针药结合对寒凝血瘀型子宫内膜异位症大鼠的镇痛作用研究*

杨东霞，周忠光，胡妮娜，李红梅，王晓滨，李冬梅，侯 琳，吴修红△

(1.黑龙江中医药大学附属第二医院，黑龙江 哈尔滨150001;2.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040)

子宫内膜异位症(EMs)是临床上的常见病及疑难病，该病迫使患者就医的主要原因是疼痛、不孕等症状。EMs 导致的疼痛可表现为痛经、持续的下腹疼痛及性交痛等，疼痛严重时需口服止痛药甚至镇痛药，但是由于反复长期的服用去痛片、芬必得、强痛定等药物造成依赖性及耐药性，使患者的身心都受到严重的损害。中药复方少腹逐瘀汤具有温经止痛、活血化瘀之功，对于由EMs 起的疼痛具有明显的效果，针灸具有调畅经络、止痛之功，两者相结合在临床治疗EMs 能明显提高疗效。本研究对针药结合治疗的效果进行初步的研究，现介绍如下。

1 实验材料

1.1 主要仪器

SN-695 B 型智能放免Y 测量仪(上海原子核研究所日环光电仪器有限公司，中国);Acculab 电子天平(赛多利斯艾科勒，德国);Thermo Scientific Forma 995 超低温冰箱超低温冰箱(赛默飞世尔科技，美国);KDC-40 低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司，中国)。

1.2 主要试剂

TXB2放免试剂盒(北京市福瑞生物工程公司，批号20140225);6-KeTo-PGF1α 放免试剂盒(北京市福瑞生物工程公司，批号20140225)。

1.3 实验药物

达那唑(江苏联环药业股份有限公司，批号20140702);苯甲酸雌二醇注射液(宁波第二激素厂，批号140218);缩宫素针剂(上海子能制药有限公司，批号:130708)。

取处方量少腹逐瘀汤:按当归9 g、川芎3 g、赤芍6 g、蒲黄9 g、肉桂3 g、小茴香1.5 g、五灵脂6 g、没药3 g、干姜3 g、延胡索3 g 配方比例组成药物(上述药物均购自于北京同仁堂哈尔滨药店)，共计930 g，水煎、过滤、浓缩至每毫升含生药8 mg，混悬液。均于4℃冰箱保存备用。

1.4 实验动物

清洁级雌性的SD 大鼠(未交配过)，8 ～12 周鼠龄，体重(200 ±20)g。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供，许可证号:SCXK 黑2008004，质量合格证号:20120059。

2 实验方法

2.1 针药结合对大鼠缩宫素诱发正常大鼠疼痛影响实验方法

模型制备:40 只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林组、少腹逐瘀汤(SFZYT)组和针药结合组。除正常对照组外，其余各组大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。给药方法:少腹逐瘀汤给予相当于生药量4.2 g/(kg·d)灌胃，每日1 次;阿司匹林给予0.2 g/kg 灌胃，日1 次，在注射苯甲酸雌二醇的第5 日开始给药，连续给药7 天;针刺方法:取穴根据大鼠形态、解剖、生理特点，参照林文注主编《实验针灸学》［1］穴位标准定位，针刺足三里、三阴交、关元、中极、气海穴，每日1 次，每次10 min。以上处置连续3 天。给药第7 日，末次给药30 min 后，腹腔注射缩宫素0.2 单位/只，观察10 min 内各组动物扭体反应次数。

2.2 针药结合对缩宫素诱发EMs 模型大鼠疼痛影响实验方法

模型制备:大鼠阴道涂片、苏木素-伊红染色观察动情周期。每天定时观察阴道细胞涂片，选择动情期4 ～5 天，且连续有2 个动情周期的大鼠，在动情周期行造模手术。大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2 mL/100g)麻醉，麻醉生效后，将大鼠固定于操作台上，腹部剪毛，碘伏消毒，在无菌条件下开腹，右侧离卵巢0. 5 cm处分离子宫，结扎后在中间剪取子宫2 cm 左右，剖开子宫剥离子宫内膜，剪成4 mm ×4 mm 小块，分别缝于双角子宫分叉处、左侧腹膜壁层，结束后向腹腔内注射青霉素钠生理盐水溶液，16 万/kg。丝线分层缝合腹部切口。术后第1 天肌肉注射青霉素，16 万/kg，每天1 次，连续3 天，碘酊涂擦手术切口。造模后第3 天腹腔注射苯甲酸雌二醇注射用0. 1 mL/d催情，共3 天。将子宫内膜异位症成功造模大鼠于术后2 周，置于0 ～1℃冰水中10 min，每日1 次，连续2周，制备寒凝血瘀模型，大鼠出现寒战、爪尾部紫暗、蜷缩少动等症状。正常清洁饲养4 周，再次开腹观察移植物生长情况，手术成功的标志为:移植物体积增大，出现液体积聚，移植物被结缔组织或大网膜覆盖，并有血管形成，同时取移植物送病检证实内膜成活。

将造模成功者随机分为4 组，每组10 只:模型组、针药结合组、SFZYT 组、达那唑对照组。给药方法:少腹逐瘀汤给予相当于生药量4.2 g/(kg·d)灌胃，每日1 次;达那唑0.036 g/kg 灌胃，日1 次;针刺方法:同2.1项针刺方法;以上处置连续4 周。在给予治疗第4周的第1 天开始，除正常对照组外，其余各组大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。末次给药及针灸30 min 后，给予腹腔注射缩宫素每只大鼠4.5单位，即刻使用秒表记录大鼠疼痛出现的时间、5 min之内的扭体次数、5 ～10 min 内的扭体次数。

2.3 针药结合对EMs 大鼠血浆TXB2 和6-KeTo-PGF1α 的水平影响实验方法

造模方法及分组情况同2.2 项，连续给药4 周，不给予大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇。末次给药及针刺30 min 后，大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2 ml/100 g)麻醉，腹主动脉取血3 ml，3000 rpm 离心10 min分离取血浆，放免法测定TXB2和6- KeTo- PGF1α的含量。

2.4 数据处理

3 结果

3.1 针药结合对大鼠缩宫素所致疼痛的影响

与模型组相比，阿司匹林组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能显著抑制缩宫素所致大鼠扭体次数(P ＜0.05);与少腹逐瘀汤组相比，针药结合治疗后大鼠扭体次数显著降低(P ＜0.05)。结果见表1。

表1 针药结合对缩宫素所致大鼠疼痛的影响

3.2 针药结合对缩宫素诱发EMs 模型大鼠子宫收缩所致疼痛的作用

与模型组相比，达那唑组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能显著抑制缩宫素诱发的EMs 模型大鼠扭体次数(P ＜0.05);与少腹逐瘀汤组相比，针药结合治疗后大鼠扭体次数显著降低(P ＜0.05)。结果见表2。

3.3 针药结合对EMs 大鼠血浆内TXB2 和6-KeTo-PGF1α 的作用

与正常对照组相比，模型组血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 都分别具有显著性差异(P ＜0.05);与模型组相比，达那唑组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能分别回调血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 水平，差异具有显著性(P ＜0.05);与少腹逐瘀汤组相比，针药结合组血浆内TXB2水平具有显著性差异(P ＜0.05)，6-KeTo-PGF1α 水平具有升高趋势，但差异无显著性。结果见表3。

表2 针药结合对EMs 模型大鼠缩宫素所致疼痛的影响

表3 针药结合对EMs 大鼠血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 的影响

4 讨论

EMs 导致的疼痛具有得热痛减、遇寒加重的特征，中医认为“寒凝血瘀”是子宫内膜异位症的根本病因。少腹逐瘀汤源于《医林改错》具有温经止痛、活血化瘀之功，已有诸多文献证实少腹逐瘀汤是治疗EMs 的常用有效方剂［2］。针刺具有良好的镇痛作用，EMs 导致的疼痛主要表现在少腹、胞宫。“经脉所过，主治所及”，足三里为阳明胃经合穴，《四总穴歌》载:“肚腹三里留”，提示了足三里穴与少腹部疼痛密切关系;三阴交为妇科及血证的要穴，是肾、脾、肝三阴交会之所，足三阴经均循行于少腹，针刺该穴可使少腹及胞宫气机调畅、瘀血得行;关元穴、气海穴、中极穴具有培元固本、补益下焦之功。

子宫内膜是合成前列腺素(PGS)的重要部位，血浆PGs 的水平与EMs 痛经程度呈正相关。血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)是一对PGs 类化合物。TXB2和6-KeTo-PGF1α 是TXA2和PGI2的稳定代谢产物，后两者均是花生四烯酸的产物，TXA2对血管收缩及血小板聚集有很强的促进作用。PGI2具有舒张血管、抑制血小板聚集则作用，但是TXA 和PGI2的半衰期短，故选用前两者进行研究。已有研究证实痛经模型大鼠存在TXB2和6- KeTo- PGF1α 的代谢失衡，针刺可通过纠正其失衡达到止痛效果［3］。金某等［4］研究证实EMs 痛经患者的血浆PGs 水平异常，针刺可以升高血浆6-KeTo-PGF1α 的水平，降低PGE2的水平。

本研究发现少腹逐瘀汤结合针刺有明显的镇痛作用，可以明显减低缩宫素诱导的EMs 大鼠扭体次数。同时研究发现针药结合可升高6-KeTo-PGF1α 的水平，降低TXB2的水平，提示少腹逐瘀汤结合针刺减轻EMs 疼痛的机制可能是通过调节两者的失衡，对EMs导致疼痛的治疗提供了有效依据。

［1］ 林文注，王佩. 实验针灸学［M］. 上海:上海科学技术出版社，1999:285-288

［2］ 洪佩佩，张玲璐.少腹逐瘀汤加减辅治子宫内膜异位症痛经的疗效观察［J］.浙江中医杂志，2014，49(6):488-489

［3］ 李春华，任晓暄，嵇波，等. 预先电针对实验性类痛经模型大鼠血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素F1α 的影响［J］.中华中医药杂志，2012，27(4):1038-1041

［4］ 金亚蓓，孙占玲，金慧芳.耳穴电针治疗子宫内膜异位症痛经的随机对照研究［J］.针刺研究，2009，34(3):188-193