两种复方磺胺嘧啶混悬液体外等效性研究

李朋朋 张继颖 张 聪

(国家兽用药品工程技术研究中心,河南洛阳 471003)

两种复方磺胺嘧啶混悬液体外等效性研究

李朋朋 张继颖 张 聪

(国家兽用药品工程技术研究中心,河南洛阳 471003)

目的:为了评价自制复方磺胺嘧咤混悬液与进口制剂速服宁是否具有体外等效性。方法:通过测定不同时间点(5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min)两种制剂在四种溶出介质(pH=1.4、pH=4.5、pH=6.8及纯化水)中的累积溶出量,计算二者在不同介质中的相似因子(f2),考察二者体外溶出曲线的一致性,从而判断二者是否具有体外等效性。结果:自制复方磺胺嘧咤混悬液与速服宁在四种溶出介质中的溶出曲线具有一致性。结论:自制复方磺胺嘧咤混悬液与速服宁具有一致的体外溶出度表现,说明二者具有体外等效性。

复方磺胺嘧咤混悬液;溶出度;一致性

磺胺嘧啶是一种磺胺类抗菌药物，其抗菌谱较广，可用于革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和许多原核生物感染。甲氧苄啶属抗菌增效剂，其抗菌谱与磺胺类相似而效力较强。复方磺胺嘧啶混悬液是磺胺嘧啶和甲氧苄啶的复方制剂，它不仅能提高疗效，缩短疗程，同时还能减少耐药菌株产生，兽医临床上主要用于防治鸡大肠杆菌、沙门氏菌感染[1]。

仿制制剂与参比制剂的溶出曲线相似并不意味着二者一定具有生物等效性，但该法可降低二者出现临床差异的风险。本文通过4种介质溶出曲线的研究，采用合理数据分析，充分证明仿制制剂（洛阳惠中兽药有限公司研制的复方磺胺嘧啶混悬液）与参比制剂（法国维克制药集团生产的速服宁）的体外溶出曲线具有同等性。

1 材料与方法

1.1 器材

溶出度测定仪，型号：RC-8DS，天津市新天光技术开发有限公司；透析袋，规格8000-14000；高效液相色谱仪，型号：e2695，美国Waters公司；酸度计，型号：SenenEasy，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；电子分析天平，型号：Ab-265S，梅特勒-托利多集团公司。

1.2 药品与试剂

速服宁，批号：4EUV，规格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧苄啶8g，法国维克制药集团；

复方磺胺嘧啶混悬液，批号：20140901，规格：100ml：磺胺嘧啶40g+甲氧苄啶8g，洛阳惠中兽药有限公司；

盐酸、冰醋酸、醋酸钠、磷酸二氢钾、氢氧化钠、吐温80等均为分析纯。

1.3 试验方法

1.3.1 溶出介质

各溶出介质[2]及配制方法见表1。

表1 溶出介质

1.3.2 半透膜前处理

将透析袋剪成10cm段，用纯化水洗涤后煮沸10min，冷却后放4℃保存，做为试验用半透膜。

1.3.3 体外溶出度试验方法

精密称取1g速服宁与自制复方磺胺嘧啶溶液，分别置透析袋中，并加入9ml溶出介质，透析袋两端用透析夹夹紧，放入已预热至37℃的溶出介质中，溶出介质体积为900ml，搅拌桨转速为100r/min，分别于5、15、30、60、90、120、180、240、300、360min（pH1.4的溶出介质采样时间点为5、15、30、60、90、120min）取样1ml，高效液相色谱法测定磺胺嘧啶含量。

1.3.4 色谱条件

Agilent HC-C18（150×4.5mm，5μm）色谱柱；以0.025mol/ L磷酸溶液-乙腈-甲醇=70：25：5为流动相；流速0.75ml/min；检测波长235nm；柱温30℃；进样量10μl。

各时间点采集的样品过滤，精密量取10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取磺胺嘧啶对照品，制成浓度为0.16mg/ml的溶液，精密量取10μl，注入液相色谱仪。以外标法按峰面积计算样品中磺胺嘧啶的含量。

1.3.5 溶出曲线相似性的比较与判定

自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁溶出曲线相似性的比较用非模型依赖法中的相似因子（f2）法，将自制复方磺胺嘧啶混悬液中磺胺嘧啶的平均溶出量与速服宁中磺胺嘧啶的平均溶出量进行比较，计算公式如下。

Rt为t时间参比制剂平均溶出量；Tt为t时间仿制制剂平均溶出量；n为取样时间点的个数。

自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁的溶出曲线只要满足下列（1）中任何一个评判标准[3]，即可判定二者的溶出曲线具有“相似性”，但至少在其中的一个溶出介质中，参比制剂在规定的时间内平均溶出率达85%以上；只要满足下列（2）中的任何一个评判标准，即可判定二者溶出曲线具有“同等性”。

（1）相似性

参比制剂在规定时间内平均溶出率达85%以上时，f2因子大于42；

参比制剂在规定时间内平均溶出率达50%以上但未达85%时，f2因子大于46；

参比制剂在规定时间内平均溶出率未达50%时，f2因子大于53；

（2）同等性

参比制剂在规定时间内平均溶出率达85%以上时，f2因子大于50；

参比制剂在规定时间内平均溶出率达50%以上但未达85%时，f2因子大于55；

参比制剂在规定时间内平均溶出率未达50%时，f2因子大于61；

2 结果与分析

自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁在四种溶出介质中的溶出试验结果见表2，二者在四种溶出介质中溶出曲线的相似性判定结果见表3。复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁中磺胺嘧啶在四种溶出介质中的溶出曲线见图1。

表3 自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁的溶出曲线在四种介质中的相似性判定结果

由试验结果可知，复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁中磺胺嘧啶在pH=6.8的溶出介质中，溶出曲线具有相似性，在其余三种溶出介质中，溶出曲线均具有同等性，因此二者体外具有等效性。

3 讨论

3.1 加药方法设计

自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁均为混悬液体制剂，不能将药物直接加入溶出杯中，因此采用半透膜法，将混悬液加入透析袋内，通过测定一定时间内从透析袋中扩散出的药量来考察两制剂的溶出度，结果表明该方法可用于检测混悬剂的溶出度。

3.2 溶出介质及转速的选择

《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》中提到在多种介质中至少要有一种溶出介质中的溶出量要达85%以上，在前期试验摸索过程中，磺胺嘧啶在四种溶出介质中的溶出量均达不到规定。之后尝试通过添加表面活性剂及酶物质来提高溶出量，结果显示溶出介质中加入酶物质未能提高磺胺嘧啶的溶出量，而加入0.05%的吐温-80后溶出量提高了56.6%，之后调整搅拌桨转速为100r/min，在纯水中溶出6h后，磺胺嘧啶的溶出量可达87.2%，大于85%，符合上述指导原则规定，因此选定的溶出介质及搅拌桨转速可用于测定自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁溶出曲线的测定。

3.3 体外等效性评价方法探索

仿制药是与被仿制药具有相同的活性成分、剂型、给药途径和治疗作用的替代药品，能降低用药成本，提高药物普及性及社会经济效益。国内制剂与国外参比制剂无论在原料来源还是工艺上都有一定的差异，因此进行二者的等效性评价能确保自研制剂的有效性与安全性，在制剂效果不明确的情况下直接进行动物体内的生物等效性评价易造成试验失败及浪费，若能在生物等效性之前用体外的方法评价二者的等效性，可以提高制剂研究的成功率及工作效率，但此部分工作仍无明确标准指导，因此笔者参考人用普通口服固体制剂的评价方法[4][5]，通过对比溶出曲线的一致性，对自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁进行了体外等效性评价，结果显示二者具有体外等效性。但这并不意味着其生物等效，需要进一步进行生物等效性研究。

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[3] 李昌亮，马晓宁.对布洛芬颗粒溶出度一致性评价的探索[J].中南药学，2013，11（10）：770-772.

图1 自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁在四种溶出介质中的溶出曲线

表2 自制复方磺胺嘧啶混悬液与速服宁在四种溶出介质中的溶出率结果

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