小鼠腹腔注射敌百虫的半数致死量研究

周启武　彭泽琴　王翠颖等

摘要[目的]了解敌百虫对哺乳动物的半数致死量。[方法]采用改良寇氏法研究力高峰牌精制敌百虫粉（四川拜耳，含量33.3%）对昆明系小鼠的半数致死量（LD50）及其95%的可信限。[结果]敌百虫对小鼠的LD50为640.0 mg/kg，95%的可信限为592.5～687.5 mg/kg，且小鼠中毒死亡率（数）与敌百虫对数剂量（剂量）显著相关。[结论]试验结果为敌百虫的安全使用提供了理论依据。

关键词敌百虫；昆明系小鼠；半数致死量；毒性反应

中图分类号S856.9文献标识码A文章编号0517-6611（2015）07-107-02

LD50 of Trichlorfon by Intraperitoneal Injection to Mice

ZHOU Qi-wu， PENG Ze-qin， WANG Cui-ying et al

（Lincang Teachers College， Lincang， Yunnan 677000）

Abstract[Objective] The aim was to understand LD50 of Trichlorfon to mammalian. [Method] The LD50 and 95% confidence interval of Ligaofeng Refined Trichlorphon （Bayer Sichuan， 33.3%） in Kunming strain mice were studied by modified Karbers method. [Result] The LD50 of Trichlorphon in mice was 640.0 mg/kg， and the 95% confidence interval was 592.5-687.5 mg/kg. In addition， the rate of death in mice significantly correlated with the logarithmic dose of Trichlorphon. [Conclusion] The results provide theoretical basis for the safe application of Trichlorfon.

Key wordsTrichlorfon； Kunming mice； Median lethal dose； Toxicity

有机磷杀虫剂具有神经毒性，通过抑制神经乙酰胆碱酯酶（AChE）或胆碱酯酶（ChE）的活性从而破坏了正常的神经冲动传导引起中毒死亡[1]，还可诱导机体氧化应激，引起细胞色素P450，特别是P450E I发生异常代谢，产生大量的活性氧自由基，这些活性氧自由基能诱发脂质过氧化，造成生物膜损伤[2]，自由基与生物大分子反应，引起机体抗氧化酶，如超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活力降低、谷胱甘肽（GSH）含量下降、DNA的损伤等[3]。

敌百虫（Trichlorfon）属有机磷脂化合物，是在原敌百虫药物的基础上以特殊的化工技术处理而成，有效成分化学名为O，O-二甲基-2，2，2-三氯-1-羟基乙基磷酸酯，其既保持了敌百虫原有的低毒性、低残留、无“三致”（致畸、致癌、致突变）作用，又进一步发挥新效应，表现广谱、高效、水溶性好及与环境友好的特点，因此广泛用于农林、园艺、畜牧、卫生等方面[4-5]。敌百虫作为广谱、高效、低毒、低残留杀虫剂，除用于防治蔬菜、果树、茶、桑、棉花、粮食作物及卫生害虫外，还广泛应用于畜禽体表、体内以及人体部分寄生虫病治疗。如0.1%～0.5%溶液喷淋即可杀灭蝇蛆、螨、蜱、蚤和虱等[6]，并在非洲国家与呋喃丙胺联合用于治疗人的埃及血吸虫病等[7]。敌百虫应用于畜禽、宠物等疾病治疗过程时，使用浓度太低则达不到治疗效果，若浓度稍重或给药方法不当将引起动物中毒而造成经济损失。近年来，敌百虫治疗动物疾病时引起动物中毒的报道越来越多[8-11]，但目前尚未见有关敌百虫对哺乳动物半数致死量测定的研究。为此，笔者测定了敌百虫对哺乳动物——昆系小鼠的半数致死量及95%的可信限，以期为日常生活中安全使用敌百虫提供参考。

1材料与方法

1.1材料

1.1.1试验动物。昆明系健康小鼠60只，体重（25.0±5.0）g。

1.1.2试剂和药剂。力高峰牌精制敌百虫粉（含量33.3%），由拜耳（四川）公司生产，批号为：220116208，临用前配制成6.0%和3.0%的溶液，其中敌百虫含量分别为20和10 mg/ml；苦味酸溶液。

1.1.3试验器材。1 ml注射器及针头（4号或5号），记号笔，万分之一电子天平（FA2004N，上海精密科学仪器有限公司），鼠笼。

1.2方法

1.2.1预试验。先找出100%与0的估计致死量（或阳性反应的剂量）为试验的上、下限剂量（Dmax和Dmin），即全活剂量与全死剂量[12]。

取20只小鼠（雌雄各半），按性别分类后，根据体重随机分为5组，每组4只，禁食12 h但不禁水。配制系列浓度的敌百虫溶液，以各浓度的0.02 ml/kg药物剂量一次性腹腔注射后观察小鼠后续情况。根据观察结果，当出现4/4死亡时，若其前一组为3/4死亡，则取4/4组的剂量为Dmax，若前一组为2/4或1/4死亡，考虑到4/4组的剂量在正式试验中可能的死亡率低于70%，可将4/4组的剂量乘以2作为Dmax；当出现0/4死亡时，若其后一组的死亡率为1/4，则取0/4组的剂量为Dmin，若后一组死亡率大于1/4，考虑到0/4组的剂量在正式试验中可能的死亡率高于70%，则将0/4组的剂量除以2作为Dmin[13]。用上述方法，测得小鼠100%致死量约为1 100 mg/kg，0致死量为400 mg/kg。

1.2.2正式试验。根据公式计算出剂量间的等比比值i为0.80，按等比数列由大剂量向小剂量依次递乘i。敌百虫溶液各组分别为1 000、800、640、512、410 mg/kg，对照组为生理盐水。取60只小鼠（雌雄各半），禁食12 h但不禁水。将小鼠随机分为6小组，每小组10只小鼠，每组小鼠分别按上述6个质量浓度的受试溶液以0.02 ml/kg药物剂量一次性腹腔注射。

1.2.3指标观察。

给药后，详细观察并记录不同浓度梯度下，在1、24、48及72 h小鼠的中毒症状及死亡数，计算敌百虫的LD50及其可信限。

1.2.4统计方法。

统计各剂量组小鼠死亡数，计算死亡率（P），按孙氏改良寇氏公式[14-16]计算LD50值；lgLD50的标准误按公式（2）计算；LD50的95%可信限按公式（3）计算。

LD50=lg-1[Xm-i（∑P-0.5）]（1）

式中，Xm为最大剂量组剂量对数值；i为相邻两组剂量高剂量与低剂量之比的对数（相邻两组对数剂量的差值）；P为各组动物死亡率，用小数表示；∑P为各组动物死亡率之总和。

lgLD50的标准误：SX50= i（∑pq/n）1/2（2）

式中，n为每组动物数；q=1-p；X50=lgLD50

LD50的95%可信限=log-1（X50±1.96SX50）（3）

1.2.5剂量-死亡数与对数剂量-死亡率线性关系。

根据给药剂量和死亡数的观察记录数据，按公式（4）计算剂量-死亡数之间的直线相关系数（r），同时进行t分布检验（5）与直线回归关系检验，以验证敌百虫给药剂量与小鼠中毒反应之间的关系。

r=（X-X）（Y-Y）

（X-X）2 （Y-Y）2

=SPXYSSXSSY（4）

式中，X为各组敌百虫剂量（mg/kg）；Y为各组小鼠死亡数量（只）；分子部分为各对的离均差的乘积和，用SPXY表示；分母为各剂量（X）离均差的平方和（SSX）与死亡数（Y）离均差的平方和（SSX）的乘积之平方根。

t=rSr=r（1-r2）/（n-2）（5）

2结果与分析

2.1小鼠中毒反应

昆系小白鼠腹腔注射敌百虫溶液后即开始观察小鼠情况，约10 min后小鼠均表现精神沉郁、聚集蜷缩、静卧不动，随后活动受到抑制，自由活动减少，部分小鼠开始出现呼吸急促、流涎、前后肢无力停卧于一处并伴随肌肉振颤的中毒症状。约30 min，小白鼠发生抽搐、拉稀、大小便失禁，1 h之内，有的小白鼠翻正反射消失，均有抽搐的症状，也有死亡的情况。小鼠死亡时间集中在1 h之内，最快的在15 min时死亡，濒死时小鼠出现严重的呼吸困难，呼吸频率加快，腹部起伏加快。未死亡小鼠在90 min后又渐渐恢复，24 h后精神恢复正常，之后也未出现中毒症状。各小组给药剂量与小鼠死亡情况见表1。

表1各小组给药剂量与小鼠死亡情况

组别剂量mg/kg对数剂量（X）浓度%死亡数只死亡率（P）P2

11 0003.0005.0090.90.81

28002.9034.0070.70.49

36402.8063.2040.40.16

45122.7092.5640.40.16

54102.6132.0510.10.01

对照组0∑P=2.5Σp2=1.63

2.2急性毒理参数

根据正式试验各组记录到的腹腔注射敌百虫后死亡情况（表1），通过计算得出敌百虫的LD50为640.0 mg/kg，

SX50=0.035，lgLD50的95%可信限为592.5～687.5 mg/kg。

2.3剂量-死亡数与对数剂量-死亡率线性关系

根据表1和表2中剂量-死亡数与对数剂量-死亡率的数据进行直线相关计算得出：r=0.972 9，df=3，t=7.282 1，通过查阅关系数检验表可得，t0.01（3）=5.841，故︱t︱> t0.01（3），则P<0.01，说明注射剂量与小白鼠死亡之间有显著的直线关系，且剂量越高，死亡数越高。

表2对数剂量与死亡率的直线相关检验

组别剂量mg/kg对数剂量（X）死亡率（Y）X2Y2X·Y

11 0003.000 00.99.000 00.810 02.700 0

28002.903 00.78.427 40.490 02.032 1

36402.806 00.47.873 60.160 01.122 4

45122.709 00.47.338 70.160 01.083 6

54102.613 00.16.827 80.010 00.261 3

总和14.031 02.57.199 41.630 07.199 4

平均数2.806 20.5

注：SSX=219 235.2；SSY=38；SPXY=2 808。

同时，根据表2数据即可得到敌百虫剂量对数与小白鼠死亡率的直线方程为：y=0.464 1+0.012 8x，说明敌百虫剂量对数与小白鼠死亡率之间存在正相关直线关系。而且为进一步证明敌百虫剂量对数与小白鼠死亡率之间存在着直线相关，采用直线回归关系显著性检验对直线回归系数b进行检验，得到t=4.732 1，通过查阅关系数检验表可得t0.05（3）=3.182，故︱t︱> t0.05（3），则P<0.05，说明敌百虫剂量与小鼠死亡率回归显著，即认为随着敌百虫剂量的增加，小鼠死亡率升高。

3结论

LD50值是以动物死活的质反应为指标来衡量药物毒力或效应大小的常用指标，它表示能使全部试验对象死亡半数的剂量或浓度。半数致死量与毒性成反比，致死量越大，毒性越小，致死量越小，毒性越大，且不同生物及个体间存在差异，每种药物在应用前都需测定其对特定动物的LD50，了解药物单次给药或短时间内多次给药后动物所产生的毒性反应及其严重程度，为临床安全用药及监测提供一定的参考。该研究测得小鼠经腹腔注射力高峰牌精制敌百虫粉（四川拜耳，220116208）的LD50为640.0 mg/kg，95%的可信限为592.5～687.5 mg/kg，且小鼠中毒死亡率（数）与敌百虫对数剂量（剂量）间存在显著线性关系，结果可为敌百虫的临床应用提供理论依据。

安徽农业科学2015年

参考文献

[1] 邓慧碧.敌百虫片在兽医临床上的应用及注意事项[J].养殖技术顾问，2010（3）：156-157.

[2] 朱友芳，洪万树.敌百虫对中国花鲈的毒性效应[J].生态学杂志，2011，30（7）：1484-1490.

[3] DEMBELE K，HAUBRUGE E，GASPAR C.Concentration effects of selected insecticides on brain acetylcholinesterase in the common carp （Cyprinus carpio L.）[J].Ecotoxicology and Environmental Safety，2000，45（1）：49-54.