外周血淋巴细胞免疫分型早期预测结缔组织病并发间质性肺病变的价值

张 亮，侯松萍，王 丽

（吉林大学中日联谊医院呼吸科，吉林长春130033）

外周血淋巴细胞免疫分型早期预测结缔组织病并发间质性肺病变的价值

张 亮，侯松萍＊，王 丽

（吉林大学中日联谊医院呼吸科，吉林长春130033）

细胞免疫是人体免疫系统中非常重要的一部分，由T淋巴细胞各亚群的比例来进行调节和维持人体免疫内环境的稳定，现已发现越来越多的疾病发生和发展与T淋巴细胞亚群的变化有关。结缔组织疾病常合并双肺间质性病变，在此基础上合并肺部感染时，常见的临床症状有发热、呼吸困难、咳嗽等，胸部CT表现为双肺弥漫性间质性肺病变，临床上有时很难将单纯结缔组织疾病造成的肺病变与结缔组织疾病合并肺炎时造成的双肺弥漫性病变鉴别清楚，治疗上自然也难以抉择是否给予糖皮质激素治疗及是否加大抗感染强度。结缔组织疾病常伴有体内免疫异常反应造成的肺损伤［1，2］，如果能及早发现体内的免疫异常反应，则对下一步如何治疗疾病大有帮助。本文通过检测结缔组织疾病患者的外周血淋巴细胞免疫分型，探讨其对于结缔组织疾病出现肺弥漫性病变的原因是感染，还是免疫损伤所致提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取吉林大学中日联谊医院于2011年5月至2013年5月期间收治的25例结缔组织疾病并发间质性肺病变患者。早期间质性肺病变的胸部CT影像表现：两肺弥漫性分布的磨玻璃影、网状阴影，诊断按2012年风湿病新版全套指南标准［3］。年龄24－80岁，平均54.2±16.8岁，其中男11例，女14例。结缔组织疾病组病种构成为：类风湿关节炎7例，多发性肌炎7例，皮肌炎4例，干燥综合征4例，系统性红斑狼疮3例，另选取25例健康人作为正常对照组，年龄30－77岁，平均52.2±15.7岁，其中男13例，女性12例。3例患者采取淋巴细胞免疫分型血液标本前使用激素，其余患者及健康对照组均未使用糖皮质激素。所有病例均排除合并肺部感染引起肺间质改变。

1.2 方法

1.2.1 仪器和试剂：CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5（货号：6607013）；细胞裂解液：OptiLyse○RNO－lysing Solution（货号：A11894）；流式细胞仪：Beckman Coulter FC500；以上所有试剂均购自美国Beckmen Coulter公司。

1.2.2 血液样本制备：采集患者及正常健康人外周血2ml，加入到EDTA抗凝的真空管中，混匀。取三只流式细胞仪上样管，分别命名为同型对照管和实验管1和实验管2，每管中均加入100μl抗凝全血，然后分别加入20μl同型对照抗体和CD45－FITC／CD4－PE／CD8－ECD／CD3－PC5抗体和CD45－FITC／CD56－PE／CD19－ECD／CD3－PC5，充分混匀，避光室温孵育15min；然后向每管中加入红细胞裂解液500μl，充分混匀，避光孵育10min后加入500 μl PBS，1 000r／min离心5min，弃上清，每管加入500μl鞘液，混匀，等待上机检测。

1.2.3 指标测定：外周血淋巴细胞亚群及NK细胞检测均采用流式细胞检测技术，由我院中心实验室专人操作检测。

1.3 统计学分析采用GraphPad InStat软件包，数据用¯x±s表示，组间分析采用方差齐性分析及t检验，P＜0.05为差别有统计学意义。

2 结果

结缔组织疾病组与健康人的外周血淋巴细胞免疫分型结果比较见表1。

表1 两组外周血淋巴细胞免疫分型结果比较±s）

表1 两组外周血淋巴细胞免疫分型结果比较±s）

注：＊示与正常对照组比较P＜0.05。

组别n CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋CD3－CD19＋CD3－CD56＋CD4＋／CD8＋结缔组织疾病组25 70.8±12.5 37.5±7.5 31.0±11.8＊14.4±9.7 11.0±6.9＊1.43±0.56正常对照组25 66.2±5.0 36.3±3.9 25.3±3.4 13.3±3.7 15.3±5.2 1.46±0.25

3 讨论

T细胞免疫是由于各种细胞亚群共同参与的结果，不同疾病可导致T淋巴细胞亚群发生不同程度的改变，如与健康人进行比较，可以客观地反映机体的免疫状况，判断患者的病情进展快慢以及评价疗效。间质性肺病可能与全身炎症性紊乱和自身免疫损伤有关，在弥漫性肺疾病时，CD8＋T细胞被认为起细胞毒性或抑制性作用，依据抗原刺激不同而有差异［4］。本文研究结果显示结缔组织疾病组CD8＋淋巴细胞明显高于正常对照组，说明此时体内发生免疫功能的紊乱，引起机体免疫性病变的发生、发展，从而导致结缔组织疾病合并间质性肺炎的出现。因此，结缔组织疾病活动初期合并间质性肺病变时，T淋巴细胞亚群的数量及功能改变可能早于其原发病的特异性免疫学指标的改变，如果能在这个阶段对机体的免疫学异常进行干预，则对改善结缔组织疾病和肺部病变的治疗效果和预后大有益处，外周血淋巴细胞分型可帮助鉴别肺部间质病变是感染、还是免疫损伤所致。

CD56分子是自然杀伤细胞（NK细胞）表面主要的表面标记，NK细胞不仅是机体内的第一道免疫防御屏障，而且也具有免疫调节能力，NK细胞主要功能有：①抗肿瘤（免疫监视），尤其是对淋巴瘤、白血病杀伤作用最佳。②抗感染（免疫防御）：抗病毒、细菌、真菌等感染。③对T、B淋巴细胞、骨髓干细胞具有调控作用（免疫自稳）。本文研究结果显示结缔组织疾病组NK细胞明显低于正常对照组，任英等报道NK细胞片段可能参与调节肺纤维化的进展［5］，具体作用机制还不清楚。

总之，在间质性肺病变中，外周血淋巴细胞免疫分型可能帮助鉴别结缔组织疾病合并间质性肺炎是免疫损伤、还是感染所致，在今后的工作中，应进一步加大观察标本的例数，同时对单纯结缔组织疾病造成的肺病变与结缔组织疾病合并肺炎时的T细胞亚群的变化进行观察，从而为临床实践提供更有效的实验室依据。

［1］Fischer A，West SG，Swigris JJ，et al.Connective Tissue Disease－Associated Interstitial Lung Disease：A Call for Clarification［J］.Chest，2010，138（2）：251.

［2］Vij R，Noth I，Strek ME.Autoimmune－Featured Interstitial Lung Disease：A Distinct Entity［J］.Chest，2011，140（5）：1292.

［3］中华医学会风湿病学分会.风湿病新版全套指南24个［J］.2012.

［4］Daniene J，Gaidamoniene D，Liubartaite M，et al.Subpopulations of T lymphocytes in patients with disseminated lung diseases［J］.Tubercle and Lung Disease，1995，Supplement（2）：76.

［5］任 英，朱 平.炎症细胞及细胞因子在间质性肺病炎症和纤维化中的作用［J］.细胞与分子免疫学杂志，2011，27（11）：1272.

2014－01－14）

1007－4287（2015）02－0237－02

＊通讯作者