雷公藤甲素对早期2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

李文化，白雪梅，吴耀东，黄 薇，田学永，门衡仝

(天津市北辰医院，天津 300400)

雷公藤甲素对早期2型糖尿病大鼠肾脏的保护作用

李文化，白雪梅，吴耀东，黄 薇，田学永，门衡仝

(天津市北辰医院，天津 300400)

目的 探讨雷公藤甲素对早期2型糖尿病(DM)模型大鼠肾脏的保护作用。方法 SD大鼠高糖高脂饲料喂养摘除左侧肾脏并建立2型糖尿病模型，随机分为糖尿病模型(M)组(n=15)和雷公藤甲素治疗(T)组(雷公藤甲素200 μg·kg-1·d-1，n=15)；健康对照(N)组15只，仅摘除左侧肾脏。T组初始造模后血糖与M组比较差异无统计学意义(P>0.05)，后每周监测一次血糖、血清胱抑素-C、24 h尿微量白蛋白和肾肥大指数(KM/BM)即肾脏质量与体质量比值。结果 4周时T组KM/BM低于M组(P<0.05)，M组KM/BM较N组明显升高(P<0.01)，T组KM/BM与N组比较差异有统计学意义(P<0.05)；T组血清胱抑素-C低于M组(P<0.01)，M组血清胱抑素-C较N组明显升高(P<0.01)，T组血清胱抑素-C与N组比较差异有统计学意义(P<0.05)；T组24 h尿微量白蛋白低于M组(P<0.05)，M组24 h尿微量白蛋白较N组明显升高(P<0.01)，T组24 h尿微量白蛋白与N组比较差异有统计学意义(P<0.05)；T组单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)免疫组化评分均值低于M组(P<0.05)，T、M组MCP-1免疫组化评分均值较N组明显升高(P<0.01)。结论 雷公藤甲素对早期2型糖尿病肾脏有保护作用，其机制可能与减少肾组织巨噬细胞浸润、下调MCP-1等有关。

雷公藤甲素；糖尿病肾病；血清胱抑素-C；MCP-1；24 h尿微量白蛋白

雷公藤是卫矛科雷公藤属植物,其根可入药，雷公藤自身有多种有效成分, 临床上用来治疗麻风病、类风湿性关节炎等，药理研究也表明其也有抗肿瘤、抗炎等作用。1977年黎磊石院士首次证实雷公藤对肾小球肾炎有减少蛋白尿、消水肿的作用,并相继发表了以雷公藤提取物TⅡ(相当于目前的雷公藤多甙片)治疗肾炎的临床及实验研究报告。雷公藤作为一种免疫抑制剂应用于临床已有30余年，近年来有关雷公藤各有效成分的作用及作用机制研究逐渐深入，对肾脏保护作用的研究主要集中在雷公藤甲素和雷公藤多甙(或雷公藤多苷)上。2型糖尿病可能与炎症介导的免疫反应有关[1],有研究亦表明雷公藤对糖尿病肾病有一定治疗作用，我们拟探讨雷公藤甲素对大鼠2型糖尿病模型早期干预后其对肾脏的保护作用。

1 材料与方法

1.1 动物及分组

清洁级SD雄性大鼠60只，体质量(230±20) g，购自北京大学医学部实验动物科学部[动物许可证号SCXK(京)200110012]，动物饲养温度24～26 ℃，湿度65%，12 h交替照明适应性常规饲料饲养1周。随机选取45只大鼠始终予高糖高脂饲料喂养，余15只常规饲料喂养，保持垫料干燥。2周后将60只大鼠左侧肾脏摘除，适应性喂养2周后全部成活。15只常规饲料喂养大鼠为N组，45只高糖高脂饲料喂养大鼠尾静脉一次性注射链脲佐菌素30 mg·kg-1(STZ，购自Sigma公司，以pH4.4，0.1 mmol·L-1枸橼酸缓冲液配成2%浓度)建立2型糖尿病大鼠模型(T2DM)；N组仅给予等量枸橼酸缓冲液。注射STZ后5 d，剪尾取血测血糖，以随机血糖≥16.7 mmol·L-1判定是否造模成功。造T2DM模型成功30只，随机分为2组：糖尿病模型(M)组(n=15)和雷公藤甲素治疗(T)组(雷公藤甲素200 μg·kg-1·d-1，n=15)。模型成功后d 2 T组给予雷公藤甲素(上海源叶生物科技有限公司提供，生产批号1206，雷公藤甲素经HPLC检验药物纯度在98%以上)200 μg·kg-1·d-1(相关文献显示为中低剂量[2])灌胃(使用食用植物油充分溶解后配制成相应的浓度);N组和M组每日给予等量植物油灌胃。糖尿病大鼠在整个实验期间均未予胰岛素注射。

1.2 标本采集及检测

造模成功当天及以后每周一次代谢笼收集24 h尿，测尿量、24 h尿微量白蛋白；称大鼠体质量；采鼠尾静脉血，检测血糖、血清胱抑素-C，至第四周末为止。第四周取右肾，称肾质量(KM)，经脱水、包埋、切片及HE染色，光镜下常规病理镜检、免疫组化MCP-1检测。

血糖仪(美国强生公司)检测血糖，罗氏P800生化仪免疫比浊法检测血清胱抑素-C，免疫比浊分析法测检UAL。

2 结 果

表1 初始血糖及4周时KM/BM比较

注：与N组比较**P<0.01；与T组比较#P<0.05

表2 血清胱抑素-C、24 h尿微量白蛋白比较

注：与M组比较*P<0.05，**P<0.01；与N组比较#P<0.05

表3 MCP-1阳性细胞记数评分及阳性细胞显色评分(5个视野)

注：A为阳性细胞数分级0%～1%=0、1%～10%=1、10%～50%=2、50%～80%=3、80%～100%=4；B为阳性细胞显色强度分级0(阴性)、1(弱阳性)、2(阳性)、3(强阳性)；IHS=A×B[1]

A 模型组 B 治疗组C对照组

图1 MCP-1免疫组化图例

A M组肾脏病理图例 B T组肾脏病理图例

IHSM组6.42±1.00*#T组5.11±1.05*N组1.81±0.38

注：与N组比较*P<0.01；与T组比较#P<0.05

光镜下可见M组和T组均有肾小球系膜细胞及基质轻至中度弥漫性增生，毛细血管袢空泡变性，血管袢肥大饱满。肾小管上皮重度空泡颗粒变性，灶状刷状缘脱落。

3 讨 论

雷公藤甲素对糖尿病肾脏的保护作用机制可能与减少肾组织巨噬细胞浸润、下调MCP-1等表达有关[3]。雷公藤甲素能通过抑制肾组织巨噬细胞浸润、炎症反应，从而减轻细胞损伤，达到肾脏保护作用[4]；通过恢复糖尿病大鼠肾组织nephrin与podocin蛋白表达减少蛋白尿排泄[5]。雷公藤多甙对T2DM大鼠肾小管-间质损害的保护作用机制可能与下调CTGF、TGF-β1及部分恢复BMP-7的表达有关[6]。雷公藤多苷可减少DN大鼠尿蛋白排泄及降低尿素氮、血肌酐，明显降低CTGF mRNA表达水平，有效延缓DN进展，有一定保护作用[7]。大鼠发病时氧自由基的产生与T细胞亚群的异常分化有着密切的联系,T11不仅能抑制T细胞亚群的异常分化且可使自由基恢复正常[8]。雷公藤多苷能明显改善肾脏功能,其机制可能与抑制氧化应激、增强机体抗氧化能力和抑制TGF-β1表达有关[9]。

雷公藤甲素对大鼠糖尿病模型早期干预后对肾脏的保护作用机制可能与以下几方面有关：①雷公藤甲素主要作用于炎症因子，抑制免疫反应，从而减轻对肾脏的免疫损伤；MCP-1与免疫炎症反应密切相关，应用雷公藤甲素可抑制免疫反应，下调MCP-1的表达，提示雷公藤甲素可能抑制免疫反应，本研究以MCP-1为检测项目，结果治疗组MCP-1免疫组化评分均值低于模型组(P<0.05)，支持这一观点；②糖尿病是代谢性疾病，糖尿病发病可能与免疫反应存在某种联系，应用雷公藤甲素抑制免疫反应，可能对糖尿病本身有治疗作用，减轻糖尿病病情进展，从而预防肾脏并发症的发生，但需要进一步研究证实。国内已有相关雷公藤治疗糖尿病肾病的研究报道，与已有文献相比，我们更着重于探讨了雷公藤在糖尿病早期对肾脏保护的应用，密切观察糖尿病肾病的早期指标，进一步研究可考虑留取更多组织的病理标本，如：眼底、肺组织、胰腺组织等，并可从MCD-1、CD146、TGF-β等多种免疫炎症因子角度去研究，进一步探讨免疫反应在糖尿病早期的作用机制及雷公藤对肾脏的保护作用机制。

[1]曾静波，王姮.2型糖尿病与自身免疫反应[J].国际内分泌代谢杂志，2007,27(4):264-265.

[2]姚金成,饶建，曾令贵，等.雷公藤甲素单次或多次给药对大鼠肝药酶活性的影响[J].中国药房，2010,21(11):961-962.

[3]马瑞霞,刘丽秋，徐岩，等.雷公藤甲素对2型糖尿病模型大鼠肾脏的保护作用及其机制[J].中华高血压杂志,2008，16(12):1120-1124.

[4]马瑞霞，刘雪梅，刘丽秋，等.雷公藤甲素对2型糖尿病大鼠肾组织足细胞nephrin、podocin蛋白表达的影响及机制[J].中华糖尿病杂志，2010，2(4)：291-296.

[5]薛晓菲，翟丽慧，刘相萍，等.雷公藤甲素对2型糖尿病大鼠足细胞的影响研究[J].临床合理用药杂志,2012,5(21):9-10.

[6]蒋伟,刘丽秋,马瑞霞.雷公藤甲素对2型糖尿病大鼠肾小管-间质损伤的保护作用[J].中国康复,2011,26(3):163-164.

[7]吕海琳，刘丽秋.雷公藤多苷对糖尿病肾病大鼠肾脏CTGF表达的影响[J].中国中西医结合肾病杂志,2009,10(4):312-314.

[8]钱书虹，王诗瑾，钱庆文，等.雷公藤多甙对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠血浆自由基与T细胞的影响[J].中国现代医学杂志,2000，10(9):23-25.

[9]李宜川，沈永杰，刘国玲，等.雷公藤多苷对糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制[J].中国临床药理学杂志，2012,28(6):450-451.

[责任编辑：李蓟龙 英文编辑：谢利峰]

Protective Effect of Triptolide on Kidney of Early Diabetes Mellitus(DM)Model rats

LI Wen-hua，BAI Xue-mei，WU Yao-dong,et al

(Tianjin Beichen hospital，Tianjin 300000，China)

Objective To investigate the protective effect of triptolide on kidney of early diabetes mellitus(DM)model rats.Methods SD rats were established into type II diabetes mellitus rat model and their left kidneys were removed.Then they were randomly divided into three groups: healthy control(N)group(n=5),diabetes mellitus(M)group(n=15)and triptolide treatment(T)group(triptolide 200 μg·kg-1·d-1,n=15).At the initial stage after modeling,the serum glucose of T group showed no significant difference with that of M group(P>0.05),indicating similar degrees of diabetes mellitus of the two groups.Afterwards,the blood glucose,serum cystatin-C,24-hour urinary albumin,renal hypertrophy index(KM/BM),i.e.the kidney mass and body mass ratio were tested weekly.Results On the fourth week,KM/BM of T group was lower than that of M group(P<0.05),while KM / BM of M Group was significantly higher than that of N group(P<0.01).There was statistically significant difference between KM/BM of T and N groups(P<0.05);the serum cystatin-C of T group was lower than that of M group(P<0.01).At the same time,serum cystatin-C of M group was significantly higher than that of N group(P<0.01).There was statistically significant difference between the serum cystatin-C of T and N groups(P<0.05);24-hour urinary albumin of T group was lower than that of M group (P<0.05),while 24-hour urinary albumin of M group was significantly higher than that of N group(P<0.01).There was statistically significant difference between the 24-hour urinary albumin of T and N groups(P<0.05);The average immunohistochemical score of the monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)of T group is lower than that of M group(P<0.05),and average immunohistochemical score of MCP-1 of T and M groups were significantly higher than that of N group(P<0.01).Conclusion Triptolide could have a protective effect on early diabetic nephropathy.The mechanism might be associated with reduced renal tissue macrophage infiltration,reduced MCP-1 and so on.

triptolide；diabetic nephropathy；serum cystatin-C;MCP-1；24-hour urinary albumin

天津市北辰区科委指令性课题(No.BCWS2012-09)

李文化(1965-)，男，河北万全人，主任医师，主要研究方向：肾病血液净化。

R 285.5

A

10.3969/j.issn.1673-1492.2015.05.017

来稿日期：2015-04-10