HPLC法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量

周 军,史德胜,王 杰,刘 冰，邵建强,刘雪莹

(1.天津市药品检验所，天津 300070；2.天津丹溪国药研究所，天津 300061；3.天津市市场和质量监督管理委员会，天津 300070)



药品质量与检验

HPLC法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量

周 军1,史德胜2,王 杰1,刘 冰1，邵建强1,刘雪莹3

(1.天津市药品检验所，天津 300070；2.天津丹溪国药研究所，天津 300061；3.天津市市场和质量监督管理委员会，天津 300070)

目的:建立高效液相色谱法测定茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量。方法：采用HPLC法，乙腈-0.5%磷酸溶液(83∶17)为流动相，流速为1.0 ml/min，检测波长为210 nm，柱温为35 ℃。结果：6个厂家12批次的茯苓配方颗粒中茯苓酸含量介于0.87～69.13 μg/g之间。结论：该方法操作简便，结果稳定可靠，可用于茯苓配方颗粒的质量评价。

茯苓配方颗粒，HPLC，茯苓酸

中药配方颗粒是将单味中药饮片经过科学加工并提取其有效成分制成的中药饮片新剂型[1]，具有服用方便、计量准确、安全卫生、便于调配等优点。茯苓配方颗粒是以茯苓饮片为原料，经水提取后，浓缩、干燥、制粒而成的颗粒，具有与原饮片相同的功效[2]。目前关于茯苓配方颗粒尚无含量测定方法的报道。茯苓酸是茯苓中的主要有效成分，具有增强免疫力、抗肿瘤以及镇静降血糖的作用。对其进行含量测定，可以保证临床用药的安全、有效。本试验建立了茯苓配方颗粒中茯苓酸含量测定的方法。

1 仪器与试药

LC-10A型高效液相色谱仪；SPD-10A紫外检测器；Anastar色谱工作站。乙腈为色谱纯，水为蒸馏水，其他试剂均为分析纯。茯苓酸对照品(天津丹溪国药研究所，批号20140510，含量>98%)。茯苓配方颗粒由广东一方制药有限公司(厂家1，批号1109068、1110062)、江阴天江药业有限公司(厂家2，批号1110002、1108102)、四川新绿色药业股份有限公司(厂家3，批号1107024、1110115)、北京康仁堂药业有限公司(厂家4，批号120902、121101)、华润三九医药股份有限公司(厂家5，批号1108003s、1111001s)、培力(南宁)药业有限公司(厂家6，批号A110572-02、A110866-02)提供。

2 方法与结果

2.1 检测波长的确定 取适量茯苓酸对照品，加入甲醇制成一定质量浓度的对照品溶液，以甲醇为空白，用紫外-可见分光光度计于200～400 nm波长范围内进行波长扫描。扫描结果表明，茯苓酸在210 nm附近有最大吸收，故选定210 nm为检测波长。

2.2 色谱条件 色谱柱：迪马公司Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流动相：乙腈-0.5%磷酸溶液(83∶17)；流速：1.0 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μl。理论板数按茯苓酸计算应不低于5 000。

2.3 溶液制备

2.3.1 对照品溶液的制备 取茯苓酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含0.077 3 mg的溶液，作为对照品储备液。再精密吸取对照品储备液2 ml至25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3.2 供试品溶液的制备 取茯苓配方颗粒，研细，取适量(相当于5.0 g饮片)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密量取对照品溶液、供试品溶液各20 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图1。

1.茯苓酸

2.4 线性关系考查 取0.077 3 mg/ml茯苓酸对照品储备液，精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、6.0、8.0和10.0 ml置25 ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件分别进样，测定峰面积值。以浓度(μg/ml)为横坐标，相应峰面积值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程Y=570 352.3X-47.58，(r=0.999 8)。结果表明茯苓酸在1.546～30.92 μg/ml范围内呈良好的线性关系。

2.5 重现性试验 取同一批号(批号1108102)的样品6份，按供试品溶液的制备方法制备，依法测定，结果测得样品中茯苓酸的平均质量分数为0.027 41%，RSD为1.35%(n=6)。

2.6 稳定性试验 取茯苓配方颗粒供试品溶液，按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8和24 h测定峰面积值，其RSD值为0.74%，结果表明供试品溶液在24 h内测定是稳定的。

2.7 精密度试验 取线性关系试验项下的浓度为0.006 18 mg/ml的对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积值，其RSD值为0.73%，结果表明仪器精密度良好。

2.8 加样回收率试验 取上述同一批号的茯苓配方颗粒(批号1108102)，精密称取250 mg，平行6份，分别精密加入茯苓酸对照品溶液(浓度为0.077 mg/ml)1.0 ml，补加甲醇至25 ml，按上述供试品溶液的制备方法操作。按“2.2”项下色谱条件测定峰面积值，计算回收率，平均回收率为100.06%，RSD为1.42%，结果见表1。

表1 茯苓酸加样回收率试验结果(n=6)

2.9 样品测定 取茯苓配方颗粒各厂家各批次样品，均按供试品溶液的制备方法制备。按上述色谱条件分别进样，测定峰面积值，计算每相当于1 g饮片的茯苓配方颗粒含茯苓酸的量(μg/g)，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(n=3)

3 讨论

3.1 本试验结果表明，各厂家生产的茯苓配方颗粒中茯苓酸的含量差异较大，最小值为0.87 μg/g，最大值为69.13 μg/g，平均含量为19.31 μg/g，总体上看含量较低。这是由于茯苓配方颗粒采用水提取工艺，而茯苓酸为三萜类有机酸[3，4]，水溶性差，若要提高配方颗粒中茯苓酸的含量，提取工艺中应考虑以稀醇为溶媒。

3.2 本试验建立的高效液相色谱法测定茯苓酸的含量，考查了多种色谱条件，使茯苓酸峰与相邻杂质峰达到基线分离。该法操作简单、专属性强、重现性好，可以作为茯苓配方颗粒的质量控制方法。

1 仇法新，高福君.中药配方颗粒的发展现状及应用前景[J].中国药房，2007，18(3)：163-165

2 张先淑，胡先明.茯苓三萜化合物的药理作用及临床应用研究进展[J].重庆工贸职业技术学院学报，2011，24(4)：46-50

3 杨树东，包海鹰.茯苓中三萜类和多糖类成分的研究进展[J].菌物研究，2005，3(3)：55-61

4 仲兆金，刘浚.茯苓有效成分三萜的研究进展[J].中成药，2001，23(1)：58-62

Determination of content of pachymic acid in poria formula granule by HPLC

Zhou Jun1, Shi Desheng2, Wang Jie1, Liu Bing1, Shao Jianqiang1, Liu Xueying3

(1.Tianjin Institute for Drug Control, Tianjin 300070; 2.Tianjin Danxi Traditional Chinese Medicine Institute, Tianjin 300061; 3.Tianjin Market and quality supervision and Management Committee, Tianjin 300070)

Objective: To establish an HPLC method for determination of pachymic acid in poria formula granule. Methods: HPLC was performed on a Diamonsil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)column at 35 ℃with mobile phase consisting of acetonitrile-0.5%phosphoric acid solution (83∶17). The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was 210 nm. Results: The content of pachymic acid in twelve batch es of poria formula granule products from six factories ranged between 0.87 μg/g and 69.13 μg/g. Conclusion: The method is simple and reliable, and can be used for the quality evaluation of poria formula granule.

poria formula granule, HPLC, pachymic acid

2015-08-24

天津市科技支撑计划重点项目(No.12ZCZDSY01000)

R927.2

A

1006-5687(2015)06-0016-02