艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠抗抑郁作用实验研究

徐赛 谢沂宏 万美霞 王芳 张开莲

(泸州医学院药学院药物分析教研室，四川 泸州 646000)

艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠抗抑郁作用实验研究

徐赛 谢沂宏 万美霞 王芳 张开莲

(泸州医学院药学院药物分析教研室，四川 泸州 646000)

目的：评价艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠抗抑郁作用效果。方法：采用小鼠强迫游泳试验研究艾芬地尔抗抑郁作用。(1)艾芬地尔抗抑郁作用起效时间和持续时间试验：150昆明小鼠随机分为15组，每组10只，其中实验组(酒石酸艾芬地尔1 mg·kg-1)、空白对照组(0.9%氯化钠注射液)、阳性对照组(氯胺酮2 mg·kg-1)，分别在腹腔注射给药后30 min、60 min、120 min、240 min、300 min进行强迫游泳试验；(2)艾芬地尔抗抑郁作用量效关系试验：100只昆明小鼠随机分为10组，每组10只，其中实验组(酒石酸艾芬地尔0.2 mg·kg-1、1 mg·kg-1、5 mg·kg-1)，阳性对照组(氯胺酮2 mg·kg-1)，空白对照组(0.9%氯化钠注射液)，分别于腹腔注射后120min、240min进行强迫游泳试验；(3)反复给药后艾芬地尔抗抑郁效果评价：60只昆明小鼠随机分为6组，每组10只，其中实验组(酒石酸艾芬地尔5 mg·kg-1)，空白对照组(0.9%氯化钠注射液)，第1、2、3组分别连续给药2 d、4 d、6 d，三组均在最后一天给药后240 min进行强迫游泳试验。结果：艾芬地尔可在120 min内显著缩短强迫游泳小鼠累计不动时间，该作用可持续240 min，其作用强度在1 mg·kg-1～5 mg·kg-1范围内与剂量呈正相关；反复多次给药后，其作用持续时间仍然为240 min。结论：艾芬地尔对强迫游泳模型小鼠具有明显的抗抑郁作用，反复多次给药后，其抗抑郁作用持续时间维持稳定。

酒石酸艾芬地尔；抑郁症；抗抑郁作用；小鼠强迫游泳试验

酒石酸艾芬地尔片剂于1979年4月首次获准在日本上市，早期主要用于改善脑梗死或脑出血后遗症。之后法国也相继开发其片剂和注射剂，适应症更为广泛，还用于脑供血不足相关的精神颓废症状、短暂性缺血发作和老龄化引起的精神行为障碍等。目前艾芬地尔尚未在国内上市，但已有三家公司于2005年将其作为仿制药申报。本课题组从2011年开始对艾芬地尔抗抑郁作用进行研究，初步结果显示，单次给予小剂量(1～3 mg·kg-1)艾芬地尔能在短时间内显著缩短强迫游泳试验中小鼠累计不动时间，也能在短时间内显著减少穿梭箱试验中获得性无助模型小鼠的逃避失败次数[1-2]。因此推测艾芬地尔可能具有快速起效抗抑郁作用。

为了探讨艾芬地尔作为新型抗抑郁药的可能性，本课题组进一步对其抗抑郁作用起效时间和持续时间、量效关系以及反复给药后作用持续时间进行研究。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

清洁级雄性昆明小鼠，体重18-23 g(泸州医学院SPF实验动物中心，合格证编号SCXK(川)2013-17)。

1.1.2 主要仪器

秒表(运动秒表，中国广东万机电子秒表厂)；KQ500B超声清洗仪器(昆山市超声仪器有限公司)；BSA-CW型电子分析天平(赛多利斯科学仪器)；游泳烧杯1000 ml，直径12 cm，高15 cm；一次性无菌注射器(生产批号：批20120901，2 ml，成都市新津事丰医疗器械有限公司)。

1.1.3 药物

酒石酸艾芬地尔原料药(美国施瑞医药公司武汉子公司(3B Pharmachem International(Wuhan) Co., Ltd)，批号WH20120105，10 g，含量98.0 %)；盐酸氯胺酮注射液(批号110301，2 ml：0.1 g，福建古田药业有限公司)；0.9%氯化钠注射液(批号M13041014，500 ml，四川科伦药业股份有限公司)；灭菌注射用水(批号130702101，500 ml，四川美大康佳乐药业有限公司)

1.2 方法

小鼠试验前饲养于实验室3天，自由饮食饮水。室内温度维持在22-25℃，以消除环境对小鼠的影响，减少实验误差。为了减少时间对动物行为的影响，本实验均于上午进行。

1.2.1 强迫游泳试验[3]

选取体重18-23 g雄性小鼠，腹腔注射给药后，将小鼠放入水温为21-22℃的水中，水深10 cm，可稍作调整让小鼠后爪能够刚刚接触水底又不能使其支撑住身体，保证动物身体平衡又避免了溺水。强迫游泳总时间为6 min，游泳前2 min为适应时间，记录其后的4 min中内的累积不动时间，以s为单位。每只动物实验后换水，防止小鼠气味影响后面小鼠行为。

不动状态的判别标准[4]：小鼠在水中停止挣扎并呈漂浮状态，或仅有细小的肢体运动以保持头部浮在水面。

1.2.2 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用起效时间和持续时间试验

150只昆明小鼠随机分为15组，每组10只。分别腹腔注射1 mg·kg-1(0.25 ml)酒石酸艾芬地尔后30 min、60 min、120 min、240 min、300 min进行强迫游泳试验。每组对应空白组均腹腔注射相同体积的生理盐水，阳性对照组腹腔注射2 mg·kg-1(0.25 ml)氯胺酮[5]。

1.2.2 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用量效关系试验

100只昆明小鼠随机分为10组。分别腹腔注射高(5 mg·kg-1)、中(1 mg·kg-1)、低(0.2 mg·kg-1)三个剂量酒石酸艾芬地尔后分别于120 min、240 min进行强迫游泳试验。每组对应空白组均腹腔注射相同体积的生理盐水，阳性对照组腹腔注射2 mg·kg-1(0.25 ml)氯胺酮[5]。

1.2.3 反复给药后酒石酸艾芬地尔抗抑郁效果评价

60只昆明小鼠随机分为6组。腹腔注射酒石酸艾芬地尔5 mg·kg-1，第一组连续给药2 d，第二组连续给药4 d，第三组连续给药6 d，每日给药1次，三组均在最后一天给药后240 min记录小鼠累积不动时间。每组对应空白组均腹腔注射相同体积的生理盐水。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用起效时间和持续时间试验

氯胺酮组累计不动时间与生理盐水组有显著性差异(P<0.05)；药物组累计不动时间与氯胺酮组均有显著性差异；在给药后30 min、60 min、300 min，药物组累计不动时间与生理盐水组无统计学差异；在给药后120 min、240 min，药物组累计不动时间与生理盐水组具有统计学差异(P<0.05)，见图1。

2.2 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用量效关系试验

在给药后120 min，中剂量药物组、高剂量药物组累积不动时间与生理盐水组均有显著性差异(P<0.05)，且中、高剂量药物组之间有显著性差异。低剂量药物组累积不动时间与生理盐水组无显著性差异，低剂量药物组、中剂量药物组累积不动时间与氯胺酮组均有显著性差异(P<0.05)。高剂量药物组累积不动时间与氯胺酮组无显著差异。

图1 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用起效时间和持续时间试验

在给药后240 min，中剂量药物组、高剂量药物组累积不动时间与生理盐水组均有显著性差异(P<0.05)。低剂量药物组累积不动时间与生理盐水组无显著性差异。低剂量药物组、中剂量药物组累积不动时间与氯胺酮组均有显著性差异(P<0.05)。高剂量药物组累积不动时间与氯胺酮组无显著性差异，见图2。

图2 酒石酸艾芬地尔抗抑郁作用量效关系试验

3.3 反复给药后酒石酸艾芬地尔抗抑郁效果评价

反复给药6次、反复给药4次、反复给药2次后累计不动时间均与生理盐水组有显著性差异(P<0.01)；反复给药6次、反复给药4次、反复给药2次两两之间无显著性差异，如图3。

图3 反复给药后酒石酸艾芬地尔抗抑郁效果评价

3 讨论

非选择性N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂——氯胺酮快速起效抗抑郁作用已被临床和动物试验所证实[5-6]。单一小剂量的氯胺酮能在数小时内对具有抗药性的重症抑郁症患者迅速起效，作用可长达7天[5]。但随给药次数的增加，其抗抑郁作用持续时间逐渐缩短[9]。之后，将NMDA受体作为抗抑郁新靶点的研究取得了显著的进展[6-8]，虽然作用机制至今尚未明确，但其抗抑郁作用是肯定的。非选择性NMDA受体拮抗剂的副作用限制了其在临床上作为抗抑郁药的应用，而艾芬地尔作为NR2B亚型NMDA受体拮抗剂，可克服非竞争性NMDA受体拮抗剂容易产生拟精神症状以及对认知的损害等副作用，还可对抗应急所引起的脑细胞凋亡[9]。因此本课题选择艾芬地尔作为研究对象。

强迫游泳试验是经典的用于抗抑郁药物效能检验及新型抗抑郁药筛选的试验[7，10-11]。本文选择该试验对艾芬地尔是否具有抗抑郁作用做出初步评价，试验结果显示艾芬地尔可在2小时内显著缩短强迫游泳小鼠累计不动时间；该作用可持续4小时，其作用强度在1 mg·kg-1～5 mg·kg-1范围内与剂量呈正相关；反复多次给药后，其作用持续时间不存在随给药次数增加而逐渐缩短的情况。强迫游泳试验模型现常用于抗抑郁剂的快速筛选，不足之处在于假阳性太高,降低了其作为抑郁模型的有效性。后期课题组还会选择多种抑郁动物模型，如慢性不可预见性应激试验、获得性无助试验等，综合评价艾芬地尔对抑郁动物模型快速起效抗抑郁作用的效果。

将氯胺酮作为阳性对照药物是因为其作用靶点与艾芬地尔相同，都是NMDA受体拮抗剂，本课题研究目的就是试图证明艾芬地尔可能具有与氯胺酮相同或相似的快速起效抗抑郁作用。而作为抗抑郁作用试验阳性对照金标准的药物——氟西汀是一种选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRI)型的抗抑郁药，用药2-3周之后才起效，与本研究平行性较差。

4 结论

动物试验研究结果初步显示酒石酸艾芬地尔具有快速起效抗抑郁作用。

1 万美霞. “N2011”抗抑郁作用评价及其在大鼠体内药代动力学研究[D]. 2013,11-20.

2 谢沂宏. “N2011”抗抑郁作用研究及其鼻用原位凝胶的研制[D]. 泸州医学院硕士论文, 2013, 12-23.

3 Porsolt RD, Lepidnon M, Jalfre M. Depression:a new animal model sensitive to antidepressant treatment [J]. Nature, 1977, 266(5604):730-732.

4 Hashimoto K. Brain-derived neurotrophic factor as a biomarker for mood disorders:a historical overview and future directions [J]. Psychiatry Clin Neurosci, 2010, 64(4):341-357.

5 Berman RM, Cappiello A, Anand A, et al. Antidepressant effects of ketamine in depressed patients [J]. Biol Psychiatry, 2000, 47(4):351-354.

6 Zarate CA, Singh JB, Carlson PJ, et al. A randomized trial of an N-methyl-D-aspartate antagonist in treatment-resistant major depression [J]. Arch Gen Psychiatry, 2006, 63(8):856-864.

7 Li N, Lee B, Liu RJ, et al. mTOR-dependent synapse formation underlies the rapid antidepressant effects of NMDA antagonists [J]. Science, 2010, 329(5994):959-964.

8 Autry AE, Adachi M, Nosyreva E, et al. NMDA receptor blockade at rest triggers rapid behavioural antidepressant responses [J]. Nature, 2011, 475(7354):91-95.

9 Yan HC, Cao X, Das M, et al. Behavioral animal models of depression [J]. Neurosci Bull, 2010, 26(4):327-337.

10 Pollak DD, Rey CE, Monje FJ. Rodent models in depression research:classical strategies and new directions[J]. Ann Med, 2010, 42(4):252-264.

11 Cryan JF, Valentino RJ, Lucki I. Assessing substrates underlying the behavioral effects of antidepressants using the modified rat forced swimming test [J]. Neurosci Biobehav Rev, 2005, 29(4-5):547-569.

Anti-depression effects of ifenprodil tartrate on forced swimming mice model

Xu Sai, Xie Yi-Hong, Wan Mei-Xia, Wang Fang, Zhang Kai-Lian

(Department of Pharmacoanalysis, School of Pharmacy, Luzhou Medical College, Sichuan Luzhou 646000)

Objective：To investigate the anti-depression effects of ifenprodil tartrate on the forced swimming mice model. Methods: Forced swimming test(FST) on mice was used to investigate the anti-depression effect of ifenprodil.(1) Test of the onset time and the duration time of ifenprodil tartrate in the antidepressant effect:one hundred and fifty mouse were randomly divided into fifteen groups(n=10), including the experimental groups(1 mg·kg-1ifenprodil tartrate), the positive control groups(2 mg·kg-1ketamine) and the control groups(NS). The forced swimming test were taken after 30 minutes, 60 minutes, 120 minutes, 240 minutes and 300 minutes respectively and the immobility time of mouse were recorded.(2) Test of the dose-effect relationship of ifenprodil tartrate in the antidepressant effect:One hundred mouse were divided randomly into ten groups(n=10), including the experimental groups(0.2 mg·kg-1, 1 mg·kg-1and 5 mg·kg-1ifenprodil tartrate), the positive control groups(2 mg·kg-1ketamine) and the control groups(NS). The forced swimming test was taken after 120 minutes and 240 minutes respectively.(3) Test of the antidepressant effect evaluation of ifenprodil tartrate on repeated dose:sixty mouse were randomly divided into six groups(n=10), including the experimental groups(5 mg·kg-1ifenprodil tartrate) and the control groups(NS). The experimental group mouse were intraperitoneal injectioned ifenprodil tartrate for two days, four days and six days, respectively. The forced swimming tests were taken after 240 minutes at the last day of injection. Results: The onset time and the duration time of the effect of anti-depression of ifenprodil were respectively 120 minutes and 240 minutes. There was a positive correlation between the dose-dependent relationship and the antidepressant effect of ifenprodil tartrate in the range of 1 mg·kg-1～5 mg·kg-1. The duration time on repeated dose still was 120 minutes. Conclusions: The effect of anti-depression on the forced swimming mice model for ifenprodil tartrate was accurate and the duration time was stable enough on repeated dose.

Ifenprodil tartrate; Depression; Antidepressant effect; Forced swimming test(FST)

徐赛，女，在读硕士，Email：mag200@qq.com。

△通讯作者：张开莲，女，教授，主要从事新药质量标准研究、抗抑郁药研究，Email：442728665@qq.com。

2014-12-22)