氯沙坦对慢性肾脏疾病患者血浆中炎症性细胞因子及TGF-β1的影响

王小丽，刘瑞东

氯沙坦对慢性肾脏疾病患者血浆中炎症性细胞因子及TGF-β1的影响

王小丽，刘瑞东

目的 研究血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂-氯沙坦对慢性肾脏疾病患者血浆细胞因子浓度及尿转化生长因子β1排泄的影响，探讨其保护肾脏的可能机制。方法 选取符合入选标准的慢性肾脏疾病患者32例，观察6个月，ELISA法检测血浆TNF-α、IL-6及尿TGF-β1的水平；免疫散射比浊法检测血浆hsCRP；放射免疫法检测尿白蛋白的浓度；全自动生化分析仪测定治疗前后血尿素氮、肌酐、HDL-C、LDL-C。结果 与氯沙坦治疗前基础值相比，患者血浆hsCRP水平[(1 403±198)ng/mL vs.(998.1±138)ng/mL]明显增高(P<0.05)，尿白蛋白/尿肌酐[(73.4±16.5)mg/mmol.Cr vs.(96.5±12.1)mg/mmol.Cr)]和TGF-β1/尿肌酐[(43.56±17.49)mg/mmol.Cr vs.(78.81±40.32)mg/mmol.Cr]水平明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；TNF-α[(1.39±0.03)pg/mL vs.(1.46±0.04)pg/mL]、IL-6[(1.79±0.07)pg/mL vs.(1.81±0.09)pg/mL]水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前基础值比较，LDL-C[(117.0±1.4)mg/dL vs.(126.0±2.7)mg/dL]显著降低，但BUN[(28.3±0.6)mg/dL vs.(21.1±0.8)mg/dL]明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)；血肌酐[(139.4±36.3)μmol/L vs.(124.5±52.5)μmol/L]、HDL-C[(58.6±0.9)mg/dL vs.(56.2±3.0)mg/dL]与治疗前比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 氯沙坦对慢性肾脏疾病患者的肾脏有保护作用，其部分机制可能与上调细胞因子hsCRP和下调TGF-β1作用有关。

氯沙坦；蛋白尿；炎症性细胞因子；转化生长因子-β1

0 引言

慢性肾脏疾病发病机制复杂，已成为全球性公共健康问题，其发病率和病死率高，肾间质纤维化几乎是各种肾脏疾病进展到终末期肾病的共同途径和主要病理学基础[1]。近年来，细胞因子在肾脏疾病进展中所起的作用渐受重视，尤其是TGF-β1(Transforming growth factor-Beta，TGF-β1)是一种多功能细胞因子，对细胞增殖、分化和细胞外基质积聚、降解起调控作用，逐渐成为肾脏纤维化的重要分子学标志物[2]；血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(Angiotensin Ⅱ receptor blockers，ARB)氯沙坦能够阻断血管紧张素受体(AT1)，避免血管紧张素Ⅱ与受体结合，最终达到防止血管收缩的目的。对于肾脏疾病患者，有独立于降压作用之外减少蛋白尿的作用，且在保护肾功能、延缓肾脏疾病的进展方面起到了极其重要的作用[3]。本研究观察氯沙坦对慢性肾脏疾病患者血浆hsCRP、TNF-α、IL-6及尿TGF-β1的影响，旨在探讨血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂ARB对慢性肾脏疾病患者病情进展和肾脏保护作用的可能机制。

1 材料与方法

1.1 研究对象 我院2012年10月至2014年1月诊断为原发性慢性肾脏疾病的住院患者，大量蛋白尿[尿蛋白(Upr)>3.5 g/24 h]、有明显感染症状、糖尿病肾病患者、系统性红斑狼疮肾炎、过敏性紫癜性肾炎、血管炎等因素引起的蛋白尿者除外，接受氯沙坦治疗患者(50～100 mg/d)32例，平均年龄(48±3.5)岁。检测患者治疗前后血浆超敏C反应蛋白(High sensitivity C reaction protein，hsCRP)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-6(Interleukin-6，IL-6)及尿TGF-β1、尿肌酐(Cr)，观察4个月结束时，氯沙坦组2例失访。退出试验和失访者数据未纳入统计。

1.2 方法

1.2.1 标本收集 留取空腹静脉血，测定血浆hsCRP、TNF-α、IL-6，同时测定尿素氮、肌酐、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和血钾；收集受试者24 h尿，准确记录尿量，标本不加防腐剂，混匀后留取10 mL保存于-40 ℃冰箱待测。检测指标包括尿TGF-β1、尿白蛋白及尿肌酐。

1.2.2 实验室检测 尿TGF-β1、血TNF-α、IL-6的检测采用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法，试剂盒分别购自上海酶联生物耗材有限公司；上海卡努生物科技有限公司；上海恒远生物科技有限公司；尿白蛋白采用放射免疫法检测；血尿肌酐、尿素氮、HDL-C、LDL-C及血钾使用自动生化分析仪测定；尿TGF-β1和尿白蛋白均以其与尿肌酐比值来表示，以消除尿液浓缩、稀释对结果的影响。

2 结果

2.1 患者基础水平的检测 实验开始时有慢性肾脏疾病患者41例，由于患者标本丢失或自身原因拒绝调查，有9例失访。共纳入符合入选标准的慢性肾脏疾病患者32例，患者年龄(48±3.5)岁，男17例，女15例，其中系膜增生性肾炎(MPG)7例，局灶性肾小球硬化症(FGS)4例，IgA肾炎11例，其他10例。按肾组织学诊断患者22例，根据临床表现诊断患者10例。

2.2 患者治疗前后血、尿炎症相关指标比较 治疗后hsCRP水平增高，尿TGF-β1水平显著降低；而TNF-α、IL-6浓度虽有所下降，但差异无统计学意义(见表1)。

表1 慢性肾脏疾病患者治疗前后炎症相关细胞因子的变化

注：与治疗前比较，*P<0.05

2.3 患者治疗前后血、尿其他相关指标比较 与治疗前比较，LDL-C和尿白蛋白/尿肌酐降低，但BUN升高；血压、血肌酐、血钾及HDL-C与治疗前相比，差异无统计学意义(见表2)。

表2 慢性肾脏疾病患者治疗前后其他相关指标的变化

注：与治疗前比较，*P<0.05

3 讨论

氯沙坦是ARB，属二苯四咪唑类，主要优势是其良好的耐受性，副作用少，其保护肾脏疾病患者肾功能的机制为：阻断血管紧张素Ⅱ受体对肾小管上皮细胞肥大、增殖的刺激作用，减少细胞外基质积聚，减轻肾间质纤维化，减缓向终末期肾病的发展；不仅能降低系统高血压，而且具有非血压依赖性的肾脏保护作用，可降低肾小球毛细血管内压，改善肾小球滤过膜选择通透性[4]。有研究表明，氯沙坦能显著降低高血压患者尿中的β2微球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)，β2-MG是判断早期肾功能异常及肾小球滤过率障碍的敏感指标，达到抗高血压性肾损害的作用[5]。蛋白尿在慢性肾功能衰竭进展中的重要性，大于高血压本身，氯沙坦可同时降压与降蛋白尿，对肾脏保护有协同作用；氯沙坦更能防止心血管系统的发病率和死亡率[6]。

慢性肾脏疾病最终导致肾小球硬化和肾小管-间质纤维化，最终发展为终末期肾病。一系列生长因子与细胞因子的改变与这些纤维化成分的合成及代谢的调节密切相关，hsCRP、TNF-α、IL-6及TGF-β1是其中重要的细胞因子之一，皮质类固醇激素治疗IgA肾病可降低尿蛋白的排泄，但增加了尿IL-6和TGF-β的排泄[7]。TGF-β1的作用与肾脏疾病的进展密切相关。在肾脏病患者中，TGF-β1可调节炎症反应；能抑制肾小管上皮细胞、肾小球上皮细胞和内皮细胞的增殖；能促进细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)的合成和沉积，减少ECM的降解，最终引起肾小球硬化和肾间质纤维化[8]。有报道，氯沙坦可显著降低慢性肾脏疾病患者蛋白尿和肾小球滤过率(GFR)[9-12]。血管紧张素转化酶抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂联合应用并不能导致高血钾、张力过低和急性GFR降低，也不能改变尿TGF-β1的排泄[13]。本研究结果显示，氯沙坦治疗后，不仅明显降低患者尿白蛋白的水平，而且显著降低与肾脏纤维化和硬化密切相关的细胞因子TGF-β1的水平，从而起到保护肾脏的作用。有报道，高血压性肾脏疾病患者肾脏损害与强烈的炎症反应无关[14]，本实验结果显示，氯沙坦治疗后血浆炎症性细胞因子TNF-α、IL-6浓度虽有所下降，但无统计学意义。

本研究发现，氯沙坦长期治疗非糖尿病肾病患者后，血浆hsCRP明显增高。慢性肾脏病特别是存在明显蛋白尿的患者，常常伴有血脂水平的改变；动物试验结果提示，脂质异常可加速肾脏病程进展[15]。hs-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用。由于本研究临床样本量较少，随访时间较短，入选对象年龄小，使本研究具有一定的局限性，因此，氯沙坦对非糖尿病肾脏疾病各种病理类型的抗代谢作用有待于进一步研究。

[1] Border WA,Noble NA.Transforming growth factor betain tissue fibrosis[J].N Engl J Med,1994,331(19):1286-1292.

[2] Kasinath BS.Glomerular endothelial cell proteoglycans-regulation by TGF-beta 1[J].Arch Biochem Biophys,1993,305(2):370-377.

[3] 陈颖颖,丁峰.肾素-血管紧张素系统阻断剂在慢性肾病治疗中的应用[J].上海医药,2013,34(1):5-9.

[4] Maschio G,Alberti D,Janin G,et al.Effect of the angiotensin-converting-enzyme inhibitor benazepril on the progression of chronic renal insufficiency.The Angiotensin-Converting-Enzyme Inhibition in Progressive Renal Insufficiency Study Group[J].N Engl J Med,1996,334(15):939-945.

[5] 赵红,王保民,李双喜,等.氯沙坦与氨氯地平对原发性高血压病早期肾损害的作用比较[J].临床内科杂志,2002,19(4):311.

[6] Dahlöf B,Devereux RB,Kjeldsen SE,et al.Cardiovascular morbidity and mortality in the Losartan Intervention For Endpoint reduction in hypertension study(LIFE): a randomised trial against atenolol[J].Lancet,2002,359(9311):995-1003.

[7] Kalliakmani P,Nakopoulou L,Tsakas S,et al.Urinary interleukin-6(IL-6) and transforming growth factor(TGF-β) levels in corticosteroidtreated patients with IgA nephropathy[J].Clin Nephrol,2011,76(2):144-150.

[8] Border WA,Noble NA.Transforming growth factor betain tissue fibrosis[J].N Engl J Med,1994,331(19):1286-1292.

[9] 叶山东,荆春艳,范艾红,等.福辛普利和氯沙坦对糖尿病伴白蛋白尿患者尿转化生长因子-β1排泄的影响[J].中国临床保健杂志,2005,8(1):6-8.

[10]Ruggenenti P,Perna A,Gherardi G,et al.Renoprotective properties of ACE inhibition in non-diabetic nephropathies with non-nephrotic proteinuria[J].Lancet,1999,354(12):359-364.

[11]Lewis EJ,Hunsicker LG,Clarke WR,et al.Renoprotective effect of the angiotensin-receptor antagonist irbesartan in patients with nephropathy due to type 2 diabetes[J].N Engl J Med,2001,345(12):851-860.

[12]Stompór T,Olszewski A,Kierzkowska I.Can we prolong life of patients with advanced chronic kidney disease:what is the clinical evidence[J].Pol Arch Med Wewn,2011,121(3):88-93.

[13]Lizakowski S,Tylicki L,Rutkowski P,et al.Safety of enhanced renin-angiotensin-aldosterone system inhibition with aliskiren in nondiabetic patients with chronic kidney disease[J].Pol Arch Med Wewn,2013,123(5):221-227.

[14]Xu TY,Zhang Y,Li Y,et al.The association of serum inflammatory biomarkers with chronic kidney disease in hypertensive patients[J].Ren Fail,2014,36(5):666-672.

[15]马达,严金龙,高继玲.辛伐他汀联合氯沙坦及褔辛普利治疗慢性肾病的疗效[J].中国临床药理学杂志,2011,27(8):577-579.

Effects of losartan on inflammatory cytokine and TGF-β1 concentrations in patients with chronic renal disease

WANG Xiao-li,LIU Rui-dong

(Department of Clinical Laboratory,Laiwu Municipal People′s Hospital Affiliated to Taishan Medical College,Laiwu 271100,China)

Objective To investigate the effects of angiotensin receptor blockers Ⅱ-losartan on the concentrations of inflammatory cytokine and urine TGF-β1 in patients with chronic renal disease,in order to evaluate the renoprotective mechanism of losartan.Methods 32 patients with chronic renal disease were selected,following treatment with losartan for 26 weeks.Then the concentration of TNF-α,IL-6 in blood plasma and urinary TGF-β1 were measured by ELISA;blood plasma high sensitivity C-reactive protein(hsCRP) was analyzed by scatting turbidimetric immunoassays;urinary albumin was assayed by radioimmunoassays;the levels of blood urea nitrogen(BUN),creatinine,LDL-C and HDL-C concentrations were measured using an autoanalyzer.Results After treatment,the concentrations of hsCRP [(1 403±198)ng/mL vs.(998.1±138)ng/mL]were significantly improved(P<0.05).The concentrations of urinary albumin/urinary Cr[(73.4±16.5)mg/mmol.Cr vs.(96.5±12.1)mg/mmol.Cr)]and TGF-β1 /urinary Cr[(43.56±17.49)mg/mmol.Cr vs.(78.81±40.32)mg/mmol.Cr] significantly reduced (P<0.05).However,There was no significant difference in the changes of the concentrations of tumor necrosis factor(TNF)-α [(1.39±0.03)pg/mL vs.(1.46±0.04)pg/mL]and interleukin-6(IL-6) [(1.79±0.07)pg/mL vs.(1.81±0.09)pg/mL](P>0.05).After treatment,the concentrations of LDL-C [(117.0±1.4)mg/dL vs.(126.0±2.7)mg/dL] significantly reduced,but BUN [(28.3±0.6)mg/dL vs.(21.1±0.8)mg/dL]were obviously improved(P<0.05).Then,there was no significant difference in the changes of serum creatinine [(139.4±36.3)μmol/L vs.(124.5±52.5)μmol/L]and HDL-C [(58.6±0.9)mg/dL vs.(56.2±3.0)mg/dL](P>0.05).Conclusion The mechanism of renoprotective effects of losartan on patients with chronic renal disease was partly concerned with increasing concentrations of hsCRP and downregulating TGF-β1.

Losartan;Proteinuria;Inflammatory cytokine;TGF-β1

2014-07-18

泰山医学院附属莱芜市人民医院检验科，山东

271100

10.14053/j.cnki.ppcr.201503013