HPLC法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因含量

贾燕花，高 磊，王晓青

HPLC法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因含量

贾燕花，高 磊，王晓青

目的 采用HPLC法测定复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因的含量。方法 采用Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱；流动相：甲醇-0.02%三乙胺水溶液(用冰醋酸调节pH至4.0)(60∶40)；流速：1.0 mL/min；检测波长：290 nm。对照品和供试品均以水为溶剂。记录色谱图，外标法进行含量测定。结果 盐酸普鲁卡因在0.008～0.040 mg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，相关系数为0.999 9；精密度(n=6)为0.79%；平均回收率(n=9)为100.9%。结论 本样品制备方法简便、快速、准确，可作为复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因含量测定的样品制备方法。

高效液相色谱法；盐酸普鲁卡因；搽剂；含量测定

0 引言

复方醋酸曲安奈德搽剂具有消炎、抗免疫、止痒和止痛的作用，临床上主要用于治疗神经性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹等皮肤病。该复方制剂的主要成分为醋酸曲安奈德和盐酸普鲁卡因。其中醋酸曲安奈德的含量测定方法采用HPLC方法[1]，笔者同时进行了醋酸曲安奈德和盐酸普鲁卡因的双组分含量测定的HPLC方法的摸索，发现两组分的保留行为差别大，无法满足同时测定的要求。醋酸曲安奈德在水中不溶[2]，盐酸普鲁卡因在水中易溶[3]，本研究利用被测物质溶解性的差异对供试品进行处理，建立高效液相色谱法检测复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪(美国，安捷伦科技有限公司)；HITACHI U3000型紫外分光光度仪，AE204型十万分之一电子分析天平(瑞士、梅特勒托利多科技公司)。

对照品：盐酸普鲁卡因(100424-201102)由中国食品药品检定研究院提供；复方醋酸曲安奈德搽剂由解放军总医院第一附属医院提供(批号：130109、130130、130218)。实验用水为双蒸水；甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的制备 精密称取盐酸普鲁卡因对照品0.05 g，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，作为对照品储备液；精密量取1 mL，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得盐酸普鲁卡因对照品溶液。精密量取复方醋酸曲安奈德搽剂1 mL，转入50 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，滤过，作为供试品储备液；将供试品储备液滤过，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀即可，即得供试品溶液。按照复方醋酸曲安奈德搽剂的配方制备不含普鲁卡因的阴性样品，再按照供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2 色谱条件[4-10]色谱柱为Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.02%三乙胺水溶液(用冰醋酸调节pH至4.0)(60∶40)；检测波长：290 nm；流速：1.0 mL/min。精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，被测组分及杂质之间的分离度应符合要求，阴性对照溶液的色谱图中无干扰色谱峰。见图1。

2.3 线性关系考察 按“2.2”项色谱条件，精密量取对照品储备液0.4、0.6、0.8、1.0、1.6、2.0 mL，分别置于50 mL的量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，滤过；分别取上述溶液10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积。以峰面积积分值(A)为纵坐标、浓度(C，mg/mL)为横坐标进行线性回归。获得的盐酸普鲁卡因的回归方程为：A=38 541 C-3.914 1 (r=0.999 9)。结果表明，在进样量为10 μL时，盐酸普鲁卡因进样浓度在0.008～0.040 mg/mL范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

图1 高效液相色谱图

2.4 精密度试验 精密吸取供试品溶液，按“2.2”项色谱条件，精密量取对照品溶液10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，连续进样5次，以盐酸普鲁卡因峰面积计算RSD值(RSD=0.15%)。结果表明，该试验方法精密度良好。

2.5 重复性试验 取同一批号的样品，按照“2.1”项下供试品溶液配制方法，依次制备6份供试品溶液，按“2.2”项色谱条件进行分析，测定盐酸普鲁卡因的含量，RSD为0.79%。表明该样品制备方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一供试品溶液，制备后分别在0、2、4、6、8、12 h进样测定盐酸普鲁卡因的峰面积。盐酸普鲁卡因峰面积的RSD为0.15%，结果表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 回收率试验 分别精密加入已准确测定含量的供试品储备液2.5 mL，置50 mL容量瓶中，共9份；依次精密加入对照品储备液1.5、2.5、3.5 mL，每个浓度3份，用水稀释至刻度，摇匀，滤过。按“2.2”项色谱条件，分别量取10 μL进样测定。见表1。由表1可见，醋酸曲安奈德的平均回收率为100.9%，RSD为0.37% (n=9)。结果表明，该方法适用于复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因的含量测定。

表1 加样回收率试验结果

2.8 样品的含量测定 精密量取本品适量，用水定量稀释制成每1 mL中含盐酸普鲁卡因约0.02 mg的溶液，摇匀，滤过，精密量取10 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取对照品适量，加水溶解并定量稀释制成每1 mL中约含0.02 mg的溶液，摇匀，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。见表2。

表2 含量测定结果

3 讨论

复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因采用容量分析法进行含量测定，由于滴定液的配制、标定以及贮存时间等的限制，本研究采用外标法，利用高效液相色谱技术进行制剂的含量检测。本研究尝试建立醋酸曲安奈德和盐酸普鲁卡因同时测定的高效液相色谱方法，但是由于醋酸曲安奈德在水中不溶，而盐酸普鲁卡因在水中易溶，同时两者在液相中的保留行为差别迥异，因此，建立盐酸普鲁卡因的单组分高效液相色谱方法。从高效液相色谱样品制备的简便快捷和环保等方面考虑，在制备供试品溶液时，先将供试品溶解于水中，混匀后滤过，再进一步用水稀释。笔者对该供试品制备方法进行了重复性考察，结果良好。

该供试品制备方法简便准确、重现性好，可用于复方醋酸曲安奈德搽剂中盐酸普鲁卡因的含量测定，同时为两种溶解性相反的复方制剂含量测定时供试品的制备提供参考。

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Content determination of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment by HPLC

JIA Yan-hua,GAO Lei,WANG Xiao-qing

(Department of Pharmacy,The First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.Methods HPLC was used with Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm) as chromatographic column with a mobile phase of methanol-0.02% trimethylamine (60∶40).The detection wavelength was 290 nm,the flow rate was 1.0 mL/min.Both test and references substances took water as the solvent.The chromatogram was recorded,and the content was determined by external standard method.Results There was a good linear relationship of procaine hydrochloride in 0.008～0.040 mg/mL(r=0.999 9).The precisionRSD(n=6) was 0.79%,and the average recovery rate (n=9) was 100.9%.Conclusion The method is simple,rapid,accurate and reproducible.It is suitable for the content determination of procaine hydrochloride in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.

HPLC; Procaine hydrochloride; Liniment; Content determination

2014-08-04

解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京100048

10.14053/j.cnki.ppcr.201504017