灰毡毛忍冬叶醇提物的抗氧化活性研究

唐娟，向乐，胡佑帆，陈玉保，刘欣，熊芳琪，彭国平

（湖南农业大学生物科学技术学院中草药与天然产物研究室，湖南长沙 410128）

灰毡毛忍冬叶醇提物的抗氧化活性研究

唐娟，向乐，胡佑帆，陈玉保，刘欣，熊芳琪，彭国平

（湖南农业大学生物科学技术学院中草药与天然产物研究室，湖南长沙 410128）

以灰毡毛忍冬叶为材料，研究不同提取温度醇提物对DPPH自由基清除率的影响，以及灰毡毛忍冬老叶、嫩叶的醇提物对DPPH自由基清除率的差异。结果表明：在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除率高低顺序为：40℃＞50℃＞60℃；三种温度下灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率相近，50℃时略高，说明提取温度对灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除率影响更大；在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物DPPH自由基的清除率均大于老叶，说明嫩叶醇提物DPPH自由基清除能力更强，抗氧化物质含量更多或者高抗氧化活性物质更多。

灰毛毡忍冬叶；醇提物；DPPH自由基清除率；抗氧化活性

金银花叶是生产金银花的副产品，其产量约为花的10倍左右。研究表明，金银花叶所含有的药理活性物质与花相近或高于花，其中绿原酸和黄酮类物质都有一定的抗菌消炎作用，而且具有抗氧化活性，是很好的抗氧化活性材料。迄今为止，对金银花叶采集时间、有效成分提取方法及其与功效之间的关系方面的研究鲜有报道。故应对金银花叶中的活性成分做进一步研究，以充分利用这一资源［1］。作者选取金银花中的灰毡毛忍冬叶为材料，对灰毡毛忍冬老叶、嫩叶醇提物的抗氧化活性进行了考察，为后期开发、利用灰毡毛忍冬叶提供理论依据。

1 实验

1.1 材料与试剂

灰毡毛忍冬叶；95%乙醇；DPPH，梯希爱上海化成工业发展有限公司；Vc，分析纯。

1.2 方法

1.2.1 灰毡毛忍冬叶的醇提取

将灰毡毛忍冬叶于烘箱中干燥后用粉碎机打成粉末过40目筛。称取3份5 g灰毡毛忍冬老叶、嫩叶，用95%的乙醇按固液比1∶10（g∶mL，下同）分别在40℃、50℃、60℃提取10 h，真空抽滤，将滤液旋转蒸发到一定体积后倒入已干燥称重的培养皿中，放入烘箱中干燥蒸发，最后得到醇提物［2］。

1.2.2 样品溶液的配制

称取0.024 g提取物或Vc溶于95%乙醇，定容至100 mL得到24μg·mL－1的溶液，分别稀释1、2、4、6、8倍，备用。

1.2.3 DPPH溶液的配制

准确称取DPPH试剂0.0644 g，用95%乙醇溶解定容至1 000 mL容量瓶中，得到64.425 mg·L－1的DPPH贮备液，摇匀，置于冰箱中冷藏备用［3］。

1.2.4 清除DPPH自由基能力的测定

1）在10 mL试管中依次加入4.0 mL的64.425 mg·L－1DPPH溶液和1.0 mL 95%乙醇，混匀，反应稳定后，以95%乙醇为参比，在516 nm处测吸光度，记为A0。

2）在10 mL试管中依次加入4.0 mL的64.425 mg·L－1DPPH溶液和1.0 mL样品溶液，混匀，反应稳定后，以95%乙醇为参比，在516 nm处测吸光度，记为As。

3）在10 mL试管中依次加入4.0 mL的样品溶液和1.0 mL 95%乙醇，混匀，反应稳定后，以95%乙醇为参比，在516 nm处测吸光度，记为Ar。

4）DPPH自由基清除率（Y）按下式计算［4］：

2 结果与讨论

2.1 提取温度对DPPH自由基清除率的影响（图1）

图1 提取温度对灰毡毛忍冬老叶（a）、嫩叶（b）醇提物的DPPH自由基清除率的影响Fig.1 The effect of extraction temperature on scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves（a）and seeding leaves（b）

由图1a可知，灰毡毛忍冬老叶的醇提物有较好的DPPH自由基清除能力，但较Vc弱。在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除能力差别较大，高低顺序为40℃＞50℃＞60℃。说明提取温度对灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除能力有较大影响，上述三个温度中，温度越高醇提物的DPPH自由基清除能力越弱。由图1b可知，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物有较好的DPPH自由基清除能力，但较Vc弱。在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除能力相近，50℃时略高。说明提取温度对灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除能力影响不大。

2.2 灰毡毛忍冬老叶、嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率比较

2.2.1 40℃醇提物的DPPH自由基清除率比较（图2）

图2 灰毡毛忍冬老叶、嫩叶40℃醇提物的DPPH自由基清除率的比较Fig.2 Com parison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 40℃

由图2可知，灰毡毛忍冬老叶、嫩叶在40℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差异。浓度从1.5μg· mL－1升至3μg·mL－1时，清除率上升较缓慢，且老叶、嫩叶提取物的DPPH自由基清除率相近。浓度从3μg·mL－1升至24μg·mL－1时，清除率上升较快，灰毡毛忍冬的老叶和嫩叶有明显的差别，嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率大于老叶。

2.2.2 50℃醇提物的DPPH自由基清除率的比较（图3）

图3 灰毡毛忍冬老叶、嫩叶50℃醇提物的DPPH自由基清除率的比较Fig.3 Com parison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 50℃

由图3可知，灰毡毛忍冬老叶、嫩叶在50℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差异。浓度从1.5μg· mL－1升至24μg·mL－1时，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率均大于老叶。

2.2.3 60℃醇提物的DPPH自由基清除率的比较（图4）

图4 灰毡毛忍冬老叶、嫩叶60℃醇提物的DPPH自由基清除率的比较Fig.4 Comparison of scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract from L.macrathoides Hands M azz old leaves and seeding leaves at 60℃

由图4可知，灰毡毛忍冬老叶、嫩叶在60℃醇提物的DPPH自由基清除能力有差异。浓度从1.5μg· mL－1升至3μg·mL－1时，清除率上升较缓慢，且老叶、嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率相近。浓度从3μg·mL－1升至24μg·mL－1时，清除率上升较快，灰毡毛忍冬的老叶与嫩叶有差别，嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率均大于老叶。

3 结论

（1）提取温度对灰毡毛忍冬叶醇提物的DPPH自由基清除能力有影响，在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除率高低顺序为：40℃＞50℃＞60℃；在三个温度下，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率相近，50℃时略高。说明提取温度对灰毡毛忍冬老叶醇提物的DPPH自由基清除能力影响较大，对嫩叶影响较小。

（2）在40℃、50℃、60℃三个提取温度下，灰毡毛忍冬嫩叶醇提物的DPPH自由基清除率均大于老叶。说明同一提取温度下灰毡毛忍冬嫩叶提取物的DPPH自由基清除能力比老叶强，嫩叶中抗氧化物质含量比老叶高。

（3）植物叶片中含有很多成分，其功效往往不是一种成分的作用效果，而是多种具有相同功效的成分协同作用的结果，因此，对中草药的临床效果评价更为重要。对于中草药的应用，采集时间、提取方法，甚至使用方法对于其效果的发挥均有很大的影响。

［1］李玉贤，杨怀霞，武雪努.金银花茎叶药用价值概述［J］.河南中医药学刊，2000，15（3）：23-24.

［2］吴拥军，石杰，屈凌波，等.流动注射化学发光法及光度法用于巴戟天提取液抗氧化活性的研究［J］.光谱学与光谱分析，2006，26 （9）：1688-1691.

［3］宋怀恩，闻韧.抗氧化剂筛选方法的研究进展［J］.中国药物化学杂志，2003，13（2）：119.

［4］郑晶泉.抗氧化剂抗氧化实验研究进展［J］.国外医学（卫生学分册），2000，27（1）：37-40.

Study on Antioxidant Activity of Ethanol Extract from L.Macrathoides Hands M azz Leaves

TANG Juan，XIANG Le，HU You-fan，CHEN Yu-bao，LIU Xin，XIONG Fang-qi，PENG Guo-ping
（Herb Medicines＆Natural Products Research Section of College of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agricultural University，Changsha 410128，China）

Using L.macrathoides Hands Mazz leaves asmaterial，the effect of extraction temperature on scavenging rate of DPPH free radical of ethanol extract，and the difference of scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from old leaves or seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazzwere studied.The results showed that，at40℃，50℃，60℃，the order of scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from old leaveswas：40℃＞50℃＞60℃，scavenging rates of DPPH free radical of ethanol extract from seeding leaves were similar，and scavenging rate of DPPH free radical was slightly higher than the otherswhen the temperature was 50℃.This indicated that extraction temperature had greater impact on scavenging rate of DPPH free radical of the ethanol extract from old leaves at40℃，50℃，60℃，the scavenging rates of DPPH free radical of the ethanol extract from seeding leaveswere higher than the old leaves.This indicated that the capacity of scavenging DPPH free radical of ethanol extract from the seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazzwas greater than the old leaves，the contentof antioxidant substances or high antioxidant active substances weremore in seeding leaves of L.macrathoides Hands Mazz.

L.macrathoides Hands Mazz leaf；ethanol extract；scavenging rate of DPPH free radical；antioxidant activity

TQ 461 R 284

A

1672-5425（2015）07-0044-03

10.3969/j.issn.1672－5425.2015.07.012

2015-03-12

唐娟（1991－），女，湖南永州人，硕士研究生，研究方向：生物活性功能成分分离纯化，E-mail：37940713@qq.com；通讯作者：彭国平，副教授，E-mail：pgphh@163.com。