胸腹水液基细胞学剩余标本制作细胞块的不同方法探讨

2015-07-19李婕

现代医药卫生 2015年20期

关键词：胸腹离心管离心机

李婕

（彭州市人民医院病理科，四川611930）

胸腹水液基细胞学剩余标本制作细胞块的不同方法探讨

李婕

（彭州市人民医院病理科，四川611930）

目的探讨胸腹水液基细胞学剩余标本制作细胞块的不同方法，优化其程序。方法选择110例胸腹水薄层液基细胞学技术（TCT）检测剩余标本，根据细胞学诊断结果将标本分为A组和B组，每组55例。A组采用直接离心法处理后制作石蜡细胞块，B组采用细胞块试剂盒法处理后制作石蜡细胞块，统计2种不同方法细胞切片恶性细胞的检出率。结果110例胸腹水TCT检测出恶性细胞率为32.73%（36/110），剩余标本经细胞块法检测出总恶性细胞检出率为45.45%（50/110）；以直接离心法恶性细胞检出率为38.18%（21/55），细胞块试剂盒法恶性细胞检出率为52.73%（29/55），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）；细胞聚集度及细胞分布细胞块试剂盒法优于直接离心法。结论细胞块试剂盒法与直接离心法比较，前者明显可以提高胸腹水液基细胞学剩余标本的恶性细胞检出率，同时可用于免疫细胞化学的检测。

胸腔积液；腹水；细胞学技术；标本；标本制备

胸腹水的细胞学检查时病理科室日常检查工作的其中之一，检测时常常采用离心涂片后进行HE染色后进行镜检[1]。在常规涂片检查中会存在着细胞的重叠，细胞的成分较少，因此会导致检测结果的检出率偏低，而常规涂片难以进行细胞免疫组织化学染色。传统的细胞学制片存在一定的缺陷，给细胞学诊断的成功率造成影响，本院采用了液基细胞学制片及细胞块试剂盒制片联合应用，取得了一定的效果。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 110例胸腹水薄层液基细胞学技术（thinprep cytologic test，TCT）的剩余标本收集于2014年7月至2015年1月本院病理科室；95%乙醇溶液（购于江苏生物科技股份有限公司，生产批号：20140627）。台式低速离心机（河北白洋淀安新县离心机厂），Tissue-Tek VIP 6Jr 5784型脱水机器（Sakura Finetek Japan Co.Ltd），Tissue-TekTEC5石蜡包埋机器（Sakura Finetek Japan Co. Ltd），CBT（细胞块包埋）机器（济南器械医疗公司）。

1.2 方法

1.2.1 试验分组 110例胸腹水TCT剩余标本[其中CTC检测出恶性细胞率为32.73%（36/110）]，根据细胞病理学的诊断结果，将剩余标本分为A组和B组，每组55例。各组中A组和B组中TCT法检出的恶性细胞数量分别为19例、17例。

1.2.2 制作方法

1.2.2.1 A组（直接离心法） TCT剩余标本采用直接离心方法进行，将剩余标本采用微量加样器移至离心管中，采用低速离心机离心3 min后，将上清液弃去后，将5倍体积的95%乙醇溶液沿着离心管壁缓缓加入，进行3～5 min的凝固[2]，再次放置于低速离心机中，2 500 r/min，离心5 min，离心半径为8.0 cm。进行1～2 h的固定后采用擦镜纸将离心管包好后放入包埋盒内，处理方式同常规组织病理检查标本。

1.2.2.2 B组（细胞块试剂盒法）采用细胞块试剂盒法进行检测，TCT剩余标本通过微量移液器将标本移入离心管中，放置于低速离心机中进行离心，离心时间为3 min，机器静置后将离心管中的上清液弃去后，加入细胞块试剂A试剂，混合均匀后常温静置15 min后，放入低速离心机，2 500 r/min，进行离心5 min，离心半径为8.0 cm。离心机静置后将离心管中的上清液再次弃去，将等量的B试剂液加入到离心管中，吹打均匀后，加入等量的C试剂液，用手指弹击试管，直到离心管中析出细胞标本的絮状物质，再次放入低速离心机中，2 500 r/min，进行5 min离心（离心半径为8.0 cm），再次将上清液弃去，采用擦镜纸包好后放入包埋盒内，其处理方式均同常规组织病理检查标本。

1.2.3 HE染色和免疫组织化学法染色免疫组织化学试剂盒购于上海基因科技有限公司。2种细胞块进行常规的脱水、进行石蜡包埋后，进行连续切片，切片厚度为3.0～5.0 μm，进行常规HE染色，免疫组织化学法染色采用En Vision Plus法，常规采用AE1/3、TTF-1和P53抗体[3]。

1.2.4 观察指标 2种方法制作细胞块检测结果比较由本院资深的病理医师进行切片的观察、检测，与TCT细胞学检测结果进行比较，对有细胞及组织病理学检查的病例对其免疫组织化学染色结果进行比较。

1.3 统计学处理应用SPSS17.0统计学软件进行数据分析，恶性细胞的检出率比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

110例胸腹水TCT检测出恶性细胞率为32.73%（36/110），剩余标本经细胞块法检测出总恶性细胞检出率为45.45%（50/110）；以直接离心法恶性细胞检出率为38.18%（21/55），细胞块试剂盒法恶性细胞检出率为52.73%（29/55），两组比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两种细胞块制片恶性细胞数量的检出率比较[n（%）]

3 讨论

胸腹水细胞学检查对肿瘤的诊断、鉴别诊断和预后的观察具有更加重要的临床意义[4]。普通的直接离心涂片是常用的胸腹水细胞检测方法，但近几年来TCT及其他方式均普遍应用于日常的病理诊断检测中[5]。TCT主要采用液基薄层细胞检测系统对细胞进行检测同时进行细胞学分类的诊断，但是对疑似肿瘤标本，可疑和高分化的癌细胞、反应性间皮细胞以及间皮瘤等鉴别准确率较低，只能采用免疫组织化学方法的进行深入的检查。

TCT检测后标本会保存一段时间后丢弃，剩余的标本中有大量的细胞，对剩余胸腹水标本进行进一步处理后可以对标本进行多次利用，收集的脱落细胞制成的石蜡包块有组织学优点。细胞块石蜡切片同时可以用免疫组织化学染色法对肿瘤细胞进行标记，可以提高胸腹水细胞诊断的准确率，对预后的判断具有一定的临床意义[6-10]。细胞块技术主要将样品进行离心，细胞以及微小组织块被高度浓缩后进行了凝聚和固定，进行脱水及石蜡包埋后制成切片，染色后进行测定，细胞块均匀，区域密集度均良好，恶性细胞的检出率较高。本研究结果也表明，采用细胞块试剂盒方法对恶性细胞的检出率高于直接离心后恶性细胞的检出率（P＜0.05）。

综合上述，合适的细胞块制作方法，对恶性细胞检出率较为重要，本院采用了细胞块试剂盒方式职称细胞块用于检测，其恶性细胞检出率较高，方法操作简单，检测结果明显，值得临床病理检测中应用。

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10.3969/j.issn.1009-5519.2015.20.039