畜禽血液样品采集与保存方法

杨成财

(凉州区柏树乡畜牧兽医站，733000)

血液样品的采集、分离、保存、运送，在畜禽疫病免疫抗体监测检验工作中是一个十分重要的环节，是保证监测结果正确性的必要前提，也是正确反应畜禽免疫抗体效价高低的前提。如果忽视了这一点，就会直接影响血样的质量，进而造成监测结论不正确而对免疫程序和免疫效果错误评估，最终导致畜禽疫病综合防制措施达不到预期目标。因此，笔者结合多年在基层采集分离畜禽血液样品的工作经验，就如何正确进行血液样品的采集和保存谈几点体会，仅供参考。

1 器材的准备

真空采血管或采血器（一次性塑料注射器）、一次性试管、试管架、碘酊棉球、酒精棉球、一次性塑料离心管、离心机、胶布或标签纸、记号笔、相关表格、防护服、手套、口罩、胶靴等。

2 血液样品采集

2.1 禽类翅静脉采血

助手抓住禽两翅及两腿，右侧卧保定，采血者右手持5mL一次性注射器（也可用真空采血器），左手食指中指固定左翅，拇指压住近心端翅静脉，用酒精棉球消毒后，右手将针尖接近平行刺破表皮和血管壁，感觉无阻力时缓缓拉动注射器活塞（或接入真空管），血液便缓缓进入注射器内（或真空管内）。每只采集全血1.5mL～2.5mL。鸡皮和血管壁薄，应注意针尖斜面与角度倾斜大或力度大会刺破双层血管而发生血肿现象。采血完毕后，用干棉球紧压采血部位拔出注射器，持续压住采血部位1-2min，至不出血为止。

2.2 猪血样品的采集方法

2.2.1 猪耳缘静脉采血：站立保定，助手用力在耳根处捏压静脉的近心端，手指轻弹耳缘后，用酒精棉球反复涂擦耳静脉使血管怒张。将一次性采血器针头（或真空采血管针头）沿血管刺入，见有血液回流，缓慢抽取所需量血液或接入真空采血管。每头采集全血3ml-5ml，用棉球按压止血。

2.2.2 猪前腔静脉采血

2.2.2.1 选取合适的针头，由于猪的大小不同，前腔静脉的深浅不一样，要求使用的针头也不一样。针头太短，刺不到前腔静脉；针头太长，则可能刺穿前腔静脉，同样采集不到血液。

2.2.2.2 大猪用保定绳固定(站立保定)，要求尽可能把头吊得高一点，使猪的头颈与水平面呈30°以上角度，这样既方便采血人员察看采血部位，又使前腔静脉向外突出，静脉血充胀。30kg 以下的小猪，可由1-2 个工作人员抓起，倒立，后背紧靠在栏架上，还可以将猪仰卧保定，采血时将头尽量往下压，使静脉充分拉直。

2.2.2.3 抽血部位，猪前腔静脉在第一对肋骨间的胸腔入口处的气管腹侧面，由左右两侧颈静脉和腋静脉汇合形成。当小猪仰卧时第一肋骨与胸骨柄结合部的前侧方会出现两个凹陷窝，多于右侧凹陷窝进行采血。该血管在一周龄猪直径约5mm，成年猪约1cm 以上。越往头部越浅，但也越细；越靠胸部越粗，但越深。所以采血应选择适当的部位。小猪采血的部位太靠前，血管太小，很难扎中，而且扎中了也很难抽到血液，所以小猪的采血部位应稍靠后。中大猪和公母猪血管比较粗，往后太深，针头够不到血管，所以应略靠前。根据经验，30kg 以下的小猪应采两前肢与气管交汇处，公母猪和30kg 以上中大猪可选颈部最低凹处采血。20-30kg 左右的猪，采血的时候针的深度一般掌握在0.6-0.9cm。当针头刺入不见血液时,可以将针头左右或来回动一下，当看到针管内有血液时，说明已刺入血管，立即采血，采血完毕，局部消毒。

2.3 牛尾静脉采血

在日常对牛血样采集工作中，一般采取颈静脉采集。采取颈静脉采血，有诸多不利因素，危险性大，容易引起牛发惊，伤人等，特别是奶牛应激严重，引起产奶量减少。采取牛尾静脉采血法采集，牛尾神经相对迟钝，容易保定。

2.3.1 牛尾静脉采血部位 牛尾静脉位于牛尾腹侧面的中心线皮下位置，因离尾根大约20cm 处，静脉较粗且较浅，所以此处为采血最佳部位。

2.3.2 采血过程 助手将牛牵好，采血者左手托起牛尾巴，与水平线成45°角左右。在离尾根10cm 左右（第4、5 尾椎骨交界处）中点凹陷处，先用酒精棉球消毒，用右手将采血针针头垂直刺入（约1cm 深）、针头触及尾骨后再回抽1mm 抽血，每头采集全血3ml～5ml。采血结束，消毒并按压止血。

2.4 羊颈静脉采血

采用颈静脉采血方法，保定羊(侧卧)，使头部稍前伸并拉直，使静脉绷紧，对颈静脉局部进行剪毛、消毒，用左手手指在采血部位稍下方压迫静脉血管，使之充盈、怒张。右手持真空采血器针头，沿颈静脉沟与皮肤呈45°角由下向上方剌入，刺入皮肤血管内，见回血证明已刺入，松开压迫脉管的左手，接入真空采血管，采完后，用酒精干棉球压迫局部并拔出针头。

3 血液样品的分离与运送

3.1 血清的分离

3.1.1 可将采集到的血液保存在一次性注射器中自然析出血清，采血时将注射器活塞向后拉，留出1cm 左右的空隙，用针帽将针头盖上，防止污染，编号，将注射器针头朝下倾斜放好，待血样完全凝固后才能进行包装和运输，途中严禁振荡，以免溶血。

3.1.2 将血液样品放置在室温（20℃）0.5h 左右，待血液凝固后，用离心机1500-3000r/min 离心5-10min，取上清液置于另一离心管内。在离心管管盖或管壁上用防水记号笔做好标记。

3.1.3 析出的血清量较少时，可用100-300ul 的移液器吸取上清液置于另一离心管中，一份血清更换一个吸头，用记号笔在离心管编号。

3.2 血清的保存与解冻

分离，密封好的血清，应冷冻或冷藏保存。一般情况下，在5d 内测定的血清样品可放置于4℃的冰箱中冷藏保存。样品待检时间超过1 周的，-15℃以下低温冷冻保存。血清从低温冰箱取出后，最好经冰箱、室温、37℃水浴条件逐步均匀融解，血清应完全融解混匀后再用。血清不宜反复冻融，反复冻融会使血清中的脂蛋白和纤维蛋白变性，导致出现絮状沉淀物，血清的抗体效价降低。

3.3 血清的送检

如果血液样品能在24h 内送往实验室，可保存于4℃环境的保温箱内，如果24h 内不能抵达实验室时，样品必须冷冻处理后，并在低温下运送。运送途中防止样品泄漏，密封并加冰袋运送，防止暴晒。