RP-HPLC法测定制剂中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的含量*

郭禹彤，弥 宏，赵宏峰

1长春中医药大学，吉林 长春 130117；2吉林省中医药科学院

RP-HPLC法测定制剂中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素的含量*

郭禹彤1，弥 宏2△，赵宏峰2

1长春中医药大学，吉林 长春 130117；2吉林省中医药科学院

目的：用高效液相色谱法同时测定解酒保肝颗粒中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素含量。方法：采用Apol lo-C18(250mm×4.6mm，5.0μm)柱，以甲醇-水梯度洗脱，流速1.0mL/min，柱温35℃，检测波长254 nm。结果：五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素分别在40分钟内达基线分离，线性关系良好(r≥0.999 7)。加样回收率分别为97.79%、98.53%和98.17%。结论：该方法简便、准确、灵敏度高、重复性好，可作为解酒保肝颗粒的质量控制标准。

解酒保肝颗粒；高效液相色谱法；五味子醇甲；五味子甲素；五味子乙素

解酒保肝颗粒主要是我实验室自主研发的一款具有解酒、护肝等功效的保健食品。由五味子、姜黄等几味中药提取而成，用于化学性肝损伤的辅助保护以及缓解因酒醉而引发的各种身体不适症状。制剂主要有效成分为五味子甲素，乙素等木脂素类化合物。近年来，采用HP L C法测定五味子及其制剂中有效成分的研究报道较多，实验中多采用等度洗脱测定单种成分，线性范围较窄，且分析时间较长［1-2］。本实验采用甲醇-水梯度洗脱对解酒保肝颗粒中五味子醇甲、乙素、甲素的含量进行了测定，建立了有效控制解酒保肝颗粒质量标准的方法。为以五味子提取物入药的制剂的质量控制提供了新的方法。

1 材料与方法

1.1 仪器 L C-10A T高效液相色谱仪(日本岛津公司提供)；S PD-10A V P紫外检测器 (日本岛津公司提供)；C sc h rom P l u s色谱工作站(美国奥泰公司提供)；B T125D电子分析天平(瑞士梅特勤公司提供)；KP3200型超声清理器(北京市永光明医疗器械有限公司提供)。

1.2 试药 解酒保肝颗粒(自制，批号：121001、121002、121003)，对照品(五味子醇甲，批号：110857-200406；五味子甲素，批号：110765-200710；五味子乙素，批号：110764-201111)，均购自中国食品药品检定研究院)，甲醇(色谱级，美国F i s h er公司)，纯化水，其余试剂均为分析纯。

1.3 实验方法

1.3.1 色谱条件［3-4］色谱柱：A p o l l o-C18(250mm× 4.6mm，5.0μm)；流动相：甲醇为流动相A，水为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；流速1.0 m L/m in，检测波长254 n m，柱温35℃。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2 000。

表1 流动相条件

1.3.2 溶液制备

1.3.2.1 对照品溶液的制备 取五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1m L分别含五味子醇甲0.36mg、五味子甲素0.114mg、五味子乙素0.12mg的混合溶液，过0.22μm滤膜，即得。

1.3.2.2 供试品溶液的制备 取本品内容物约1.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入20m L甲醇，密塞，称定质量，超声30分钟，放冷后再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

1.3.2.3 阴性溶液的制备 取除五味子的处方，采用“1.3.2.2”项完全相同的制备方法制备成缺五味子的阴性供试品，即得。

2 实验结果

2.1 色谱图分析 以上各种样品按照“1.3.1”项色谱条件进样10μL。在此条件下，对照品色谱中五味子醇甲、甲素和乙素色谱峰峰型较好，保留时间分别为8.63、26.11、34.14分钟。见图1。在供试品色谱中，在与五味子醇甲、甲素和乙素对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰，并与其他组分基本达到基线分离。见图2。而在阴性色谱中，在五味子醇甲、甲素、乙素相应的保留时间处没有色谱峰，说明阴性样品溶液无干扰。见图3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 五味子阴性色谱图

2.2 线性关系考察 分别精密吸取对照品混合液3、7、10、13、16μL进样。以对照品含量为横坐标(X)，以峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。五味子醇甲：Y=1 142 842.037X-264 449.333 3，R=0.999 97，线性范围为1.44～5.76μg；五味子甲素：Y=1298361.696X-95489.53333，R=0.9997，线性范围为0.456～1.824μg；五味子乙素：Y= 1 068 336.111X-86 222.933 3，R=0.999 97，线性范围为0.48～1.92μg，结果表明五味子醇甲、甲素、乙素在线性范围内线性良好。

2.3 精密度实验 精密吸取供试品溶液10μL，相同条件下重复进样5次，结果五味子醇甲、甲素、乙素峰面积的R S D分别为1.07%、0.38%、0.21%，表明该方法有良好的精密度。

2.4 稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于配制后0、2、4、6、8、10小时重复进样测定。以五味子醇甲、甲素、乙素峰面积计算，R S D分别为0.54%、 0.85%、1.28%，表明供试品溶液在室温下放置10小时稳定。

2.5 重复性实验 取同一批号(121001)供试品6份，按照“1.3.2.2”项供试品溶液的制备方法操作并测定，结果制剂中五味子醇甲平均含量为5.76mg/g，R S D为0.82%，五味子甲素平均含量为1.20mg/g，R S D为1.09%，五味子乙素平均含量为1.92mg/g，R S D为0.97%表明本方法重复性较好。

2.6 回收率实验 精密称取重现性同批次样品(批号：121001；其中五味子醇甲5.76mg/g，五味子甲素1.20mg/g，五味子乙素1.92mg/g)6份，分别精密加入对照品适量，采用加样回收法测定五味子醇甲、甲素、乙素回收率。结果见表2。

2.7 样品测定 按照含量测定项下方法，测定了3批“解酒保肝颗粒”中3种成分的含量，结果见表3。

表2 加样回收率实验结果

表3 3批样品含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的考察 本研究曾采用药典［1］中五味子醇甲含量测定方法以甲醇-水(65∶35)为流动相对本制剂进行等度洗脱。结果表明3种成分虽能达到基线分离，但由于出峰时间过长，分析一个样品需要80分钟，故不适于本制剂样品的测定。实验中也曾按照《保健食品检验与评价技术规范实施手册》中五味子醇甲、甲素和乙素的高效液相色谱测定方法［5］，以甲醇-水(77∶23)为流动相对本制剂样品进行测定，结果五味子醇甲峰分离度不高，与其前后杂质峰有干扰。故最终确定以本文所用的流动相进行梯度洗脱，图谱中3个成分的色谱分离度和峰型均较好，且在38分钟内洗脱完毕，大大节省了分析时间。

3.2 色谱柱的考察 分别对色谱柱为a：A l l t ima T M C18；b：A p o l l o-C18和c：P h e n ome n e x L u n a C18柱进行考察，结果表明色谱柱a和c对五味子醇甲峰分离度不好，拖尾。而采用色谱柱b时五味子醇甲、甲素、乙素分离度均较好，故选择色谱柱b为本含量测定的色谱柱。

3.3 检测波长的确定 比较了两种不同检测波长［6-8］对图谱的影响，结果表明230 n m处，五味子醇甲与后杂质峰分离效果不好，且峰型较宽。在254 n m处各峰峰形良好，分离度高，基线平稳。

本文建立了高效液相色谱法同时测定复方制剂中五味子醇甲、五味子甲素与五味子乙素3种成分的含量测定的方法。方法简便、准确、重复性好，可作为药品及保健食品等复方制剂中五味子药材的质量控制方法。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部［M］.北京:中国医药科技出版社，2010：337-340.

［2］ 冯华，张超云，邹孔强.HPLC色谱法测定枣仁安神片中五味子醇甲的含量［J］.中医药导报，2009，15(1)：82-84.

［3］ 李宝，王春辉.HPLC法测定五味子浸膏中三种成分的含量［J］.黑龙江医药，2009，4(22):436.

［4］ 李慧，肖佳尚.RP-HPLC法测定复方五味子胶囊中五味子甲素的含量［J］.中国实用医药，2008，3(21):36-38.

［5］ 国家中医药管理局.保健食品检验与评价技术规范实施手册［M］.北京:清华同方电子出版社，2003：1-12.

［6］ 周莹，程海燕.高效液相色谱法鉴别南北五味子［J］.医药导报，2005，24(10):915-916.

［7］ 王金凤，于源华，蔡林君，等.不同产地五味子HPLC指纹图谱分析［J］.长春理工大学学报，2006，29(3):69-71.

［8］ 赵艳玲，孔维军，山丽梅，等.HPLC法测定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量［J］.中药新药与临床药理，2008，9(4):436-437.

△通讯作者：张宏(1970—)，硕士研究生导师，研究员。研究方向：药物化学研究。

D etection of Schizandrol A,Schizandrin A and Schizandrin B in JieJiu BaoGan Granulesby RP-HPLC

GUO Yutong1,MIHong2△,ZHAO Hongfeng2
1 Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China; 2 Jilin Science Academy of Traditional Chinese Medicine

Objective:To establish amethod for detection of schizandrol A,schizandrin A and schizandrin B in JieJiu BaoGan granulesby high performance liquid chromatography(HPLC).Methods:Apollo-C18(250mm×4.6mm, 5.0μm)column wasapplied by a gradientelution using acetonitrile-water,w ith flow rate at1.0m L perm inute,column temperature at35℃and wavelength of 254 nm.Results:Baseline separation of schizandrol A,schizandrin A and schizandrin B achieved within 40minutes,and the linear relations between them were excellent(r≥0.9997). The average recoverieswere 97.79%,98.53%and 98.17%respectively.Conclusion:Themethod,which is of accuracy,convenience,highsensitivityand repeatability,canbeusedasqualitycontrolstandard for JieJiu BaoGan granules.

JieJiu BaoGan granules;high performance liquid chromatography;schizandrolA;schizandrin A; schizandrin B

R284.1

A

1004-6852(2015)04-0033-03

2014-07-21

吉林省科技发展计划项目(编号20130206024YY)。

郭禹彤(1988—)，女，在读硕士研究生。研究方向：中药药物制剂。