HPLC法测定小儿腹泻散中没食子酸的含量

雷林洁杨 淼霍潘峰王 军马亮英*

1.新疆医科大学第二附属医院 新疆 乌鲁木齐 830028；2.新疆医科大学药学院 新疆 乌鲁木齐 830011

HPLC法测定小儿腹泻散中没食子酸的含量

雷林洁1杨 淼1霍潘峰2王 军1马亮英1*

1.新疆医科大学第二附属医院 新疆 乌鲁木齐 830028；2.新疆医科大学药学院 新疆 乌鲁木齐 830011

目的：建立小儿腹泻散中没食子酸的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱：Inert Sustain C18柱（250× 4.6mm，5μm）；检测波长：271nm；流速：1.0ml·min－1；柱温：40℃；流动相：甲醇－0.085%磷酸溶液（6∶94）。结果：没食子酸在1.55～62μg·ml－1范围内呈良好的线性关系，r＝0.9999，平均回收率为99.24%，RSD＝0.64%。小儿腹泻散中没食子酸的含量为5.18mg ·g－1，RSD＝1.66%。结论：该方法操作简单、准确，可用于小儿腹泻散中没食子酸的含量测定及质量控制。

HPLC；小儿腹泻散；没食子酸；含量测定

小儿腹泻散为我院的医院制剂 （制剂批准文号：新药制字Z20040551），全方由儿茶、五倍子、清半夏、朱砂、枯矾、氢氯噻嗪等药组成，已临床使用多年，具有涩肠止泻的功效，主要用于小儿 “水样便”腹泻。处方中除儿茶具有收敛止泻的作用外，五倍子中的鞣质也是其止泻的主要化学成分。多年来，鞣质成分在医药领域被公认为具有较强的收敛性及蛋白质凝固作用，临床上用于各种止血、止泻及抗菌抗病毒［2］。随着新技术、新方法的应用，还发现鞣质具有抗脂质过氧化、抗突变、清除自由基、抗艾滋病与抗肿瘤等多种药理活性［3］，使其在临床中日益受到重视，也对没食子酸的含量测定方法提出了更高的要求。中国药典记载五倍子中鞣质的含量以没食子酸［1］计不低于50%。本文参照中国药典，采用高效液相色谱法测定小儿腹泻散中没食子酸的含量，提高小儿腹泻散的质量标准，为更好地控制该制剂的质量提供实验依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－20AT型高效液相色谱仪（SPD－M20型检测器、CTO－20ASVP型柱温箱、SIL－20A自动进样器，日本岛津）；电子天平（BS210S，北京赛多利斯天平有限公司，d＝0.1mg）；恒温水浴锅（DK－S26型，上海精宏实验设备有限公司）；高速中药粉碎机 （HX－200型，浙江省永康市溪岸五金药具厂）；超声波清洗器（KQ500DE型，昆山市超声仪器有限公司）；智能恒温电热套 （DRTSX型，郑州长城科工贸有限公司）。1.2 材料 没食子酸对照品（批号：110831－201204，中国食品药品检定研究院）；小儿腹泻散（批号：20141224、20141226、20141228，新疆医科大学第二附属医院）；甲醇（sigma，色谱纯）；水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Inert Sustain C18柱（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相：甲醇－0.085%磷酸溶液（6∶94）；流速：1.0 ml·min－1；进样量：10μl；柱温：40℃，由对照品色谱 （液相检测器为二极管阵列）确定检测波长为271nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于5000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品6.2mg，置100ml棕色量瓶中，采用50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得62μg·ml－1没食子酸对照品储备液。

2.3 供试品溶液制备［1］精密称取小儿腹泻散0.1g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇溶液25ml，称定重量，超声处理5min，冷却，再次称量重量，采用50%甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察 精密量取没食子酸对照品溶液 （没食子酸浓度为62μg·ml－1）0.2、0.5、1、3、5、10m l分别置10ml棕色量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。没食子酸的线性回归方程为y＝29474x＋4186.7，相关系数r＝0.9999，表明没食子酸在1.24～62μg·ml－1范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 分别精密吸取浓度为12.4μg·m l－1的同一对照品溶液，连续重复进样6次，进样量10μl，结果峰面积平均值为368037.8，RSD为0.49%，试验结果表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于配制后1、2、3、6、9、12h进样，记录色谱图，结果没食子酸的平均峰面积为367542.8，RSD为0.15%，试验结果表明供试品溶液在12h内稳定性良好。

2.7 重复性试验 分别精密称取同一批样品6份，按“2.3”项制备供试品溶液，精密吸取供试品溶液10μl进样，供试品中没食子酸平均含量为5.26mg·g－1，RSD为0.98%，结果表明没食子酸含量测定方法重现性良好。

2.8 加样回收率试验 取已知含量样品9份，分别精密加入高、中、低浓度对照品溶液各3份，按供试品溶液的制备方法制备，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。平均回收率为99.24%，RSD＝0.64%。

2.9 样品含量测定 照供试品溶液的制备方法分别制备3个批次的供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液10μl进样，记录峰面积，计算没食子酸含量，结果3批样品中没食子酸平均含量为5.18mg·g－1，RSD为1.66%。

表1 加样回收率试验 （n＝9）

3 讨论

3.1 供试品处理［4－6］供试品溶剂的选择，分别采用无水乙醇、60%乙醇、甲醇、50%甲醇、纯水对样品进行超声提取，结合液相色谱系统适用性的考察，确定采用50%甲醇作为提取溶剂提取效果最佳，色谱峰能够较好的分离，而含乙醇的溶剂提取出的样品色谱峰不能分离，无法计算峰面积。超声提取时间的考察分别考察了5、10、15、30min，没食子酸的含量无显著性差异。因此，供试品的制备选用50%甲醇超声提取5min。

3.2 流动相的选择［7－10］实验考察了不同比例甲醇－磷酸溶液、乙腈－冰醋酸溶液、乙腈－磷酸溶液作为流动相，均能得到较好的色谱峰。其中当甲醇－0.085%磷酸溶液（15∶85）时，出峰时间较快，但色谱峰分离度不够。经预实验筛选，结合节约成本和保护色谱柱的考虑，确定采用甲醇－0.085%磷酸溶液（6∶94）作为流动相。

小儿腹泻散作为我院特色制剂，疗效显著，但处方成分复杂，不仅由中西药组合，还含有毒性药材朱砂，因此在临床使用与制剂质量控制过程中应该严格控制，加强临床监管，提高制剂质量标准，保障患儿的生命健康。本文结合制剂的特点，参照中国药典中五倍子的含量测定方法，建立了小儿腹泻散中没食子酸的HPLC含量测定方法，该方法简单，灵敏度高，稳定性好，可用于小儿腹泻散的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：62.

［2］王一博，曲范娜，杜莹，等.HPLC法测定鞣酸蛋白原料及制剂中鞣酸的含量［J］.中国药品标准，2014，15（3）：196－199.

［3］高雅，李骅，王四旺，等.没食子酸的药理作用及其药物代谢动力学研究进展［J］.西北药学杂志，2014，（4）：435－438.

［4］樊宝娟，刘雪峰，曾爱国，等.HPLC法测定金线草不同部位没食子酸的含量［J］.西北药学杂志，2014，29（6）：573－575.

［5］尼加提·阿不来提，古丽巴哈尔·尼牙孜.HPLC法测定维吾尔药比合玛尔江散中没食子酸的含量［J］.中国民族医药杂志，2014，23（8）：26－27.

［6］李建梅，祖里皮亚·塔来提，库尔班尼沙·买买提，等.RP－HPLC法测定开西尼孜散剂中没食子酸和鞣花酸的含量 ［J］.西北药学杂志，2015，30（1）：26－28.

［7］樊珍珍，热娜·卡斯木，王晓梅，等.正交试验优选罗布麻叶中总鞣质提取工艺［J］.中国实验方剂学杂志.2013，19（7）：13－16.

［8］王建平，张兰欣，刘西亚，等.榆黄喷雾剂质量标准的建立［J］.中国药师，2014，17（11）：1950－1953.

［9］周静，美丽万·阿不都热依木.HPLC法测定维药刺山柑种子中没食子酸和芦丁的含量［J］.西北药学杂志，2014，29（2）：117－119.

［10］王艳坤，赵萍，高建，等.HPLC法同时测定烧伤膏中没食子酸、芦荟大黄素、大黄素和大黄酚［J］.中成药，2014，36（5）：1095－1097.

Determ ination of gallic acid in infantile diarrhea powder by HPLC

LEILinjie1YANG Miao1HUO Panfeng2WANGJun1MALiang ying1*
1.The second affiliated hospital of Xinjiang Medical University，Urumqi，830028；2.Pharmacy college of Xinjiangmedical university，Urumqi，830054

ObjectiveTo establish an HPLCmethod for the determination ofgallic acid in infantile diarrhea powder.M ethods the HPLC separation was performed on a Inert Sustain C18column（250×4.6mm，5μm）in gradient elutemode with amixture consisting ofmethol and 0.085m l·L－1phosphate acid solution at40℃，the flow rate was 1.0ml·min－1，the detection wave length was set at 271nm.Results There were established a good linear relation between 1.55～62.0μg·ml－1of gallic acid，r＝0.9999，the average recovery was99.24%，RSD was0.64%.the contentofgallic acid in infantile diarrhea powderwas5.18mg·g－1，RSD was1.66%. Conclusions Thismethod is simple，accurate，which can be used to detemination of contents and quality control of the infantile diarrhea powder.

HPLC；infantile diarrhea powder；gallic acid；content determination

R917

A

1007－8517（2015）13－0004－02

2015.03.23）

陕西省科技统筹创新工程计划项目（2011KTCL03－05）；陕西省教育厅产业化中试项目（2010JC05）。

张严磊 （1984－），男，博士，讲师，从事中药资源产业化开发与利用研究工作。

王梅 （1971－），女，硕士，主任药师，从事中药配伍应用及其安全性与有效性研究。