泽泻配方颗粒中23-乙酰泽泻醇B的含量测定

蔡洪玲 陈福

·调查研究·

泽泻配方颗粒中23-乙酰泽泻醇B的含量测定

蔡洪玲 陈福

目的 调查国内6个厂家的泽泻配方颗粒中23-乙酰泽泻醇B的含量。方法 采用高效液相色谱法测定，选用SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)色谱柱，流动相以乙腈-水等梯度洗脱，流速：1.0 mL/min，检测波长为208 nm，柱温：30 ℃。结果 6个厂家的23-乙酰泽泻醇B分别为：0.175 6、2.074 9、0.220 1、0.438 6、0.112 5、0.190 7 mg/g。结论 6个厂家的泽泻配方颗粒中23-乙酰泽泻醇B的含量差异显著。

泽泻；配方颗粒；高效液相色谱法；23-乙酰泽泻醇B；含量

中药配方颗粒是以中医药理论为指导，运用现代生产技术手段，取传统中药饮片为原料，依据多方研究形成的生产工艺制成供临床调剂使用的粉状或颗粒状产品。配方颗粒是中药饮片改革的一种新形式，具有服用、携带、贮藏、组方方便等特点[1]，在临床上得到越来越多人的认可。泽泻为泽泻科穿心莲属植物泽泻Alisma orientalis(Sam.)Juzep.的干燥块茎，为《中国药典》所收载品种[2]，福建省地道中药材，具有利水渗湿，泄热通淋之功效。现代医学研究，泽泻还具有降低血清总胆固醇及三酰甘油含量，减缓动脉粥样硬化形成等现代运用。23-乙酰泽泻醇B(C32H50O5)是从中药泽泻中分离出的主要有效成分，也是泽泻的专属性物质之一[3]。在道地药材中含量较高，可作为其提取工艺及相关制剂的主要质控指标。目前，国内已有6家企业生产泽泻配方颗粒，但对6个厂家生产的泽泻配方颗粒质量评价的研究尚未见诸公开文献，为促进泽泻配方颗粒的评价质量体系建立，收集了6个厂家泽泻配方颗粒，并对配方颗粒中23-乙酰泽泻醇B含量进行了测定。

1 仪器、材料与试剂

1.1 仪器 e2695型高效液相色谱分析仪，美国Waters公司；2998型二极管阵列检测器，美国Waters公司；超声波清洗仪，昆山市超声仪器有限公司。

1.2 材料与试剂 23-乙酰泽泻醇B对照品(中国食品药品研究院，批号111846-201203)；乙腈(色谱纯Merck)，甲醇(色谱纯国药集团化学试剂有限公司)；水为纯净水。泽泻配方颗粒分别购自北京康仁堂药业有限公司，批号13000881；江阴天江药业有限公司，批号1304054；华润三九医药股份有限公司，批号1310001S；广东一方制药有限公司，批号1306044；培力香港集团附属培力(南宁)药业有限公司，批号A1300596-02；四川新绿色药业科技发展股份有限公司，批号12012297。

2 方法与结果

2.1 高效液相色谱条件 色谱柱：SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(70∶30)；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：208 nm。

2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取置五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的对照品适量，用甲醇溶解并定容于10 mL棕色容量瓶，得到浓度为238 μg/mL的对照品溶液，冷藏，避光备用。

2.3 供试品溶液的制备 精密称取各厂家泽泻配方颗粒0.20 g，用少许甲醇研磨并超声20 min完全转移至10 mL容量瓶内，甲醇定容后，－20℃冷冻20 min，4 000 r/min离心15 min，除去不溶物，上清液用0.22 μm微孔滤膜过滤后进样。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液0.1、0.5、1、4、8、10、12、20 μL进样。以色谱峰面积(Y)对进样量μg(X)进行线性回归，绘制标准曲线(图1)。回归方程为y＝943 278.9x－21 644.3，R2＝0.999 7。结果表明进样量在0.023 8～4.76 μg范围内与峰面积线性关系良好。

2.4.2 系统适用性试验 在上述色谱条件下分别进样23-乙酰泽泻醇B对照品溶液以及供试品溶液。色谱图(图2～3)。结果显示23-乙酰泽泻醇B分离度、峰型较好，专属性强。

2.4.3 精密度考察 精密吸取同一对照品溶液，在上述色谱条件下，连续进样5次，记录峰面积，并计算峰面积RSD。结果23-乙酰泽泻醇B的峰面积RSD为0.96%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 重现性考察 取同一批药材制备的提取物，按照“供试品溶液制备方法”平行制备5份供试品液，在上述色谱条件下分析测定，计算23-乙酰泽泻醇B含量，含量RSD为1.09%，表明本法重复性良好。

2.4.5 回收率考察 采用加样回收率方法，取已知含量的泽泻配方颗粒0.20 g，精密称定9份，平均分成3组，分别加入低、中、高3个浓度的对照品溶液，相当于含量的80%、100%、120%，按“供试品溶液制备方法”制备，在上述色谱条件下测定，各成分回收率在99.92%～102.69%，RSD为1.42%。结果(表1)。

2.4.6 样品含量测定 按“供试品溶液制备方法”各制备供试品3批，在上述色谱条件下测定，记录色谱峰面积，按照外标法计算23-乙酰泽泻醇B的含量。结果(表2)。

图1 23-乙酰泽泻醇B标准曲线图

图2 对照品溶液23-乙酰泽泻醇B色谱图

图3 供试品溶液中23-乙酰泽泻醇B色谱图

表1 加样回收率试验结果(n＝3)

表2 样品测定结果(n＝3)

3 讨论

由于6个厂家的每克配方颗粒相当于原药材饮片的当量不尽相同，因此在对6个厂家的泽泻配方颗粒中的23-乙酰泽泻醇B的含量进行比较时，对每克原药材饮片所提取的23-乙酰泽泻醇B的含量进行了换算，结果表明：6个厂家样品的23-乙酰泽泻醇含量差异显著，含量最低与含量最高的差异可达10多倍(表2)，这可能与6个厂家的泽泻原药材饮片选取有关，23-乙酰泽泻醇B的含量可能也受到了泽泻种子、产地、采收季节、储存时间等方面的影响[4]，建议相关厂家对原材料应进行严格的质量把关，选取优质药材原料从而保证配方颗粒的优质。

《中国药典》2010版规定泽泻饮片含23-乙酰泽泻醇B(C32H50O5)不得少于0.040%。从本研究的结果看，6个厂家泽泻配方颗粒中的23-乙酰泽泻醇B转移率均不高；观察6个厂家的泽泻配方颗粒的性状，也有差异，提示不同厂家的生产工艺可能有所不同，这是导致23-乙酰泽泻醇B含量差异的重要原因。传统中药以水煎为主，配方颗粒是一种新型剂型，不同的生产工艺对成分的溶出率也不同，泽泻除了含有以23-乙酰泽泻醇B为主的三萜类化合物，还含有泽泻醇和环氧泽泻烯等倍半萜、二萜类化合物及其他有效成分[5]，中药的功效是综合功效，随着泽泻临床应用的新发展，配方颗料的质量标准应该考虑哪些成分，如何规范生产工艺，保证临床用药的均一性，是广大中药工作者研究的一个方向。

[1]蔡乐，刘萍，郭桂明，等.不同厂家茜草配方颗粒中大叶茜草素含量的比较[J].北京中医药，2011，30(11)：856-858.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社，2010：212-213.

[3]肖飞艳，冯育林，杨世林，等.泽泻化学成分的研究进展[J].中药新药与临床药理，2009，20(5)：491-495.

[4]郭改革，李长伟，黄振军，等.种子与生态环境对泽泻块茎23-乙酰泽泻醇B含量的影响[J].中国中医药现代远程教育，2009，7(12)：63-64.

[5]邱美榕，马少丹，阮时宝.泽泻汤组成药物化学成分的研究现状[J].中国中医药现代远程教育，2013，11(22)：119-120.

Objective To investigate the content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers.Methods High performance liquid chromatography(HPLC)was adopted to determine the content；Chromatographic column was SunFireTM-C18(250 mm×4.6 mm)；The mobile phase was gradiently eluted by acetonitrile and water with a flow rate of 1.0 mL/min；The detection wavelength was 208 nm and the column temperature was 30℃.Results The content of Alisol B 23-acetate from six domestic manufacturers was respectively 0.175 6，2.074 9，0.220 1，0.438 6，0.112 5，and 0.190 7 mg/g.Conclusion The content of Alisol B 23-acetate in formula granule of Rhizoma Alismatis from six domestic manufacturers was significantly different.

Rhizoma Alismatis；Formula Granule；HPLC；Alisol B 23-acetate；Content

2014-09-05)

1005-619X(2015)02-0183-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.02.035

350011福建省金鸡山温泉疗养院(蔡洪玲)；350003 福建省中医药研究院门诊部药房(陈福)

蔡洪玲