正及口味宜人而独具优势[4]。文献回顾发现药膳预防AS主要以益气活血化瘀为切入点。本研究在前期临床经验的基础上,通过建立大鼠早期AS模型,以探讨具有健脾益气、活血化瘀的参芪鲫鱼药膳汤对大鼠早期AS血脂的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 Wistar雄性大鼠,清洁级,72只,

体质量(200±20)g,许可证号:SCXK(川)2008-14。于清洁级大鼠实验饲养室,温度20~24℃,日温差±1℃,湿度50%~70%,12 h明暗交替,日常饮食为混合颗粒饲料(四川达硕生物有限公司提供),每日08:00—08:30喂食,自由采食、饮水。

1.1.2 食材、药品 丹参、黄芪购于成都中医药大学附属医院,符合《中药鉴定学》要求;鲫鱼由大型超市提供,有食品合格证书;VitD3注射液(规格:1 mL∶7.5 mg,30万IU,上海通用药业股份有限公司,批号:国药准字H31021404);胆固醇(分析纯,批号:140507),胆酸钠(生物级,批号:140615),丙基硫氧嘧啶(原料药,批号:PTU-99-091001)均由武汉胜天宇生物有限公司提供。

1.1.3 仪器 转轮式切片机(徕卡-2016,德国);TSJ-Ⅱ型全自动封闭式组织脱水机(常州市中威电子仪器有限公司);BMJ-Ⅲ型包埋机(常州郊区中威电子仪器厂);PHY-Ⅲ型病理组织漂烘仪(常州市中威电子仪器有限公司);数码三目摄像显微镜(BA400Digital,麦克奥迪实业集团有限公司)等;图像分析软件Motic Images Advanced。

1.2 方法

1.2.1 分组方法 大鼠适应性饲养一周以后,采用随机数字表法将72只大鼠随机分配到6组,即空白组、模型组、阳性对照组、药膳方组、丹参黄芪汤拆方组和鲫鱼汤拆方组,每组12只。

1.2.2 造模方法 空白组饲喂养普通饲料。其余5组在腹腔注射VitD3的基础上(在给予高脂饲料前腹腔注射VitD360万IU/kg,造模后3、6、9周分别注射VitD310万IU/kg)饲以高脂饲料(3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、20%白糖、10%猪油、66.3%的基础饲料),共12周。

1.2.3 食材与药品制备方法 ①参芪鲫鱼药膳汤,按丹参∶黄芪∶鲫鱼=3∶1∶50进行配伍,鲫鱼去净鳃和内脏,切片备用。丹参、黄芪按比例用纱布包裹浸泡30 min,放入砂锅中,加适量水,水沸后加鱼,煮沸后文火煮1 h。②鲫鱼汤,鲫鱼配重同药膳方鲫鱼质量,去鳃和内脏,加入适量水,水沸后按照上述药膳方方法熬制。③丹参黄芪汤,丹参、黄芪按3∶1的比例用纱布包裹浸泡30 min,放入砂锅中,加适量水,水沸后文火煮1 h。以上三种溶液均过滤去渣后,制成含生药浓度为0.475 g/mL的汤剂,冷藏备用。

1.2.4 干预方法 每组干预均采用灌喂法,剂量均为1 mL/(100 g·d)(即每100 g大鼠体质量每日灌喂量为1 mL溶液),1次/d,灌喂前溶液复温到37℃。空白组和模型组均灌喂生理盐水;阳性对照组灌喂阿托伐他汀钙溶液(剂量参照药典预防剂量换算);药膳方组灌喂参芪鲫鱼药膳汤;丹参黄芪汤拆方组灌喂丹参黄芪汤;鲫鱼汤拆方组灌喂鲫鱼汤。共12周。

1.2.5 观察指标

1.2.5.1 一般情况 每日观察大鼠一般情况包括形态、饮食、排泄、活动及精神状况等。

1.2.5.2 血脂测定 于实验第12周末大鼠股静脉取血,静置1 h后,分离血清,用酶联免疫吸附实验(ELLISA)测定大鼠血清TC、TG、HDL-C、LDL-C,并计 算 动 脉 硬 化 指 数 (atherogenic index,AI),AI=(TC- HDL-C)÷HDL-C。

1.2.5.3 病理检查 ①主动脉病理观察。于实验第12周末股静脉取血后将大鼠处死,取完整胸主动脉,除净软组织后石蜡包埋切片,HE染色后在光镜下观察主动脉、内膜、弹性纤维、泡沫细胞及脂质沉积等情况。②肝脏病理观察。于实验第12周末股静脉取血后将大鼠处死,分离肝脏并称重,计算肝系数(肝系数=肝脏质量÷体质量×100%),取部分肝脏HE染色后观察肝脏细胞水肿变性、脂肪变性、坏死及汇管区炎细胞浸润情况。

1.2.6 统计方法 采用SPSS 19.0软件包分析,描述性统计采用(±s)表示。多组资料组间比较满足正态分布采用单因素方差分析:方差齐者用LSD检验,方差不齐者用Dunnett's T3检验。

2 结果

2.1 大鼠一般情况比较 空白组大鼠一般情况正常。其余5组均出现肌肉和皮下脂肪的蓄积逐渐减少、后期出现毛发不光泽、疏松易脱落,进食量饮水量逐渐减少,活动减少,精神萎靡不佳,其中药膳方组一般情况方面优于模型组和丹参黄芪拆方组。每组的体质量变化(表1)。通过单因素方差分析,差异具有统计学意义(P<0.05)。结果显示,除空白组外,其余5组体质量均有所下降。进一步两两比较显示,第8周后药膳方组体质量均高于模型组及丹参黄芪汤拆方组。共8只大鼠未完成实验,其中药膳方组和鲫鱼汤拆方组各死亡大鼠1只,模型组、阳性对照组和丹参黄芪汤拆方组各死亡2只。

2.2 各组大鼠血脂及AI比较(表2) 通过单因素方差分析,差异具有统计学意义(P<0.05),进一步两两比较显示:模型组大鼠血清TC、TG、LDL-C浓度及AI值高于空白组,血清HDL-C浓度低于空白组(P<0.05)。药膳方组血清TC、TG、LDL-C浓度及AI值低于模型组 (P<0.05),HDL-C高于模型组(P<0.05)。

表1 每组大鼠体质量比较(±s)

表1 每组大鼠体质量比较(±s)

注:与空白组比较,△P<0.05;与模型组比较,*P<0.05;与阳性对照组比较,◆P<0.05

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表2 各组大鼠血脂(mmol/L)及AI的比较(±s)

表2 各组大鼠血脂(mmol/L)及AI的比较(±s)

注:与空白组比较,△P<0.05;与模型组比较,*P<0.05;与阳性对照组比较,◆P<0.05

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2.3 病理检查

2.3.1 主动脉病理形态变化 空白组主动脉弹性纤维分布均匀走行清晰无增生,内膜完整光滑,无脂质沉积;模型组与空白组相比病变明显,表现为主动脉结构不清晰,中膜弹性纤维排列紊乱、疏松,内皮细胞部分缺失,内膜下大量泡沫细胞聚集,周边可见少许炎细胞浸润,证明早期AS造模成功。药膳方组病变较轻,主动脉结构较清晰,弹性纤维排列较疏松,内皮细胞较完整,几乎无泡沫细胞,其病理改变明显轻于模型组,轻于鲫鱼汤拆方组,与丹参黄芪拆方组相比差异较小。

2.3.2 肝脏病理变化

2.3.2.1 肝质量及肝系数变化 模型组肝质量和肝系数较空白组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。药膳方组肝质量和肝系数均较模型组低(P<0.05),进一步拆方显示,药膳方组肝系数均低于丹参黄芪拆方组及鲫鱼汤拆方组(表3)。

表3 各组大鼠肝重及肝系数比较(±s)

表3 各组大鼠肝重及肝系数比较(±s)

注:与空白组比较,△P<0.05;与模型组比较,*P<0.05;与阳性对照组比较,◆P<0.05

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2.3.2.2 肝脏病理形态变化 空白组大鼠肉眼观肝脏呈暗红色,颜色均匀质感光滑,镜下肝小叶结构正常,肝索成放射状,细胞排列整齐,无泡沫细胞和脂肪细胞形成,无炎性细胞浸润;模型组呈黄褐色,颜色不均质感油腻,表面似颗粒状,镜下肝细胞明显肿胀,细胞核挤向一边,出现大泡样脂肪变性,炎细胞浸润肝窦扩张充血,出现局部性坏死及少许纤维组织增生,说明造模成功。药膳方组肉眼观较正常,镜下结构病变较轻,肝细胞排列较整齐,少量脂肪细胞形成;丹参黄芪拆方组肉眼肝脏颜色不均匀,镜下肝细胞泡沫样变性,形成少量脂肪细胞;鲫鱼汤拆方组肉眼肝脏呈黄褐色,表面颗粒状质感油腻,镜下肝脏散在脂肪细胞,肝细胞排列疏松,明显肿胀。从病理改变可看出,药膳方组病变明显轻于模型组和鲫鱼汤拆方组,略轻于丹参黄芪拆方组(图1)。

图1 光学显微镜下肝脏(HE染色×400)

3 讨论

3.1 参芪鲫鱼药膳汤预防大鼠早期AS的理论基础 AS是慢性进展性疾病,其病程长、症状严重、病死率高,因此对AS应重在预防。现代医学认为AS的发病机制十分复杂,研究者提出了许多发病假说如氧化应激、慢性炎症、脂蛋白滞留-应答学说等。其中脂蛋白滞留-应答学说已得到公认,该学说认为体内血脂水平特别是LDL升高后,脂蛋白滞留在动脉管壁易损区,AS过程即开始启动,经过继发的炎症反应,呈现加速发展趋势。临床研究发现通过改变血脂异常变化即可达到抑制AS的效果。因此防治AS可通过降脂取得良好成效[5]。中医认为AS属本虚标实之症,本虚主要以脾虚为主,标实为痰浊、血瘀,其中脂质代谢异常(TC、TG、LDL升高,HDL下降)可作为AS“痰浊”的物质基础,故以活血化痰为主防治AS可达到降脂效果。中医药膳作为中医的一个分支通过辨证施食、扶正固本、口味宜人且毒副作用少,在预防AS方面有独特优势。AS作为慢性病,其发生发展与长期不良饮食的方式密切相关,而药膳可调节患者饮食结构,成为药膳预防AS的切入点。近年来传统药膳与现代技术的结合也使药膳制作逐渐标准化,易于患者接受。本课题组在前期临床发现,参芪鲫鱼药膳汤被广泛应用于AS的临床防治过程中,可缓解患者的临床症状、降低血脂。本研究中药膳汤采用经典的补中益气药膳黄芪鲫鱼汤结合活血化瘀的丹参配制而成。丹参味微苦、性微寒、归心、肝经,具有活血化瘀之效,现代药理学研究发现,丹参的主要活性物质丹参素可通过下调炎症因子的表达、抑制氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)增殖等途径以达到抗炎、抗氧化作用[6],从而防止AS的发生发展;黄芪味甘、性微温、归肺、脾、肝、肾经,具有补中益气之效,药理学研究发现其主要成分黄芪多糖可通过调节血脂、抗氧化应激、抗炎从而缓解AS进程[7];而两药配伍使用具有益气活血之功效。在参阅文献及咨询养生专家的基础上采用黄芪和丹参为1∶3的最佳比例[8];鲫鱼为血肉有情之品,味甘,性平,具有通血脉、益气健脾之功效。《镇南本草》中记载“鲫鱼,和五脏,通血脉……”,同时鲫鱼中含优质蛋白和较高不饱和脂肪酸,可增加抵抗力、增加体质及预防AS。以上三者配合,共奏健脾益气、活血化痰之效。

3.2 成功建立早期AS模型 本研究选用饲养方便,抵抗力强,食性与人相近的Wistar大鼠,参照中医证候动物模型实验方法,采用高脂饲料+腹腔注射VitD3建立早期AS模型[9]。结果显示,12周后,模型组与空白组比较体质量降低,血清TC、TG、LDL-C浓度、AI值及肝质量和肝系数高于空白组,血清HDL-C浓度低于空白组;主动脉切片呈主动脉结构不清晰,中膜弹性纤维排列紊乱、疏松,内皮细胞部分缺失,内膜下大量泡沫细胞聚集,周边可见少许炎细胞浸润;肝质量和肝系数较空白组明显升高(P<0.05),肝细胞明显肿胀,细胞核挤向一边,出现大泡样脂肪变性,炎细胞浸润肝窦扩张充血,出现局部性坏死及少许纤维组织增生。提示形成早期AS模型。

3.3 参芪鲫鱼药膳汤对预防大鼠早期AS的作用

3.3.1 药膳汤可改善早期AS大鼠的营养状态从大鼠一般情况来看,除空白组外,其余5组体质量均有所下降,差异有统计学意义。体质量下降与造模使用高脂饲料添加物导致大鼠厌食,或腹腔注射VitD3引起胃肠内脏损害有关[10]。药膳方组体质量从第8周开始高于模型组、阳性对照组及丹参黄芪汤拆方组,说明长期服用药膳可扶正固本,调节脏腑阴阳,增强早期AS大鼠营养状态,充分体现药膳在防治AS方面的优势[11]。实验中共死亡5只大鼠,与灌喂技术、厌食导致机体功能下降或长期灌喂药物不耐受有关。

3.3.2 药膳汤可调节大鼠早期AS血脂代谢异常血脂代谢异常是动脉粥硬化独立危险因素,研究表明TC、TG及LDL-C升高与AS发病呈正相关,而高密度脂蛋白是一种抗AS的因素。它能将外围组织包括动脉壁中的胆固醇运到肝脏,阻止外围细胞对胆固醇的摄取,抑制LDL-C刺激平滑肌增殖,对抗LDL-C对血管内皮细胞和血管平滑肌细胞的损伤。因此防止HDL-C下降和促进其升高也就可能成为寻找抗AS的可能途径之一[12]。本实验中药膳方组血清TC、TG、LDL-C浓度低于模型组,HDL-C高于模型组,表明参芪鲫鱼药膳汤对血脂代谢异常有一定的调节作用。本研究根据血脂结果计算AI的变化。AI是国际医学界制定衡量动脉硬化程度的良好指标,反映动脉硬化程度。AI值与心血管疾病发生率成正比。本研究中模型组AI显著高于空白组,通过药膳汤干预AI值降低,提示药膳汤可具有抗动脉硬化的作用,降低心血管疾病发生率。故本药膳汤可通过调节大鼠早期AS血脂代谢异常,以预防大鼠早期AS。

3.3.3 药膳汤可减轻大鼠早期AS肝脏损害 研究表明虽然中药毒副作用小,但长时间服用同样会造成肝损伤、肾毒性等内脏器官的损害[13]。近年逐渐引起医学者的关注,滕光菊等[14]对418例药物性肝损伤患者资料进行回顾性分析得出,引起损伤药物各类中,中药位居首位;刘亭等[15]报道了一例治疗高脂血症的中成药荷丹片造成严重肝损害。大鼠肝系数为肝质量与体质量的比值百分比,肝系数增大表示肝脏充血、水肿、脂样变或增生肥大等损害。实验表明,与模型组比较,药膳汤组肝系数下降且病理结果明显减轻,表明药膳汤减轻大鼠肝脏病变,缓解造模引起的肝损害。拆方结果提示,与丹参黄芪拆方组相比,药膳方组肝系数较低,肝脏病理略轻。提示较长时间服用中药可能对肝脏有损害。相比之下,药膳作为辅助疗法,通过饮食调整脏腑气血阴阳,增强体质,在防治慢病方面副作用少。结果显示,药膳方组主动脉及肝脏病变较轻,表明长期服用参芪鲫鱼药膳汤可抑制AS大鼠主动脉病变并保护肝脏功能。

综上所述,参芪鲫鱼药膳汤可改善大鼠一般状况,增加体质量,调节大鼠早期AS血脂代谢异常,并可抑制AS大鼠肝脏损害,以预防早期AS的发生发展,展现了益气活血类药膳扶正固本、活血化瘀的优势。

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Objective To explore the effect of Shenqi Jiyu decoction on early atherosclerosis(AS)blood lipid and liver in rats.Methods High-fat diet and VitaminD3were used to establish a rat model with atherosclerosis(AS).Seventy-two male rats were randomly divided into 6 groups:blank group,model group,positive control group,Shenqi Jiyu decoction(SJD)group,Danshen Huangqi disassembled prescription group and Jiyu disassembled prescription group,with 12 rats in each group.Intervention was given while modeling:the SJD group were fed with Shenqi Jiyu decoction,the Danshen Huangqi disassembled prescription group were fed with Danshen Huangqi decoction,the Jiyu disassembled prescription group were fed with Jiyu decoction,the positive control group were fed with atorvastatin calcium solution,the blank group and the model group were fed with normal saline,for once per day with daily dose of 1 mL/(100 g·d)The intervention lasted 12 weeks.During the time,the general condition of the rats was observed and the weight was measured every day.The rats were killed after blood collection at the end of the 12th week,and the serum total cholesterol(TC),triglycerides(TG),high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C),and low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C)were determined,and the atherogenic index(AI)was calculated.The structural changes of thoracic aorta were observed under HE staining light microscope.Livers were isolated and then weighted,and the liver coefficients were calculated.The liver portions were drawn to observe the pathological tissue changes under HE staining light microscope.Results Eight rats died during the study,among which there was one in the SJD group and one in the Jiyu disassembled prescription group,there were two respectively in the model group,in the positive control group,and in the Danshen Huangqi disassembled prescription group.The early atherosclerosis model of rats was successfully established.Compared with the blank group,the TC,TG,LDL-C,AI,liver weight and liver coefficient of the model group increased,but the HDL-C decreased,and the differences were of statistical significance(P<0.05).Elastic fiber of the thoracic aorta among the rats in the model group was arranged in disorder and loose,partial deletion of the endothelial cells,a large number of foam cells accumulated in the intima,and inflammatory cell infiltration could be seen.Hepatic tissues had bulla fatty degeneration,inflammation cells infiltration,hepatic sinusoid expansion and hyperemia,local necrosis and a little hyperplasia of fibrous tissues.The above suggested the model of early atherosclerosis was formed.The body mass of the SJD group was higher than the model group and the Danshen Huangqi disassembled prescription group with differences of statistical significance(P<0.05).Compared with the model group,the TC,TG,LDL-C,AI,liver weight and liver coefficient of the SJD group decreased,while the HDL-C of the SJD group increased with differences of statistical significance(P<0.05),and the aortic and hepatic lesions were obviously obviously relieved.Compared with the Danshen Huangqi disassembled prescription group,the liver coefficient of the SJD group was lower(P<0.05)and the hepatic lesions were lighter.Conclusion Shenqi Jiyu decoction can regulate the blood lipid metabolic abnormality of early atherosclerosis in rats and reduce the liver damage of the rats with atherosclerosis,so as to prevent the occurrence and development of early atherosclerosis.

Shenqi Jiyu decoction;Atherosclerosis;Blood lipid;Liver;Animal experiment

2015-07-22)

1005-619X(2015)011-1134-05

10.13517/j.cnki.ccm.2015.11.006

611137 成都中医药大学护理学院

高静

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