Trop-2在结直肠癌组织中的表达及其意义

乔 宇，赵 鹏，陈 适，刘春辉，张国志

(河北联合大学 附属医院 普通外科，河北 唐山 063000)



研究论文

Trop-2在结直肠癌组织中的表达及其意义

乔 宇，赵 鹏，陈 适，刘春辉，张国志*

(河北联合大学 附属医院 普通外科，河北 唐山 063000)

目的探讨人滋养层细胞表面抗原-2(Trop-2)在结直肠癌中的表达及其意义。方法用免疫组化法检测84例结直肠癌组织标本及其相对应的癌旁正常组织中的Trop-2表达情况，分析其表达与临床病理特点的关系，进一步采用Western blot检测34例手术标本的Trop-2表达情况。结果Trop-2在结直肠癌组织中的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)；Trop-2表达量：直肠癌(RC)组﹥左半结肠癌(LSCC)组﹥右半结肠癌(RSCC)组(P<0.05)，Dukes’ C+D组﹥A+B组(P<0.05)，淋巴结转移组﹥无淋巴结转移组(P<0.05)，远处转移组﹥无远处转移组(P<0.05)；与性别、年龄、分化程度无关。结论Trop-2在结直肠癌组织中高表达，与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移和肿瘤所在部位有关。

结直肠癌；Trop-2

Trop-2亦称作肿瘤相关钙信号传导蛋白-2(tumor-associated calcium signal transducer 2，TACSTD2)，最早发现表达于滋养层上皮细胞，在胚胎发育过程中有重要作用， 随着对其研究的深入，Trop-2在多种上皮来源的肿瘤组织中高表达，但在相对应的正常组织中却几乎无表达[1- 3]。越来越多的研究表明，Trop-2在肿瘤细胞增殖和侵袭方面具有重要作用，并对肿瘤预后有提示作用[4]。结直肠癌在全球男性发病率中居第3位，女性中居第2位，在中国发病率也逐年上升，且呈现年轻化的趋势，威胁着广大人民的生命健康[5]。本实验对Trop-2在结直肠癌中的表达情况进行相关研究，旨在为结直肠癌的诊断与治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般材料

收集2012年10月至2014年10月于河北联合大学附属医院普外科及肿瘤科行结直肠癌根治手术治疗术中切除的结直肠癌标本34例，并满足以下条件：1)散发性初诊结直肠癌；2)术前未进行任何放疗、化疗及生物免疫治疗；3)住院期间行结直肠癌根治术，术后病理检查切缘阴性；4)具有完整的临床住院及相关检查资料。术中肿瘤离体后迅速剪取肿瘤所在部位及距肿瘤组织5cm以上癌旁肠管全层组织(后经病理证实为正常肠组织，作为对照组)，冻存于-80℃。并于河北联合大学附属医院病理科调取2009年7月至2012年7月的结直肠癌病理蜡块标本50例。84例中：男性40例，女性44例；年龄28～85岁，平均年龄59岁；左半结肠癌36例，右半结肠癌24例，直肠癌24例；高分化型49例，中分化型23例，低分化型12例；Dukes A、B期36例，C、D期48例；淋巴结转移43例，无淋巴结转移41例。所有病理标本切片均由两名高年资病理科专职医师双盲情况下进行诊断及分期，肿瘤分期参照2013版美国结直肠癌诊疗指南(NCCN)。标本采集及使用由河北联合大学附属医院伦理委员会批准通过，手术患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂：兔抗人TACD2多克隆抗体(Abcam公司)；β-tubulin抗体(CST公司)；HRP标记山羊抗兔及兔抗鼠抗体(碧云天生物技术研究所)；鼠抗人免疫组化试剂盒(四正柏生物科技有限公司)。

1.2.2 免疫组化：采用S-P法进行染色，一抗为兔抗人TACD2多克隆抗体。自身对照作为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.2.3 结果判定：分别由两名高年资病理科专职医师双盲情况下完成。高倍镜下观察，根据已染色的阳性肿瘤细胞数目所占百分比计分：阴性计0分，阳性细胞百分比<10%计1分，10%<阳性细胞百分比<49%计2分，50%<阳性细胞百分比<79%计3分，阳性细胞百分比≥80%计4分；根据染色强度计分：无着色计0分，弱阳性计1分，中等阳性计2分，强阳性计3分；总得分为以上两项分数之积(0～12分)，认定总得分≥4分为Trop-2阳性表达。

1.2.4 Western blot：提取组织的蛋白质样品进行蛋白定量，等量总蛋白经SDS-PAGE电泳，半干电转移法到PVDF膜，脱脂奶粉封闭，兔抗人TACD2多克隆抗体(1∶1 000)4 ℃孵育过夜，HRP标记山羊抗兔抗体(1∶1 000)室温孵育2 h后暗室显影，Image J软件进行图像分析，Trop-2条带吸光度值除以相对应的β-tubulin条带吸光度值作为Trop-2蛋白的相对表达量。

1.3 统计学分析

采用SPSS13.0统计软件对所得数据进行分析处理，计量资料采用独立样本t检验和单因素方差分析，多重比较采用SNK法，计数资料采用卡方检验。

2 结果

2.1 免疫组化检测Trop-2在结直肠癌组织中的表达情况

Trop-2主要表达于癌组织细胞的细胞膜上，偶可见细胞质内弱阳性表达。在癌组织细胞膜上可见到较多的棕色颗粒，但是在相对应的正常结直肠组织极少见到棕色颗粒(图1)。Trop-2在癌组织中的阳性表达率为47.6%(40/84)，癌旁正常组织为8.8%(3/34)。结直肠癌组织Trop-2阳性表达率高于癌旁正常组织(χ2=8.490)(P<0.01)。

2.2 Western blot检测Trop-2在结直肠癌组织中表达情况

Trop-2在癌组织中的表达明显要高于癌旁正常组织(P<0.05)(图2)，同时可见Trop-2表达量Dukes’ C+D组﹥A+B组(P<0.05)(图2)，RC组﹥LSCC组﹥RSCC组(P<0.05)(图3)，淋巴结转移组﹥无淋巴结转移组(P<0.05)，远处转移组﹥无远处转移组(P<0.05)(图4，表1)。

A.tumor-adjacent normal tissue; B.colorectal cancer tissues

*P<0.05 compared with normal group; #P<0.05 compared with Dukes’ A+B group图2 Western blot检测不同Duke分期结直肠癌及癌旁正常组织中的Trop-2Fig 2 Western blot analysis of Trop-2 expression in colorectal cancer tissues in different Dukes’ stages and corresponding tumor-adjacent normal tissues

*P<0.05 compared with RSCC group; #P<0.05 compared with LSCC group图3 Western blot检测不同部位结直肠癌组织中的Trop-2Fig 3 Western blot analysis of Trop-2 expression in colorectal cancer tissues in different tumor sites

图4 Western blot检测不同淋巴结转移和远处转移情况下结直肠癌组织中的Trop-2Fig 4 Western blot analysis of Trop-2 expression in colorectal cancer tissues in lymph node metastasis and distant metastasis

groupTrop-2lymphnodemetastasis(n=10)distantmetastasis(n=7)negative 0.51±0.15 0.44±0.15positive 0.96±0.06* 0.92±0.11*

*P<0.05 compared with negative group.

2.3 Trop-2表达与结直肠癌临床病理特点的关系

Trop-2的阳性表达率随着Dukes分期的升高而升高(χ2=5.155)(P<0.05)，淋巴结转移患者Trop-2阳性表达率高于无淋巴结转移患者(χ2=3.909)(P<0.05)，有远处转移的患者高于无远处转移的患者(χ2=4.677)(P<0.05)(表2)。Trop-2表达与患者性别[男性(17/40, 42.5%)，女性(23/44, 52.3%)]，年龄[≤50岁(11/18, 61.1%)，>50岁(29/66, 43.9%)]和分化程度[高分化(27/49, 55.1%)，中分化(8/23, 34.8%)，低分化(5/12, 41.7%)]无关(P>0.05)。

表2 Trop-2表达与结直肠癌临床病理特点的关系

*P<0.05 compared with Dukes’ A+B stage;#P<0.05 compared with negative.

3 讨论

结直肠癌是一个极其复杂的多因素参与的多基因调控出现异常的疾病[6]。病理学检查对总体生存率没有明显改善作用[7]，因此，研究结直肠癌早期诊断、评估预后的新型特异标志物具有重要意义。研究发现，Trop-2在结直肠癌等上皮来源肿瘤细胞中呈高表达状态[3,8]。随后对其基因的研究证实Trop-2高表达的肿瘤细胞中几乎都有端粒酶过表达的情况，这可能是肿瘤发生发展的最根本机制[9]。

研究者已对Trop-2表达与临床病理特点的关系进行了研究，但结论尚存部分异议[10- 11]。本实验通过对所搜集病历的一般资料分析及免疫组化和Western blot检测，验证了结直肠癌组织中Trop-2蛋白的表达明显高于其相对应正常组，与性别、年龄、分化程度无关，而与淋巴结转移、远处转移、Dukes分期有关，提示对结直肠癌的转移及预后有一定的提示作用。

已有研究从mRNA水平证明Trop-2在LSCC中表达高于RSCC[10]。本研究进一步从蛋白水平证明Trop-2在结直肠癌中表达量呈RC>LSCC>RSCC。胚胎发育时期的中肠分化为十二指肠下段至横结肠右2/3部；后肠分化为横结肠左1/3部至肛管上段，肛管下段的上皮来自外胚层，不同起源可能决定了其在癌症发生发展的不同。亦有研究发现结肠癌可能至少存在两条致癌途径，RSCC的表观遗传学途径表现为CpG岛甲基化表型(+)/微卫星不稳定性，LSCC癌表现为CpG岛甲基化表型(-)/微卫星稳定性，染色体不稳定性，从另一个方面说明遗传异质性也可能决定结直肠癌表型的异质性[12]。

本次研究结果表明，Trop-2在结直肠癌组织中高表达，且与Dukes分期、淋巴结转移、远处转移、肿瘤所在部位有关，可能成为将来诊断治疗结直肠癌的一个有效靶点。

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Expression of Trop-2 in colorectal cancer and its significance

Objective To explore the trophoblast cell surface antigens 2 (Trop-2) expression and significance in colorectal cancer. Methods Trop-2 expression was detected with immunohistochemistry in 84 colorectal cancer tissue samples and corresponding tumor-adjacent normal tissues. We analyzed the relationship between Trop-2 expression and clinic pathological features of colorectal cancer. We also detected 34 surgical specimen with Western blot to analyze the Trop-2 expression of colorectal cancer. Results Trop-2 expression was higher in colorectal cancer tissue samples than that in corresponding tumor-adjacent normal tissues (P<0.05). Trop-2 expression was higher in rectal cancer than that in left-sided and right-sided colon cancer (P<0.05). Colorectal cancer with higher Dukes’ stage or lymph node metastasis and distant metastasis, the Trop-2 expression was higher than that in corresponding tissues (P<0.05). All these findings were not related to age, gender and degrees of differentiation. Conclusions Trop-2 is highly expressed in colorectal cancer, which is closely related to Dukes’ stage, lymph node metastasis, distant metastasis and the tumor site.

colorectal caner; Trop- 2

2014- 12- 16

2015- 01- 23

1001-6325(2015)06-0802-05

R735.3

A

QIAO Yu, ZHAO Peng, CHEN Shi, LIU Chun-hui, ZHANG Guo-zhi*

(Dept. of General Surgery, the Affiliated Hospital, Hebei United University, Tangshan 063000, China)

*通信作者(corresponding author)：lonerqy@qq.com