贵州不同产地民族药紫金莲质量比较研究

赵 海 喻懋国 李 平*

(1.贵阳中医学院第二附属医院，贵州 贵阳 550003; 2.贵州景诚制药有限公司，贵州 修文 550200)

紫金莲为蓝雪科植物紫金莲Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。主要分布于贵州贵阳、毕节、水城等地［1］，为贵州少数民族地方用药。收载于《贵州省中药、民族药材质量标准》(2003年版)，原标准项下仅有外观性状鉴别和显色反应鉴别项［2］。我们对不同产地(毕节、水城、六枝)紫金莲的外观性状、显微鉴别、薄层鉴别、浸出物、总黄酮及白花丹醌含量测定研究分析，报道如下。

1 药材来源

药材采自水城、六枝、毕节地区，经贵州省药检所中药室林开忠教授鉴定为蓝雪科植物紫金莲Ceratostigma willmottianum Stapf 的干燥根。

2 仪器与试药

高效液相色谱仪(日本岛津/LC -20AT);紫外分光光度计UV 1801(上海美析仪器有限公司);AL204 电子天平型(梅特勒-托利多);XSP -8CC 显微镜(上海蔡康);ZF-2 型三用紫外仪。

无水芦丁对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110731 -201004，供含量测定用);白花丹醌对照品(进口，批号：20140132，经归一化法测定其纯度达99.5%);紫金莲对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：120965 -200703，供薄层鉴别用);槲皮素对照品(中国药品生物制品检定所，批号100081 -200406：，供含量测定用);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯;水为超纯水。

3 性状

均符合《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)标准项目。根茎短，结节状，具支根多条;粗根呈圆柱形，弯曲，偶见扭曲，长10 ～20cm，直径0.4 ～0.8cm 或更粗。表面淡褐色至深褐色或棕紫色。上部具侧枝茎痕，两茎痕间有微曲细纵纹，并有小圆点状细根痕散在。质脆，易折断，断面纤维状，浅红色或淡蓝色，中心髓部约占直径的1/3，浅褐色。气微香，味甘、淡。

4 鉴别

4.1 显微鉴别：横断面：木栓层为数列细胞，呈淡黄色。韧皮部较宽，薄壁细胞内侧有多量的纤维细胞，能见形成层环。木质部的射线明显，射线之间有导管和空腔呈放射性排列。粉末：呈橙黄色，方晶散在或存于晶鞘纤维中，多见网纹导管。淀粉粒呈星状，复粒较少，木栓细胞排列紧密。各产地紫金莲显微鉴别没有明显区别。

4.2 薄层鉴别

4.2.1 取本品粉末(过三号筛)1g，加乙醚15mL，浸渍1h，时时振摇，滤过，滤液室温挥尽乙醚，残渣加甲醇0.5mL 使溶解，作为供试品溶液。另取紫金莲对照药材1g，加乙醚10mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部ⅥB)试验，吸取上述2 种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以氯仿-甲醇(9：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%氢氧化钾乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。

表1

4.2.2 取本品粉末5g，加甲醇-水(1：1)60mL，加热回流1h，趁热滤过，滤液浓缩至约30mL 后，加5% 硫酸溶液2mL，回流1.5h 后，用醋酸乙酯振摇提取2 次，每次25mL，合并醋酸乙酯液，浓缩至约1mL，作为供试品。另取槲皮素对照品，加醋酸乙酯溶解，制成每1mL 含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各5 ～10μL，分别点于硅胶G 薄层板上，以甲苯(水饱和)-甲酸乙酯-甲酸(5：4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%的三氯化铝的乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品相应的位置上显相同颜色的斑点。

表2

5 浸出物

参考《中国药典》2010年版一部附录X A 浸出物测定法项下水溶性浸出物测定法中的热浸法测定。实测样品3批，结果见表1。

6 总黄酮含量测定

6.1 对照品溶液的制备：精密称取无水芦丁对照品50mg(49.86mg)，置50mL 量瓶中，加60%乙醇35mL，微热使溶解，放冷，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取10mL，置50mL 量瓶中，加水至刻度，摇匀，既得(每1mL 中含无水芦丁0.19976mg)。

6.2 标准曲线的绘制：精密量取对照品溶液1mL、2mL、3mL、4 mL、5 mL、6 mL，分别置25mL 量瓶中，加水至6 mL，加5%亚硝酸钠溶液1 mL，混匀，放置6min，加10%硝酸铅溶液1 mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置15 分钟，以相应的试剂作空白，找紫外-可见分光光度发附录(V A)，在500nm 波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

6.3 测定法：取供试品粉末(过三号筛)0.5g，精密称定，置锥形瓶中，加60%乙醇100mL，称定重量，加热回流2 小时，放冷，称定重量，用60%乙醇补足重量，过滤，精密吸取续滤液5 mL，置25 mL 量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自“加水至6 mL”起，依法操作，另精密吸取续滤液5mL，加水稀释至25mL，摇匀，作空白，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品中无水芦丁的重量，计算，即得。

6.4 样品测定 结果见表1。

7 白花丹醌含量测定［3］

7.1 色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Diamonsil C18柱(200 ×4.6mm 5μm);流动相：甲醇-水(75：25);检测波长：265nm;流速：1.0mL·min-1，理论板数按白花丹醌(C11H8O3)峰计算，不低于5000。

7.2 对照品溶液制备：取白花丹醌对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含15μg 的对照品溶液(浓度：14.96μg/mL)。

7.3 供试品溶液制备：精密称取本品0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL，称定重量，超声30 min，放置至室温，过滤，取续滤液，即得。

7.4 测定法：按照上述色谱条件，取对照品溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.5 样品测定：结果见表1。

表1 样品水溶性浸出物、总黄酮、白花丹醌含量测定值(n=3)

8 结果与讨论

紫金莲为贵州少数民族习用药材，苗药名“紫金标”“包家利幼”，苗族常用于治疗跌打损伤，用时多以根或根茎煎水服用。贵州还开发出有以此为主药的复方中药制剂。本文对不同产地的紫金莲进行质量分析和评价，结果表明：各产地紫金莲性状均与《贵州省中药材、民族药材质量标准》(2003年版)标准描述相符;各产地显微鉴别没有明显区别;薄层色谱结果显色斑点清晰、分离效果好、专属性强，各产地药材斑点大小颜色略有不同;水溶性浸出物含量在15.1% ～17.4%之间;总黄酮含量以无水芦丁(C27H30O16)计在2.36% ～2.95%之间。

王爱民等建立的HPLC 法测定紫金莲中白花丹醌含量、，测定了贵州贵阳及周边县市(修文、清镇)的含量分别为0.342%，0.262%，0.204%［1］。此次我们选择水城、六枝、毕节3 地3 批样品的测定均值分别为0.627%，0.779%，0.340%，可见各产地各紫金莲白花丹醌含量有一定差异，六枝、水城含量较贵阳、毕节高，质量较优。

［1］贵州省中药资源普查办公室，贵州省中药研究所.贵州中药资源［M］.北京：中国医药科技出版社，1992：790.

［2］贵州省药品监督管理局.贵州省中药材、民族药材质量标准［S］.贵州：贵州科技出版社，2003：369.

［3］王爱民，王永林，李勇军，等.紫金莲药材的质量控制方法的研究［J］.中国中药杂志，2008(9)：2130 -2132.