灯盏花乙素含水类型及水分测定方法的研究*
2015-08-10李之恒杨兆祥
王 珺，张 伟△，李之恒，2，杨兆祥
（1.昆药集团股份有限公司药物研究院，云南 昆明650100； 2.云南中医学院药学院，云南 昆明650500）
灯盏花素是从菊科植物短葶飞蓬Erigeron breviscapus（Vant.）Hand.-Mazz.的干燥全草中提取分离得到的黄酮类化合物，其主要成分为灯盏花乙素[1-2]。现代药理研究表明，灯盏花乙素具有增加脑血流量，改善微循环；抑制血小板凝集、促进纤溶活性、抗血栓形成等作用[2-6]。临床上可用于治疗脑供血不足、脑出血所致后遗症、高粘脂血症、脑血栓、冠心病、心绞痛等疾病[7-9]。
本文对灯盏花乙素原料药的含水类型及水分测定方法进行了研究[10-15]。含量测定作为质量控制的关键指标，其一般以干燥品或无水物计，因此本文的研究内容对于弄清药物性质，合理选择其质控方法，科学制定质控限度具有指导意义。文章首先比较研究了3 种水分测定方法，结果表明灯盏花乙素可能含有结晶水，遂进行了含水类型及含结晶水个数的研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器
VD53 型真空干燥箱（BINDER）；CP225D 型分析电子天平（Sartorius）；XP205 型分析电子天平（METLER TOLIDO）；TitroLine KF 型卡式水分滴定仪（SCHOTT Instruments）；Empyrean 型X 射线粉末衍射分析仪（PANalytical）；Q500/Q5000 型热重分析仪（TA）；Q2000 型差示扫描量热仪（TA）；870 Titrino plus 型卡氏水分测定仪（Metohm）。
1.2 试药
灯盏花乙素（昆药集团股份有限公司药物研究院 提 供， 批 号：20121026、20121029、20121030、20130521、20130527、20130529）；单组元无吡啶型卡尔费休试剂（分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司，批号20120821）；HYDRANAL®-Composite 5 容量法单组元滴定剂（Fluka，批号SZBC1660V）。
2 方法与结果
2.1 水分测定方法研究
2.1.1 常温减压干燥法
取供试品约0.5g，精密称定，置五氧化二磷干燥器中，在常温（20～30℃）条件下，减压干燥至恒重，计算减失重量[1]。
2.1.2 60℃恒温减压干燥法
取供试品约0.5g，精密称定，置五氧化二磷干燥器中，在60℃恒温条件下，减压干燥至恒重，计算减失重量[16]。
2.1.3 卡氏水分（Karl Fischer Method，KF）
无水甲醇做溶剂，取供试品约50mg，精密称定，完全溶解，用卡尔·费休试剂滴定，记录滴定液体积。用水标定滴定度，计算水分[17]。
2.1.4 测定结果对比
3 批中试样品测定结果见表1：
表1 水分测定方法研究测定结果对比
卡式水分和恒温减压测得的水分值远高于常温减压，推测可能因前者测定吸附水和结晶水总和，而后者条件较温和仅测定吸附水。
2.2 含水类型研究
2.2.1 含水类型推断
联合采用热重分析（Thermogravimetric Analysis，TGA）、示差扫描量热法（Differential Scanning Calorimetry，DSC）、卡氏水分滴定法（Karl Fischer Method，KF）推断含水类型。测定参数分别为：TGA（样品盘：铝盘，敞开；温度范围：室温～300 °C；扫描速率：10°C/min；保护气体：氮气）；DSC（样品盘：铝盘，压盖；其余均同TGA）；KF（溶剂：无水甲醇）。
TGA 和卡式水分测定结果（见表2）表明加热情况下丢失的重量很可能来源于水。TGA 和DSC图谱（见图1）可见，60℃～200℃TGA 有一失重平台，对应DSC 中吸热峰，推断为丢失结晶水产生。
表2 TGA 和卡式水分测定结果
图1 TGA 和DSC 图谱
2.2.2 含结晶水的确证
在氮气保护下，对供试品在不同温度下进行XRPD 表征测定。
温度控制XRPD 测定参数（X 射线Cu，Kα，Kα1：1.540598Å、Kα2：1.544426Å，Kα2/Kα1 强度比例：0.50；X 射线光管设定：45 kV，40 mA；发散狭缝：自动；单色器：无；扫描模式：连续；扫描范围（°2Theta）3° ～ 40°；扫描步长（°2Theta）0.013；扫描时间：约4 min）
结果显示升温至50 °C 时未发生晶型变化，升温至150 °C 形成新的晶型，且该晶型在降温过程中进一步发生转变（见图2）；降至室温，暴露在实验室湿度二十分钟后，回到初始晶型（见图3）。晶型变化可能由脱去结晶水所致，因此推测供试品中含有结晶水，并且二水合物脱水后，在室温条件下不稳定，极易吸水重新转变回二水合物。
图2 升温和降温过程中的XRPD 图谱
图3 原始样品和降温放置后样品XRPD 图谱对比
2.2.3 含结晶水个数测定
恒温TGA 实验参数（温度范围：室温～250°C；重量变化速率：开始0.23%/min、停止0.01%/min；其余同TGA）。
结果见图4，样品分两步失水，低温脱去吸附水，高温脱去结晶水。3 批样品测定结果见表3，结晶水含量为7.21%；模拟计算灯盏花乙素含不同数量结晶水的理论结晶水含量见表4。对比可见供试品应为二水合物。
图4 恒温TGA 图谱
表3 3 批中试样品恒温TGA 测定结果
表4 结晶水个数和理论含量计算
3 讨论
由DSC 结果可见，升温至60℃即开始丢失结晶水，可印证60℃恒温减压干燥条件下结晶水已失去。60℃恒温减压干燥法测定的是结晶水和吸附水的总和，但该法测定效率低。卡式水分滴定法作为水分测定的首选方法[18]，考虑到测定效率及成本，对于该品种优选该方法。
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