商洛不同产地连翘中连翘苷含量比较*

宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛职业技术学院，陕西 商洛 726000

商洛不同产地连翘中连翘苷含量比较*

宋小俊，李玉琴，雷 立，李惠民，高吉仁

商洛职业技术学院，陕西 商洛 726000

目的：比较商洛不同产地连翘果实中有效成份连翘苷(C27H34Ol l)的含量。方法：采用高效液相色谱法对不同区县连翘中连翘苷含量进行检测。结果：不同产地连翘果实中连翘苷含量相差较大，山阳石头梁所采样品连翘苷含量最高，山阳赵川所采样品连翘苷含量较高，洛南灵口所采样品连翘苷含量最低。结论：不同产地连翘中连翘苷含量有明显差异；主要由连翘生产地生态环境因子及生产管理措施不同导致。

高效液相色谱法；连翘苷；含量；商洛

连翘为木犀科植物连翘属连翘 Forsythia suspensa(T h un b.)V a h l的干燥果实，因采收季节不同分为青翘和老翘，青翘指秋季连翘果实初熟呈绿色时采收所得，老翘指秋季果实完全成熟后采收而得。连翘在我国已有两千多年的药用历史，是最常见的中药材之一，性味苦，微寒，归心、肺、脾经［1］，具有清热解毒、散结消肿之功效，用于风热感冒、温病初起、温热入营、热淋尿闭［2］、丹毒、斑疹等［3-4］的治疗，被视为疮家要药［5］。近年来，对连翘药理学作用的报道不断增多，连翘有效成份有连翘酚、挥发油类［6-7］、连翘酯苷、连翘苷、黄酮类［8-9］、熊果酸等［10］，其中连翘苷是连翘抗菌和抗病毒作用的活性成分［11］。连翘的果实和叶子均可入药，连翘叶在我国河北等地被制成茶叶作为保健饮料，有较好的保健价值［12］；以连翘为主要原料的中成药也较多，如连翘败毒丸、连翘败毒膏、双黄连口服液、银翘解毒片、双黄连胶囊等。

商洛是我国大宗药材连翘的主要产区，连翘也是商洛市确定的五大商药之一，蕴藏量大，分布区域广。本课题组在商洛连翘主要产区采样，确定商洛五个县区的14个样方点，根据朱寿东、周红敏等［13-14]研究报道，结合实际，按照(4×10)m2确定样方。以连翘苷含量为指标，按照药典标准，采用高效液相色谱法对不同区县连翘中连翘苷含量进行比较，明确商洛连翘优质产区与主要群落分布区域。为商洛连翘药用资源开发利用和进一步规范化种植提供理论依据。

1 材料

1.1 药材与试剂 青翘采自商洛5个县区14个样方点，确定样方时间为2011年3月，采集药材时间为2011年7月，经西北农林科技大学梁宗锁教授鉴定为正品。将所采青翘蒸熟、晒干，备用；连翘苷标准品(中国药品生物制品鉴定所)；甲醇、乙腈等化学试剂均为色谱纯；纯净水。药材分析试验地点为商洛学院生物医学工程系分析实验室，试验时间为2012年6月。

1.2 主要仪器 L C-10A T岛津高效液相色谱仪；S P D-10A紫外-可见检测器；浙江大学N2000色谱工作站；高速中药粉碎机(青州市精诚机械有限公司，W K-1000A型)；万分之一电子天平(S A R T OO-R I U S公司，A U W220型)；超声波清洗仪器(昆山市超声仪器有限公司，K Q5200B型)；旋转蒸发仪(无锡市星海王生化设备有限公司，R501B型)；数显恒温水浴锅(金坛市科析仪器有限公司，HH-4型)；电热恒温鼓风真空干燥箱 (上海森信实验仪器有限公司，D GG-9203A D型)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 参照中国药典方法［2］，并适当调整。色谱柱：C18(250mm×46mm，10μm)；流动相：乙腈∶水=30∶70；检测波长：277 n m；流速：1.0m L/m in；柱温：室温，见图1。

图1 连翘苷标准品及供试品的HPLC图谱

2.2 对照品溶液与供试品溶液的制备 精密称取连翘苷标准品4.66 m g加少量甲醇，于10 m L容量瓶中精确定容至刻度线，得0.466 m g/m L连翘苷对照品溶液，备用；供试品溶液的制备：精密称取采自不同产地的连翘果实干燥粉末(过5号筛)各1.000g，至50m L锥形瓶中，加70%甲醇20m L，过夜，超声波提取30分钟，摇匀，滤过，静置，取上清液移入10m L容量瓶中，稀释至刻度，待测。

2.3 标准曲线的绘制 精密吸取0.466m g/m L连翘苷对照品溶液，加甲醇稀释成0.023 3、0.031 1、0.0466、0.0923、0.186 4 m g/m L的连翘苷对照品溶液，依次吸取上述溶液10μL，注入H P L C色谱仪，记录峰面积，以峰面积(A)为横坐标，浓度(C)为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理得回归方程：

表明连翘苷含量和峰面积之间有良好的线性关系。

2.4 药材供试品含量的测定 精密吸取药材供试品溶液10μL进样，采用外标法计算。结果显示不同产地连翘苷平均含量高低顺序为：山阳石头梁＞山阳赵川＞商南＞商州＞洛南石门＞丹凤＞洛南灵口。其中山阳石头梁所采样品连翘苷含量最高，均值达0.862%，其次是山阳赵川所采样品连翘苷含量为0.782%，洛南灵口所采样品连翘苷含量最低，为0.175%，RS D值均小于1.5%，说明山阳石头梁所选样方生理、生态环境最适宜连翘药材生长，见表1。

表1 不同产地青翘中连翘苷含量测定结果(n=3)

2.5 精密度实验 取连翘苷对照品溶液10μL，重复进样6次，根据中药指纹图谱相似度评价系统，结果均大于0.9；相对峰面积比值RS D均小于1.624%。

2.6 稳定性实验 取连翘药材样品适量，精密称定，制备供试品溶液，分别静置0、2、4、8、16、24小时，各吸取10μL注入色谱柱，记录色谱峰面积，连翘苷质量分数的RS D=1.0%，说明样品在24小时内稳定性良好。

2.7 重现性实验 取连翘药材样品制备供试品溶液6份，依次进样，记录峰面积，各主要色谱峰相对保留时间RS D均小于0.20%，相对峰面积比值的RS D均小于1.20%。

2.8 回收率实验 精密称取样品1.000 g，加入连翘苷标准品适量，按照“2.2”项下方法测定，计算回收率平均值，结果RS D=1.38%。

2.9 生态环境因子 不同产地连翘苷含量差异较大，可能与各地生态环境因素及生产管理措施不同有关，山阳样方温度适宜，光照充足，植物光合作用较强，连翘植株株高、单株产量较高；而洛南地处中国秦岭-淮河南北地理气候分界线秦岭东段，横跨黄河、长江两大流域，气候凉、爽、润，尤其作为华山之南的阳坡是一张天赐“避暑凉床”，县域平均温度低于商州2～3℃，也远低于其余各县，见表2。

表2 不同产地生态环境因子比较

3 结论

本研究所采样品连翘苷含量均大于中国药典规定的0.15%［2］，且最高含量达中国药典规定近6倍。本研究通过商洛连翘主产区不同区县所采连翘果实的连翘苷含量比较，明确了山阳石头梁所选样方为商洛连翘优质产区与主要群落分布区域。

本研究采用H P L C-R P B P CF法对连翘药材的主成份连翘苷含量进行了测定，采用外标法进行定量计算，并进行了精密度、稳定性、重现性和回收率实验，RS D值均小于2.0%，说明药材稳定性好，精密度、重现性和回收率良好。

连翘的药用成份较多，关于研究方法的报道也逐年增加。崔洋等［15］对连翘进行了高效液相色谱指纹图谱研究；袁敏等［16］利用气相色谱对连翘药材进行了指纹图谱研究，连翘药材的主成份连翘苷的含量能够反映连翘药材的基本质量，是评价连翘药材质量的重要指标［17-18］；朱小强等［19-20］对商洛连翘G A P栽培技术和增产效果进行了研究，有力推动了商洛连翘的规范化种植。本研究按照中国药典，采用科学分析方法，明确商洛连翘优质产区与主要群落分布区域。然而，商洛连翘药材主成份连翘苷优质产区的土壤养分等相关影响因素研究及连翘其他药用成份对比研究有待进一步展开。

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Com parison of Phillyrin Contents in LianQiao from D ifferent Areasof Shangluo

SONG Xiaojun,LIYuqin,LEILi,LIHuimin,GAO Jiren
Shangluo Vocational and Technological College,Shangluo 726000,China

Objective:To compare the effective contents of phillyrin(C27H34Oll)in LianQiao(forsythia suspensa vahl)of differentplaces in Shangluo.Method:High Performance Liquid Chromatography(HPLC)wasused to detect the phillyrin contents in Lianqiao from different producing areas.Results:The phillyrin contents in LianQiao fruits of differentareas varied sharply;the contents in the samplesof Shitouliang in Shanyang county were the highest,in the samplesof Zhaochuan in Shanyang countywere the higherand in the samplesof Lingkou in Luonan countywere the least.Conclusion:Thegreatdifferencesare presented in thephillyrin contentsof LianQiao of differentareas,induced by ecologicalenvironment factorsof LianQiao's different producing placesand the differentproducing managementmeasurement.

HPLC;phillyrin;content;Shangluo

R284.1

A

1004-6852(2015)03-0029-03

2014-04-02

陕西省商洛市科技局科技项目(编号SKJ2010-07)。

宋小俊(1966—)，女，硕士学位，副教授。研究方向：中草药有效成分提取、分离、鉴定及分析。