微柱凝胶卡式法和试管抗人球蛋白法在新生儿ABO溶血三项试验中的效果观察

黄会金

[摘要] 目的 比较微柱凝胶卡式法和试管抗人球蛋白法在新生儿ABO溶血三项试验中的效果。 方法 选取本院2013年1月～2014年12月收治的临床拟诊的108例ABO母婴血型不合新生儿溶血病患者作为研究对象，分别采用微柱凝胶卡式法和传统试管法进行直接抗人球蛋白试验、间接抗人球蛋白试验、放散试验，并对检测结果进行对比分析。 结果 108例患者中，确诊102例，其中微柱凝胶卡式法所测得的抗体游离试验阳性率、直接抗人球蛋白试验阳性率、抗体放散试验阳性率、符合ABO-HDN者所占比例显著高于传统试管法，差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 微柱凝胶卡式法在新生儿溶血病诊断中的应用价值显著，且操作简单，耗时较短，值得临床推广应用。

[关键词] 微柱凝胶卡式法；抗人球蛋白；新生儿ABO溶血；临床检验

[中图分类号] R722.18 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2015）06（c）-0129-03

[Abstract] Objective To compare the effect of micro-column gel cards assay and anti-human globulin test in tube on three tests of neonatal ABO hemolysis. Methods 108 cases with neonatal hemolysis due to ABO blood group incompatibility of mom & infant from January 2013 to December 2014 in our hospital were selected as research object.The direct anti-human globulin test，indirect anti-human globulin test and elution test were carried out by micro-column gel cards assay and traditional tubing，the tested outcomes was compared and analyzed. Results Among 108 cases，102 cases were definitely diagnosed.The positive rate of antibody free test，direct anti-human globulin test，antibody elution test and the proportion of patients meeting the diagnosis of ABO-HDN by micro-column gel cards assay was higher than that by the traditional tubing method，with significant difference（P<0.05）. Conclusion Application vaule of microcolumn gel card method in the diagnosis of hemolytic disease of newborn is significant，and the operation is simple，time is short，it is worthy of clinical promotion and application.

[Key words] Micro-column gel cards assay；Anti-human globulin；Neonatal ABO hemolysis；Clinical inspection

新生儿溶血病（hemolytic disease of the newborn，HDN）是母婴血型不合导致的一种胎儿或新生儿免疫性溶血性疾病。引起HDN的危险因素较多，其中母婴ABO血型不合为主要因素。早期诊断、早期治疗对于降低本病的严重不良后果具有重要意义。本研究选取本院拟诊的ABO母婴血型不合HDN患者作为研究对象，分别采用微柱凝胶卡式法和试管抗人球蛋白法两种方法进行检测，探讨其在新生儿ABO溶血三项试验中的效果。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取本院2013年1月～2014年12月收治的临床拟诊的108例ABO母婴血型不合HDN患者作为研究对象，其中男56例，女52例；出生时间为0.5～8 d，平均（4.7±1.9） d。所有患儿在出生1～7 d内有黄疸、血红蛋白降低、贫血、高胆红素血症等症状出现，部分患儿同时伴有HDN。所有患儿家属均自愿参加临床研究并签署知情同意书。

1.2 仪器与试剂

微柱凝胶检测卡、试剂，标准A、B、O红细胞，37℃免疫微柱孵育器由长春博讯生物技术有限公司生产提供；单特异性抗-IgG、多特异性抗人球蛋白试剂、单特异性抗-C3购于上海血液中心。

1.3 方法

采集入选患者标本，分别应用传统试管法和微柱凝胶卡式法进行检测，具体方法如下。

1.3.1 传统试管法 分为直接抗人球蛋白试验、抗体游离试验、抗体放散试验3个部分进行，具体操作步骤为：将接受检查的红细胞采用生理盐水进行洗涤，共计3次，将其配制成浓度为3%～5%的红细胞悬液，然后选取1滴红细胞悬液，加入2～3滴广谱抗人球蛋白，在经过离心处理后，对检测的结果进行观察；另取3支同样规格的试管，分别标记为A、B、O，每管加入2滴患儿血清/放散液，按标记分别加入A、B、O试剂红细胞1滴，将完成上述操作的3个试管置于37℃条件下进行孵育，时间控制在1 h左右，孵育处理完成后，采用生理盐水进行反复彻底的清洗，一般3次左右，此时再加入2滴抗人球蛋白试剂，在经过离心处理后观察结果[4]。

1.3.2 微柱凝胶卡式法 ①直接抗球蛋白试验：采集静脉血并离心处理，对压积红细胞实施分离，采用生理盐水进行多次彻底洗涤之后，配制成0.5%红细胞悬液，并取50 μl加入微柱凝胶孔，在2000 r/min条件下离心5 min，对结果进行观察、判断，红细胞聚集在凝胶带的上部或中部位置可认定为检测结果阳性；②血清游离抗体试验：在微柱凝胶卡所显示的相应位置，分别加入50 μl的A、B、O红细胞和50 μl患儿血清，将上述标本置于37℃条件下进行孵育处理15 min左右，而后在2000 r/min条件下离心10 min，对结果进行观察，阳性结果判断与直接抗球蛋白试验相同；③释放试验：取500 μl经过4次洗涤的压积红细胞，置试管中加等量生理盐水，将上述试管置于56℃水浴中进行孵育处理10 min左右，然后在2000 r/min条件下进行5 min离心处理，将上清液作为放散液，在微柱凝胶孔上加入剂量为50 μl的标准A、B、O红细胞，然后加入50 μl放散液，在37℃条件下孵育15 min，在1500 r/min条件下离心3 min，对结果进行判断，阳性结果判断同上[5-6]。

1.4 观察指标

选择抗体游离试验阳性率、直接抗人球蛋白试验阳性率、抗体放散试验阳性率、符合ABO-HDN者所占比例等作为观察指标进行比较[7]。

1.5 数据处理

采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以x±s表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

108例患者中，确诊102例，其中微柱凝胶卡式法所测得的抗体游离试验阳性率、直接抗人球蛋白试验阳性率、抗体放散试验阳性率、符合ABO-HDN者所占比例显著高于传统试管法，差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

3 讨论

直接抗人球蛋白试验、间接抗人球蛋白试验、放散试验能够对新生儿血清中是否已经含有红细胞抗体或红细胞是否已经被致敏进行准确判断。临床研究显示，诱发新生儿ABO溶血的病因相对较多，早期诊断和治疗对于降低本病不良后果具有重要意义[8-9]，因此如何提高诊断的敏感性和特异性就显得尤为关键。目前临床上对新生儿ABO溶血的诊断多采用传统试管酶试验法，该操作步骤繁多，时间较长，重复性相对较差，易出现假阴性。相关研究显示，微柱凝胶卡式法在新生儿ABO溶血诊断中可发挥重要作用[10-12]。微柱凝胶卡式法是以传统血清学为基础，经过进一步研究建立起来的一项免疫学血型检测技术，主要包括抗凝胶柱过滤、抗原抗体反应、离心3部分。

本研究结果显示，在108例抽样患者中，确诊102例，其中微柱凝胶卡式法所测得的抗体游离试验阳性率、直接抗人球蛋白试验阳性率、抗体放散试验阳性率以及符合ABO-HDN者所占比例显著高于临床传统试管法，这与相关文献报道的结果基本一致[13-15]，提示微柱凝胶卡式法的准确性高于传统试管法。

综上所述，微柱凝胶卡式法在HDN诊断中的应用价值显著，且操作简单，耗时较短，值得临床推广应用。

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（收稿日期：2015-01-13 本文编辑：祁海文）