规模猪场断奶仔猪Ⅰ型链球菌感染流行的诊断与防控分析

李淼，马 攀，柴强强，李润成

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙410128）

猪链球菌根据荚膜抗原的差异，可分为35个血清型及相当数量无法定型的菌株，其中1、2、7、9型是猪的致病菌[1]，2型最为常见，1、7、9型常有零星发生。2015年6月衡阳某规模猪场断奶仔猪陆续出现跛行、运动困难，部分仔猪可见关节轻微肿大的病例，该猪场在哺乳期仅给14日龄小猪接种了高致病性蓝耳病毒活疫苗、2头份/头，其他没有进行任何疫苗接种。该次发病，总发病率达30%左右，使用氟苯尼考药物治疗有一定效果，但死亡率仍然可达到20%左右。本文对猪场送检的3头断奶仔猪进行了解剖，并进行了细菌分离鉴定和药物敏感性检测。结果从送检猪关节分离到大量形态一致的I型链球菌，通过使用敏感药物结合一系列综合性防控措施，控制了猪场疫情。特报告如下：

1 材料与方法

1.1 病料

某规模猪场送来的3头发病典型的断奶仔猪。

1.2 主要试剂及细菌培养基

巧克力琼脂培养基购自郑州某公司，PCR试剂购自北京天根生化。

1.3 发病小猪的解剖

将发病小猪前腔静脉放血处死，进行解剖、观察各脏器及关节的情况。

1.4 细菌分离培养及鉴定

1.4.1 用接种环钩取肺脏、脾脏及关节腔内病变组织少许，分别划线接种巧克力琼脂培养基，然后将巧克力琼脂放于烛缸后37℃培养，48h后观察结果，并取培养物涂片革兰氏染色镜检。

1.4.2 培养物的PCR鉴定

（1）根据GENBANK登录的链球菌CPS基因[2]，分别设计能特异性扩增链球菌33个血清型的引物，其中链球菌I型的引物资料为：上游引物为：5-TCTTATAACAGGCGTCAAAACA-3；下游引物：5-ATCGGTATAAAAGCAAGACACA-3，扩增片段长度为157bp，扩增退火温度为55℃。

（2）以纯培养的细菌为模板，用设计的链球菌分型引物进行PCR扩增，PCR方法按常规进行。

1.5 分离细菌的药物敏感性试验

从固体培养基上挑取菌落接种血清肉汤培养基37℃震荡培养24h，然后用纸片扩散法进行药物敏感性检测，具体操作按常规进行。

2 结果

2.1 病猪解剖结果

将发病小猪前腔静脉放血处死，进行解剖、观察各脏器及关节的情况，主要病理变化：小猪肺脏有轻微实变，心脏衰弱（见图1），关节囊发脓性炎症（见图2）。

图1 发病小猪肺脏、心脏

图2 发病小猪关节

2.2 细菌分离培养结果

用病猪肺脏、脾脏、关节腔内病变组织接种巧克力琼脂培养基，培养48h后观察细菌生长形态。结果仅在关节病变组织接种区长出了纯的针尖大小菌落，挑取菌落涂片革兰氏染色镜检，结果见图3，由图3可见分离均为革兰氏阳性、短链状的球状细菌。

图3 细菌培养物革兰氏染色镜检结果

2.3 培养物的鉴定结果

以纯培养的细菌为模板，用设计能特异性扩增链球菌33个血清型的引物用分别进行PCR鉴定，结果仅I型链球菌引物扩增出了特异性条带（见图4）。

图4 I 型链球菌PCR扩增结果

2.4 细菌药物敏感性检测结果

取分离的细菌，选用对链球菌具有抗菌作用的药物进行敏感性检测，检测方法为纸片法（K-B法），具体检测结果见表1，有表1可见分离的链球菌对β-内酰胺类药、喹诺酮类药以及多西环素均比较敏感，但对复方新诺明、林可霉素不敏感。

表1 分离菌药物敏感性检测结果

3 讨论与分析

本文对发病猪进行临床观察解剖，从关节腔发脓性组织中分离出了大量形态一致的细菌，通过革兰氏染色镜检，并利用设计的33个血清型链球菌鉴定引物对分离菌进行了分型鉴定，结果发现分离菌为血清I型链球菌。

根据分离菌的药物敏感性检测结果发现，该分离菌对多种抗生素均比较敏感，结合猪场提供的哺乳仔猪疫苗免疫情况，建议猪场将蓝耳病毒疫苗改为每次免疫0.5头份/头，然后加强哺乳仔猪伤口预防和消毒管理，将断奶仔猪断奶后重新分群饲养，改为以1窝小猪作为1个单位转至保育舍，不进行合群与分群工作，以减少合群打斗的应激以及伤口的增加[3]；选用敏感药物头孢噻呋钠进行链球菌的防控和治疗工作，结果有效的控制了发病情况。该猪场链球菌比较严重的原因笔者认为可能为：变异蓝耳病毒疫苗免疫剂量过大，该疫苗存在一定致病性[4]，导致了哺乳仔猪自身免疫力降低；断奶转群应激，小猪免疫力降低；链球菌的感染。

此外，笔者认为断奶仔猪是生猪饲养比较容易出问题的阶段，小猪在断奶后往往经历了环境改变的应激、饲料应激、离开母猪的应激、合群打斗应激等降低生猪非特异性免疫力的因素，同时还处于各种特异性抗体下降的阶段。各猪场应该从防止和减轻各种应激带来的负面影响入手，然后给予仔猪合理的免疫注射以及药物保健工作，这样方可提高保育仔猪的成活率。

[1]陆承平主编.兽医微生物学(第四版)[M]. 北京：中国农业出版社，2010.

[2]王楷宬. 猪链球菌1、2、14、1/2 型荚膜多糖的单糖组成比较[J]. 微生物学报,2014,(6):656-662.

[3]杨 建. 猪链球菌病的防治与体会[J]. 农业开发与装备,2015,(4):152-153.

[4]李丽琴等. PRRSV 变异株活疫苗和灭活疫苗免疫特性的研究[J]. 中国预防兽医学报,2010,(6):468-472.