HPLC 法测定蒙药材沙棘果实中熊果酸的含量

李雅芬 白音夫

(1.内蒙古自治区人民医院，内蒙古 呼和浩特 010017; 2.内蒙古自治区中医药研究所，内蒙古 呼和浩特 010020)

沙棘(Hippophae rhamnoides)为胡颓子科沙棘属植物，耐旱，抗风沙，是西北高原具有多种用途的经济植物。沙棘果实也是药食同源植物，根、茎、叶、花、果，特别是沙棘果实含有丰富的营养物质和生物活性物质，其沙棘果实入药具有止咳化痰、健胃消食、活血散瘀之功效。沙棘果实含异鼠李素、芸香甙、槲皮素、山柰酚、维生素、叶酸、胡萝卜素、花色素，种子含棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸、β-谷甾醇，叶含抗坏血酸、异鼠李素、胡萝卜素。中国药典规定沙棘果实槲皮素含量不得低于0.1%［1］。本文对沙棘果实熊果酸含量进行了测定，以期建立以熊果酸为含量的沙棘质量评价方法。

1 仪器与试剂

1.1 仪器：1100 型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，TJ-912 型色谱分析平台(太极计算机公司)，IN-180 型柱温箱(上海英泰科技研究所)，SH6150D 超生波清洗器(上海昆山)，电子天平(梅特勒)。

1.2 试药：熊果酸对照品(742 -8701)由中国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯;其他均为分析纯试剂;水为纯化水;沙棘自采(内蒙古呼和浩特和林县南天门林场不同山沟)。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件：Kromasi - C18 柱(200mm × 4.6mm，5μm)，流动相甲醇-水-磷酸(89 ︰11 ︰0.1)，流速1mL·min-1，温度30℃，检测波长215nm，进样量10μL。在此条件下待测组分可达到基线分离。样品中熊果酸与其它组分有较好的分离，见图1。

2.2 对照品溶液的制备：精密称取熊果酸对照品适量，加甲醇制成0.194mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备：取本品根、茎、花叶与地上部位，粉碎，过100 目筛，精密称定0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称定质量，超声处理50min ，放冷，称重，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液备用，即得。

2.4 线性关系考察：精密吸取对照品溶液0.05、0.1、0.25、0.5、1.0、2(mL)，加到10mL 量瓶中，加甲醇稀释到刻度，摇匀，注入高效液相色谱仪10μL 测定。以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)做线性回归，回归方程为Y= 12073891X -55733，r =0.999。结果表明，熊果酸在0.0194 ～0.194μg 范围内呈良好的线性关系。

2.5 稳定性实验：取同一份供试品溶液，分别在0，1，2，4h进样测定，以熊果酸峰面积值计算RSD 为0.60%。结果表明，供试品溶液在4h 内稳定。

2.6 精密度实验：吸取同一批供试品溶液，在上述色谱条件下重复进样6 次，测得熊果酸峰面积RSD 为0.53%。

2.7 重复性实验：取同批药材地上部位按2.3 项下平行制备6 份样品溶液，并按2.1 项下测定，熊果酸的平均含量为0.331%，RSD 为2.43%。

2.8 加样回收率实验：取同批药材地上部位已知含量的样品6 份，每份取约0.1g，精密称定，分别精密加入熊果酸对照品溶液1.0 mL(0.0194 mg)，按2.3 项下制备样品溶液，同法操作，测定含量，计算回收率。熊果酸平均回收率为107.35%，RSD 为3.66%(n=4)。

2.9 样品测定：取沙棘药材，按2.3 项下方法制备供试品溶液，按拟定的色谱条件测定熊果酸含量，结果，5 个不同采集点熊果酸含量分别为0.331%、0.371%、0.266、0.411、0.241 %，平均含量0.323% 。

3 讨论

熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖、增强机体免疫功能、抗氧化作用、降血脂、诱导肿瘤细胞凋亡等多种生物学效应，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。本文研究表明，沙棘果实中含有较多的熊果酸。由于熊果酸有较强生理活性，以熊果酸含量可作为药材质量标准，同时，中国药典中规定沙棘中槲皮素含量不得低于0.1%，与熊果酸比较后者作为质量标准较为适宜，也可以作为新标准补充到新版药典中。

［1］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010，171 -172.