蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠血清白介素的影响

陈英松 水 玲 乌云格日乐 吴七柱

内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110

蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎大鼠血清白介素的影响

陈英松 水 玲 乌云格日乐 吴七柱

内蒙古医科大学，内蒙古 呼和浩特 010110

目的：观察蒙医五味甘露浴对佐剂性关节炎（AA）大鼠的血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a含量的影响。方法：将40只SD雄性大鼠随机分为四组，每组10只。模型组、来氟米特组、五味甘露药浴组三组大鼠进行造模，无菌条件下在右后足趾部注射0.1ml的CFA（完全弗氏佐剂）致炎，正常对照组注射同剂量的生理盐水。造模后第3d开始对五味甘露药浴组进行1次／d，30min／次，连续药浴治疗15d，温度为40±2℃。正常对照组和模型组做温水浴对照，来氟米特组以0.17g／kg剂量灌胃来氟米特治疗15d。采用ELISA法检测大鼠血清白介素含量。结果：模型组与正常对照组相比血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明显升高（P＜0.05），来氟米特组和五味甘露浴组与模型组相比血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明显降低（P＜0.05），蒙医五味甘露药浴组与来氟米特组比血清白介素显著降低，但无统计学意义（P＞0.05）。结论：蒙医五味甘露药浴可通过调节AA大鼠血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量，起到免疫调节作用。

蒙医；五味甘露浴；AA大鼠；白介素

蒙医在千百年的应用形成了简、便、验、廉且疗效独特等优点。五味甘露浴是以小白蒿、水柏枝、麻黄、杜鹃叶、刺柏等五种药物组成，临床应用治疗RA等风湿病方面具有一定的疗效。本研究采用CFA诱导的佐剂性关节炎模型大鼠，检测治疗前后血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量的影响，探讨蒙医五味甘露浴的免疫调节机制。

1 材料

1.1 实验动物 清洁级雄性SD大鼠40只，4～6周龄，体重180～200g，由北京实验动物科技有限公司提供，适应性饲养3天，自由饮水和摄食。

1.2 药物与试剂 完全弗氏佐剂（CFA，Sigma公司产品），IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a ELISA检测试剂盒，（批号分别为：DZE30419、DZE30648、DZE30646、DZE30635，北京新亚太生物科技有限公司）；五味甘露浴剂（批号：720121110，内蒙古自治区中蒙医医院中心制剂室提供），来氟米特（国药准字号：H20000550，苏州长征一欣凯制药有限公司）。

1.3 仪器 80－2式离心机（金坛市化城敏科实验仪器厂）；特制浴疗器等。

2 方法

2.1 动物分组与造模 将40只SD大鼠，随机分为正常对照组、模型组、来氟米特组和五味甘露浴组，每组10只。模型组、来氟米特组、五味甘露浴组大鼠进行造模。无菌条件下在右后足趾注射0.1ml的CFA（内含0.1℅灭活结核杆菌）致炎［1］，正常对照组注射同剂量的0.9%的生理盐水，之后针眼处涂抹紫药水。

2.2 给药方法 正常对照组在第3d开始进行温水浴治疗，1次／d，30min／次，连续治疗15d。水浴方法为在50×30× 20cm的半透明塑料容器中加入温度为40±2℃的清洁饮用水1000ml，将大鼠的四肢和尾部浸泡在温水中，治疗结束后用清洁毛巾擦拭干净后放入鼠笼中。模型组在造模之后的浴疗方法同正常对照组。来氟米特组在造模后第3d开始灌胃来氟米特，0.17g／kg的给药量1次／d，连续灌胃15d。药浴组在造模后第3d开始进行温五味甘露浴（33.4%）治疗，浸泡方法同正常对照组。

2.3 取材、检测方法 末次治疗后24h，用乌拉坦腹腔麻醉大鼠，切开腹腔用5ml注射器抽取约4－5ml腹主动脉血，注入管中，静放1－2h后，4000 r／min离心10 min，取上清液。采用酶联免疫吸附法 （ELISA）检测大鼠血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量，按试剂盒说明操作。

2.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计软件分析，计量数据以均数±标准差 （±s）表示，多组间单因素方差分析法，P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

模型组与正常对照组比血清白介素IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量明显升高（P＜0.05），来氟米特组和五味甘露浴组与模型组比血清白介素含量明显降低 （P＜0.05），蒙医五味甘露浴组与来氟米特组比血清白介素显著降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 各组大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量的比较 （±s）

表1 各组大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6、TNF－a含量的比较 （±s）

注：与正常对照组相比较，*P＜0.01；与模型组相比较，△P＜0.05。

组别 例数 IL－1β／ng／L IL－2／ng／L IL－6／ng／L TNF－a／ng／L正常对照组 10 2.52±0.77 74.09±22.95 74.09±22.95 16.49±5.58模型组 10 5.18±0.83* 181.29±31.15* 181.29±31.15* 29.47±8.94*来氟米特组 10 3.92±0.88△ 150.06±16.38△ 150.06±16.38△ 23.82±8.94△五味甘露浴组 10 3.76±1.25△ 141.01±48.75△ 141.01±48.75△ 20.52±5.11△

4 讨论

类风湿关节炎（Rheumatoid Arthriti，RA）是以损害滑膜、软骨和骨的一种慢性、炎症性自身免疫性疾病。大鼠佐剂性关节（Adjuvant arthritis，AA）模型在临床表现、病理学、免疫学改变和病理机制等与RA具有许多相似特征，是研究RA病理机制和评价RA治疗药物较理想的动物模型［2］。蒙医五味甘露浴疗效确切，临床应用广泛，在白脉病、腰腿痛、风湿性关节炎、类风湿性关节炎、痛风、强直性脊柱炎、胃病、皮肤病、骨关节病等具有较好的作用。在作用机制研究也取得了一定进展［3］，是治疗RA的药浴代表疗法之一。

CFA诱导的动物模型是一种免疫性关节炎模型，主要表现为多发性关节炎；组织学特点包括关节局部炎症细胞的大量浸润，增生性滑膜炎，关节软骨及骨组织的破坏；在免疫功能方面不仅在细胞免疫有表现，而且在体液免疫也有一定的体现。IL－1β具有多种生物学特性，是免疫反应、炎症及组织损伤的主要介质之一，可刺激滑膜细胞生成，活化滑膜细胞及破骨细胞产生金属蛋白酶和胶原酶，从而造成骨与关节的破坏。TNF－a是RA发病机制的促炎性因子，参与整个RA的病变过程［4］。IL－6作用于IL－1β、TNF－a不同，它不能直接刺激骨膜成纤维细胞和软骨细胞产生金属蛋白和胶原酶，但能诱导肝细胞分泌急性期蛋白，并诱导其他细胞因子如IL－1β、IL－2、TNF－a的产生进而发挥致病作用。研究发现，IL－1β和TNF－a在RA患者外周血和滑膜液中均增高，可激活血管内皮细胞，增强内皮细胞中黏附分子的表达，使小分子炎症介质增强，导致骨及软骨的破坏［5］。

蒙医理论认为RA病属 “托来”范畴，其主要致病因素是 “黄水”，“黄水”与血交搏注关节，导致局部气血运行受阻所致。强劳内伤，关节扭伤，饮食过多，酗酒，汗出受风寒，中潮湿之毒等，均为诱发本病之常见因素。其临床表现为起病急骤，多在夜半突感关节剧痛而惊醒，伴以发热等全身症状。四肢关节显著红肿热痛，患部皮肤偶见紫斑，当疾病进展时关节逐渐肥大，活动渐受限制，其程度随发作次数而增加，最后导致关节畸形僵硬。受累关节以跖趾关节最多，其次为踝、手、腕、膝、肘及足部等其他关节，肩及髋关节则甚少波及。治宜以燥黄水，舒筋为原则［6］。

蒙医五味甘露浴是利用机械作用 （包括浮力作用和压力作用两个方面）、温度作用、化学作用和蒙医五味甘露浴的综合调整等协同作用使人体的外部浸渍，以达到防治疾病的一种疗法，是蒙医临床外治法重要组成部分［7］。实验结果表明，蒙医五味甘露浴具有较好的免疫调节作用，能够明显降低CFA诱导的佐剂性关节炎大鼠血清IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量。提示蒙医五味甘露浴通过调节AA大鼠血中IL－1β、IL－2、IL－6和TNF－a的含量，抑制AA大鼠骨与软骨的破坏，减轻滑膜炎症，是否有其它因子参与调节还有待进一步研究。

［1］陈柏松，徐玉东，钟淑琦，等.大鼠佐剂性关节炎模型的建立与评价［J］.哈尔滨医科大学学报，2005，12（6）：489－491.

［2］李培培，解国雄，宋珊珊，等.大鼠佐剂性关节模型表现特征及评价指标［J］.中国免疫学杂志，2012，28（5）：453.

［3］宇妥·元丹贡布.四部医典 ［M］.上海：上海科学技术出版社，1987：298.

［4］天河，布和巴特.蒙药五味甘露药浴研究进展 ［J］.中国民族医药杂志，2011，5（5）：61－62.

［5］张良，白人骁.细胞因子与类风湿关节炎治疗新进展 ［J］.中国医药导报，2008，5（11）：27－29.

［6］蒙古学百科全书编辑科员会 《医学卷》编辑委员会编.蒙古学百科全书（医学卷）［M］.呼和浩特：内蒙古人民出版社，2002：724－725.

［7］陈英松.蒙医学适宜技术及应用 ［M］.呼和浩特：内蒙古大学出版社，2011：93.

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1007－8517（2015）13－0001－02

2015.04.16）