糖尿病肾病动物模型建立的体会

代招弟

内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000

糖尿病肾病动物模型建立的体会

代招弟

内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000

目的：建立糖尿病肾病（DN）大鼠模型。方法：取Wistar大鼠24只，随机分为空白对照组（12只）和模型组（12只）。模型组采用单纯腹腔注射1%链脲佐菌素（STZ）悬液，复制Wistar大鼠糖尿病肾病动物模型。结果：单纯腹腔注射1%链脲佐菌素悬液4周可成功复制糖尿病肾病大鼠动物模型。结论：采用单纯腹腔注射链脲佐菌素方法复制糖尿病肾病大鼠模型，该方法具有简便、容易掌握，短期内可诱导出大量满意的动物模型。

链脲佐菌素悬液；糖尿病肾病；动物模型

1 仪器与药物

1.1 仪器 SPS401F型电子天平（北京西杰公司）；GT10－2台式高速离心机 （北京时代北利仪离心机仪器有限公司）；PRONTO－E全自动生化分析仪（意大利奔腾）；强生血糖仪 （美国强生公司）；强生血糖试纸 （美国强生公司）；HY－612半自动尿液化学分析仪（深圳市汇研科创生物科技有限公司）；HMIAS－2000彩色病理图文分析系统（北京杰伟世视音频设备有限公司）；KD－BM生物组织包埋机（浙江省华市科迪仪器设备有限公司）；KD－3358电脑超薄切片机 （浙江金华科迪仪器设备有限公司）。

1.2 试剂 链脲佐菌素（streptozotocin C8H15N3O7，美国Sigma公司）；柠檬酸 （北京东方博爱生物科技有限公司）；柠檬酸钠 （北京东方博爱生物科技有限公司）；肌酐 （批号：A70333，上海抚生生物科技有限公司）；尿素试剂盒（批号：A64247，上海抚生生物科技有限公司）；其余试剂均为分析纯。

1.3 STZ悬液的配制 柠檬酸缓冲液母液的配法：柠檬酸1.9214g加入二蒸水100ml配成A液，柠檬酸钠2.9410g加入二蒸水100ml配成B液。1%链脲佐菌素缓冲液的配制：将A、B液按比例（1∶1.32）均匀混合，其pH值为4.19～4.22，将此缓冲液配成1%链尿佐菌素悬液。

1.4 试验动物 Wistar大鼠，由吉林大学白求恩基础医学院实验动物中心提供，卫生许可生产号：SCXK－（吉）2007－0003。

2 方法

2.1 造模方法及分组［1－2］选雄性Wistar大鼠24只，体重250～280g，随机分为空白对照组（12只）和模型组（12只）。将模型组禁食12h后，用0.1mol／L柠檬酸－柠檬酸钠缓冲液将链脲佐菌素配成1%的悬液，按56mg／kg体重单次腹腔注射1%链脲佐菌素悬液复制糖尿病肾病模型。腹腔注射66h后开始禁食，不禁水，由尾静脉取血测定血糖，血糖≥16.8mmol／L者，为糖尿病造模型成功。

2.2 观察与检测指标 观察情况：每天观察大鼠的一般精神状态、毛色、进食、饮水及尿量等，模型建立成功后，每两周测定一次大鼠的体重，并加以记录。空腹血糖：模型建立成功后，分别在第二、第四周末断尾取血，采用血糖仪测定一次血糖。尿糖：模型建立成功后，分别在第二、第四周末，将大鼠放入洗净的代谢笼内，收集尿液，用自动尿液分析仪测定。第四周末 （腹主动脉血）采用生化分析仪检测。

2.3 统计方法 采用Excel软件进行数据处理，数据用均数±标准差 （）表示，采用t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 一般表现 空白对照组大鼠一般精神状态、毛色、饮食及尿量均正常。模型组大鼠于单次腹腔注射1%链脲佐菌素缓冲液3天后，即出现多食、多饮、多尿以及消瘦的状况。在实验期内，模型组大鼠体重一直下降，而空白对照组大鼠体重一直增加，见表1。

表1 糖尿病肾病大鼠体重的变化 （）

表1 糖尿病肾病大鼠体重的变化 （）

与空白对照组比较，★★P＜0.01。

组别 例数 第四周体重（g ）空白对照组12 355.4±30.8模型组 12 209.8±26.7★★

3.2 血糖变化 在本次实验过程中，空白对照组大鼠的血糖始终维持在5mmol／L，范围以内。模型组造模后第二、第四周末血糖明显高于对照组（P＜0.01），见图2。空白对照组大鼠尿糖一直阴性，而模型组大鼠尿糖幅度很大，一直处于＋＋＋～＋＋＋＋之间。

表2 糖尿病肾病大鼠血糖的变化 （）

表2 糖尿病肾病大鼠血糖的变化 （）

注：与空白对照组比较，▲▲P＜0.01。

组别 例数 第二周血糖（mmol／L）第四周血糖（mmol／L）空白对照组12 5.48±0.81 5.29±0.73模型组 12 21.96±2.06▲▲ 23.84±2.98▲▲

3.3 肌酐及血尿素氮 造模4周后，模型组大鼠血肌酐、血尿素氮与空白对照组大鼠同期比较显著升高（P＜0.01），见表1。

表3 大鼠Cre、BUN变化

3.4 肾组织切片 由图3、4可知，空白对照组大鼠肾小球、肾小管结构均正常，肾小管上皮细胞完整，未见管型变。由图3、4可知，模型组大鼠部分肾小球肥大、增生，肾小球内毛细血管充血，与之相连近曲小管上皮水肿、空泡变，肾间质血管充血显著。

4 讨论

慢性肾功能衰竭 （CRF）是严重危害人类健康的多发病之一，其发病率呈逐年上升的趋势，是世界性难题之一［2］。现代医学领域中有很多糖尿病肾病动物模型的方法，如手术切除胰腺法、药物破坏胰岛素β细胞法及药物与手术 （5／6肾脏切除）联合制作法等，其中笔者选用单次大量腹腔注射1%链脲佐菌素缓冲液诱导速发型糖尿病模型［2］。本次试验结果证明，单纯腹腔注射链脲佐菌素溶液后4周时可成功的造成糖尿病肾病大鼠模型。该方法简便、容易掌握，短期内可诱导出大量满意的动物模型。

［1］中华医学会糖尿病学分会.2007年版中国2型糖尿病防治指南［J］.中华流行病学杂志，2008，24（2）：22－23.

［2］王春艳.链脲佐菌素诱导大鼠2型糖尿病模型的建立 ［J］.吉林医药学院学报，2010，2（1）：22.

R587.2

A

1007－8517（2015）01－0113－02

2014.09.22）