白桦脂醇脂质体的制备及其制剂学研究①

韩雪冰，于 莲，乔 越，张灵芝

(1.双鸭山煤炭总医院，黑龙江 双鸭山 155100；2.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)

白桦脂醇脂质体的制备及其制剂学研究①

韩雪冰1,2，于 莲2，乔 越2，张灵芝2

(1.双鸭山煤炭总医院，黑龙江 双鸭山 155100；2.佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007)

目的：制备白桦脂醇脂质体，优化其工艺并进行制剂学研究。方法：采用薄膜分散法制备白桦脂醇脂质体。进行单因素考察并采用L9(34) 正交试验优化工艺。结果：最佳制备处方为白桦脂醇16mg，卵磷脂80mg，胆固醇35mg，PBS pH为7.0。由此制备的白桦脂醇脂质体溶液为乳白色半透明液体，观察到其脂质体为类球形粒子，形态圆整，分布均匀，平均粒径为200～500nm，ζ电位为-25mv，包封率为43%，载药量为1.22%，体外释放试验结果表明其具有一定的缓释作用。结论：薄膜分散法制备白桦脂醇脂质体粒径较小，方法简便，重复性高，适用于白桦脂醇脂质体的制备。

白桦脂醇；脂质体；薄膜分散法；制剂学研究

白桦脂醇(Betulin)，又称白桦酯醇、桦木醇、桦木脑，为白桦树皮的主要成分，含量为11%～30%左右[1]，属于五元环的三萜类化合物[2,4]，具有羽扇豆烷型骨架，在自然资源中含量丰富。且白桦三萜类化合物具有抗真菌、消炎、抗HIV和抗肿瘤活性[5]。脂质体属于胶体系统，具有缓释和靶向，减轻毒性和增加细胞通透性作用[6]。因此本研究以白桦脂醇为模型药物，以大豆卵磷脂和胆固醇为辅料，采用薄膜分散法制备白桦脂醇脂质体靶向制剂，通过工艺的优化及制剂学研究，以期更多药物制剂应用于肿瘤治疗。

1 材料

白桦脂醇标准品(国家药品标准物质)；白桦脂醇原料药(宝鸡市方晟生物开发有限公司)；注射用大豆卵磷脂(上海晶纯实业有限公司)；胆固醇(上海晶纯实业有限公司)；甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)；无水乙醇(天津市科密欧化学试剂有限公司)。

2 方法

2.1 白桦脂醇脂质体的制备

2.1.1 薄膜分散法制备脂质体

称取处方量的磷脂、胆固醇和白桦脂醇，置于 250mL的茄形瓶中，加入20mL的有机溶剂超声溶解，减压旋转蒸发，除去有机溶剂(乙醇)，向茄形瓶中加入适量的PBS，30℃水浴洗膜，水浴超声后过0.45μm滤膜，即得脂质体。

2.1.2 单因素考察及工艺的优化

进行处方单因素考察，选择白桦脂醇质量、白桦脂醇与卵磷脂质量比、卵磷脂与胆固醇的质量比及PBS的pH值4个因素,见表1，以包封率EE(%)为考察指标，进行L9(34)正交试验优化工艺。

表1 四因素三水平表

2.2 白桦脂醇脂质体的制剂学研究

2.2.1 外观形态观察

在真空条件下将平铺于双面导电胶上白桦脂醇脂质体冻干粉末的表面喷金处理，扫描电镜观察其形态。

2.2.2 粒度分布

室温条件下，用水稀释按最佳处方制备的白桦脂醇脂质体溶液，置于样品池中测定粒径大小及分布。

2.2.3 ζ电位的测定

取2mL用0.01M磷酸盐缓冲溶液(最佳pH)稀释10倍的按最佳处方制备的白桦脂醇脂质体溶液置于样品池中，采用ζ电位分析仪测定脂质体表面的ζ电位，每个样品测5次。

2.2.4 包封率及载药量的测定

制备3批白桦脂醇脂质体以离心法测定脂质体内包封的药物量和未包封的游离药物量，用下式计算包封率和载药量。

式中，EE%-包封率；We-脂质体内包封的药物量；Wo-未包封的游离药物量。

2.2.5 体外释放测定

2.2.5.1 体外释放标准曲线

称取白桦脂醇标准品1mg，用PBS(pH7.4)的缓冲液作为溶剂，制备出100μg·mL-1的白桦脂醇标准溶液，分别40、60、100、140、160、220μL。得到4、6、10、14、16、22μg·mL-1的标准溶液，在200～400nm 的波长范围内进行光谱扫描。

2.2.5.2 体外释放曲线的绘制

量取适量白桦脂醇脂质体溶液，置于处理过的透析袋中并扎紧袋两端，放入装有释放介质(pH 7.4磷酸盐缓冲液)的100 mL溶出杯中，置于搅拌速度为100rpm·min-1，温度为37℃的溶出度测定仪中。分别于0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24h时取样5mL，测定药物含量，同时补加新鲜释放介质5mL。在相同的条件下考察白桦脂醇原料药的释放，以累积释药百分率对时间作图，分别绘制白桦脂醇脂质体和原料药的体外释放曲线。

3 结果

3.1 正交试验结果

由表2分析可知：根据R=|Kmax-Kmin|，本次实验的各因素对实验影响的大小排序为：PBS的pH>卵磷脂的用量>白桦脂醇的用量>胆固醇的用量，即D1>B1>A1>C2。所以，最优处方为白桦脂醇质量为16mg，卵磷脂的质量为80mg，胆固醇的质量为35mg，PBS的pH为7.0。

表2 L9 3(4)正交试验结果

3.2 制剂学研究结果

3.2.1 外观形态观察

由图1可观察到脂质体的大小均一，粒子较圆整。

图1 白桦脂醇脂质体冻干粉扫描电镜图

3.2.2 粒度分布测定

由图2可见白桦脂醇脂质体的粒径大部分都集中200～500nm。

图2 白桦脂醇脂质体的粒度分布图

3.2.3 ζ电位测定

由图3可见白桦脂醇脂质体的表面显负电性。

3.2.4 包封率和载药量

由表3可见平均包封率为43%，载药量为1.22%。

表3 白桦脂醇脂质体的包封率和载药量 (n=3)

图3 白桦脂醇脂质体的ζ电位的测定

3.2.5 体外释放实验结果

3.2.5.1 标准曲线的绘制

分别对不同浓度的白桦脂醇标准溶液进样，以吸光度(A)对浓度(C)进行线性回归，得方程：A=0.0193C+0.0669(r=0.9994)，结果表明白桦脂醇在6～34μg·mL-1范围内线性关系良好。见图4。

3.2.5.2 体外释放结果

由图5可见脂质体溶液在12h累积释放达64%，说明其与原料药相比有一定的缓释效果。

图4 白桦脂醇在PBS(pH7.4)中的标准曲线

图5 体外累积释放曲线(n=3)

4 讨论

白桦脂醇作为一种天然抗肿瘤药物，其靶向制剂拥有广阔的开发前景。而脂质体是目前研究比较广泛的微粒给药系统，其制备方法有超声分散法、薄膜分散法、乙醚注入法等[7]。本文采用薄膜分散法制备白桦脂醇脂质体，粒径小，质量佳，且简便易行，重复性高，为白桦脂醇的靶向应用提供了可靠的依据。 脂质体的包封率和稳定性与药脂比有着直接关

系[6]。实验通过单因素考察选定白桦脂醇质量、白桦脂醇与卵磷脂质量比、卵磷脂与胆固醇的质量比及PBS的pH值4个因素，以包封率为考察指标，采用正交试验设计方法将工艺进一步优化，得到最佳处方为：白桦脂醇16mg，卵磷脂80mg，胆固醇35mg，PBS pH为7.0。由此制得的白桦脂醇脂质体在电镜下观察可见大小均一，形态圆整，且具有一定缓释效果。为进一步观察其对肿瘤细胞的抑制作用奠定了基础。

[1]韩世岩.四氢吠喃—苯混合溶剂法分离纯化桦木醇[J]．林产化学与工业,2005,25: 129-132

[2]Takator IM. Skin care preparation and application of the same: JP, 2006327966[P]. 2006,12,07

[3]Eom S Y,Jung U S, Kim J H, et al. Cosmetic composition for decreasing wrinkles comprising betulin: KR, 2003067545[P]. 2003,08,14

[4]Kuznetsova S A,Kuznetsov B N, Lebedeva A B, et al. Capillary restorative agent: RU, 2276980[P]. 2006,05,27

[5]LiS Z, Zhang B. The chemistry of Z iz ip hus jujuba manages to study the general situation with the medicine[J]. Chi Trad it Herb Drugs (中草药) ,1983, 14 (10) : 39-43

[6]黄展,谷继伟.恶丙嗪脂质体的制备[J],黑龙江医药科学,2006,29(6)：23-24

[7]胡艳秋,于莲,胡俊华.肺靶向吡非尼酮脂质体的制备及体外释药性质研究[J]．黑龙江医药科学,2012,35(3)：28-30

国家自然基金项目，编号：8127401

韩雪冰(1986～)女，黑龙江七台河人，在读硕士研究生。

于莲(1963～)女，黑龙江佳木斯人，硕士，教授，硕士研究生导师。E-mail：jdyulian@163.com。

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