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峨参多糖含量测定与抗氧化作用的研究*

2015-06-01王岳峰丁昭利

西部中医药 2015年8期
关键词:超氧阴离子抑制率

王岳峰,丁昭利

西南交通大学峨眉校区,四川 峨眉 614202

峨参多糖含量测定与抗氧化作用的研究*

王岳峰,丁昭利

西南交通大学峨眉校区,四川 峨眉 614202

目的:测定峨参提取物中的多糖含量并研究其抗氧化作用。方法:按照硫酸-蒽酮法,在分光光度计620 nm处测定吸光度,按标准曲线所得回归方程计算峨参多糖的含量;同时采用邻苯三酚在碱性条件下能发生自氧化的原理,根据抑制率=[A0-(Ax-Ai0)]/A0×100%,计算不同浓度的峨参多糖对超氧阴离子产生的抑制率来观察其抗氧化作用。结果:峨参提取物中多糖浓度为0.389 9 mg/mL,含量为38.99%;且在0.1~1 mg/mL浓度内,多糖对超氧阴离子的抑制率随多糖浓度的增加而增强,在0.6~1 mg/mL浓度之间,其抑制率明显增强,最大抑制率达到31.22%。结论:峨参提取物中的多糖含量较高,且具良好的体外抗氧化活性,为把峨参多糖作为天然抗氧化剂开发提供了科学依据。

峨参;多糖;含量测定;抗氧化

峨参为伞形科峨参属植物峨参Anthriscus sylvestris(L.)Hoffm.,主要含有峨参内酯,具有杀虫、抑制癌细胞增殖,抗病毒、抗癌和抗有丝分裂的作用[1-5]。本文在原有研究的基础上,对其多糖的含量进行测定,并对峨参多糖抗氧化作用进行研究。

1 材料与方法

1.1 实验材料 峨参多糖干燥粉末(课题组自行制备)

1.2 药品和主要试剂 邻苯三酚(分析纯),成都金线科技有限公司提供,批号:20100420;T r i s(分析纯),成都金线科技有限公司提供,批号:20090315;蒽酮(分析纯),成都市科龙化工试剂厂提供,批号:20101105;盐酸成都市科龙化工试剂厂提供,批号:20100320;浓硫酸,成都市科龙化工试剂厂提供,批号:20100320;无水葡萄糖成都市科龙化工试剂厂提供,批号:20101020。

1.3 主要仪器及设备 FA2204B型精密天平,上海精密科学仪器有限公司提供;电子天平(61872型),上海民桥精密科学仪器有限公司提供;HH-4型数显恒温水浴锅,常州澳华仪器有限公司提供;T U-1901型双光束紫外可见分光光度计,北京普析通用仪器有限责任公司提供。

1.4 多糖的含量测定

1.4.1 原理 采用硫酸-蒽酮的方法,因为多糖在浓硫酸作用下,可以水解成单糖分子,并迅速脱水生成糠醛,之后糠醛与蒽酮缩便合成糠醛衍生物,呈蓝绿色,颜色很稳定,在620 n m处有特征吸收,可以测定多糖含量。

1.4.2 标准曲线制备 取18支具塞试管,分成3组。每组分别加入0.1m g/mL葡萄糖标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL然后加蒸馏水至1.0mL,沿试管壁缓慢加入0.2%蒽酮-浓硫酸4.0mL,振荡器混匀,在沸水浴中加热10分钟,冷却10分钟后,以不加葡萄糖标准液的试管为对照,在分光光度计上测定620 n m处吸光值。

1.4.3 多糖含量测定 称取峨参多糖干燥粉末0.100 0 g于100mL容量瓶中,用蒸馏水定容,制成浓度为1m g/mL的峨参多糖溶液。移取0.5mL峨参多糖液,按照硫酸-蒽酮法,在分光光度计上测定620 n m处测定吸光度。按标准曲线所得回归方程计算峨参多糖的含量。

1.5 抑制超氧阴离子

1.5.1 原理 采用邻苯三酚在碱性条件下能发生自氧化的原理,

1.5.2 实验操作方法 于9支10mL具塞试管中移取4.5mL 50mmo l/L的T r i s-Acc缓冲溶液(p H=8.2),每支试管加入4.2mL双蒸水,再分别取1mL浓度为1.0m g/mL、0.8m g/mL、0.6m g/mL、0.4 m g/mL、0.2 m g/mL、0.1 m g/mL、0.05 m g/mL浓度的峨参多糖液于第3~9支试管中,第1~2支试管用双蒸水补足。20℃水浴20分钟后,第2~9支试管中加入浓度为10mmo l/L的邻苯三酚0.4mL,立即摇匀,准确反应4分钟,立即加入8 mo l/L H C l 0.1mL终止反应,325 n m测吸光值。

2 结果

2.1 超氧阴离子的抑制率 根据抑制率=[A0-(A x-A i0)]/A0×100%,计算不同浓度多糖对超氧阴离子产生的抑制率。见表1。

表 1 多糖超氧阴离子抑制率

2.2 峨参多糖的含量 以回归方程y=5.575x+ 0.119 1,计算峨参多糖浓度为0.389 9m g/mL,含量为38.99%。见表2。

表 2 葡萄糖不同浓度的吸光度值

3 讨论

葡萄糖标准曲线结果显示,所得的回归方程为y=5.575x+0.119 1,R=0.999 6,说明采用硫酸-蒽酮法测定多糖含量,所得标准曲线线性关系良好。多糖抑制超氧阴离子量效关系实验结果表明,在0.1~1m g/mL浓度内,多糖对超氧阴离子的抑制率随多糖浓度的增加而增强。0.6~1m g/mL浓度之间,其抑制率明显增强,最大抑制率达31.22%。

人体内抗自由基损伤体系是一个复杂而完善的机能的体系,主要包括抗氧化酶和抗氧化剂两类[6-7]。在自由基产生过多或者自由基消除功能降低时,自由基对身体的损伤就会显现出来[8]。这时就需要依靠外力来帮助消除体内过量的自由基,以防止疾病的发生。研究抗氧化作用的药物对于预防和治疗因自由基过剩引起的疾病有重要意义。本研究初次探索研究峨参多糖的抗氧化作用,通过峨参多糖对超氧阴离子的抑制效果证实峨参多糖具有良好的体外抗氧化活性。这将为今后开发峨参多糖为天然抗氧化剂提供了科学依据。

[1] 王凤岐,吴大真.峨眉神效验方[M].北京:科学普及出版社,1982:42.

[2] 王志光,尹述凡.脱氧鬼臼毒素杀虫作用机理初步研究[J].中国医药工业杂志,1992,23(2):65-68.

[3] 王岳峰,耿耘,朱利平.峨参根化学成分研究[J].安微农业科学,2009,37(23):11001-11002.

[4] 丁昭利,王岳峰,刘苡菡.峨参提取工艺的优化研究[J].安微农业科学.2009,37(31):15424-15425.

[5] 王岳峰,刘苡菡,耿耘,等.HPLC法测定峨参中峨参內酯[J].中成药.2011,33(9):1565-1567.

[6] 马超英,涂显琴,牛顺子,等.峨参石油醚提取物对肺癌细胞A549和H460的增殖的抑制作用观察[J].河北医药,2011,33(13):1956-1926.

[7] 涂显琴,马超英,耿耘,等.峨参提取物对肺癌细胞A549和H460的增殖抑制作用的初步观察[J].中华中医药学刊,2012,30(1):60-62.

[8] 马向华,马超英,耿耘,等.峨参不同提取物的急性毒性实验[C].北京:全国有毒中药的研究及其合理应用交流研讨会,2012.

Study on Content Determ ination and Antioxidant Activity of Polysaccharide in EShen

WANG Yuefeng,DING Zhaoli
Emei Branch of Xi'an Jiaotong University,Emei614202,China

Objective:To study on determination and antioxidant activity of polysaccharides in EShen[Anthriscus sylvestris (L.)Hoffm]extracts.Methods:According to the anthrone-sulfuric acid method,the contents of polysaccharides in EShen extractswere calculated by regression equation obtained from the standard curveand the absorbance wasmeasured under 620nm w ith spectrophotometer;simultaneously,w ith the principle of pyrogallic acid happening auto-oxidation in alkaline situation,the inhibition ratesof differentconcentrationsof polysaccharideson superoxide anion were calculated to observe its antioxidantactivity in the lightof inhibition rate=[A0-(Ax-Ai0)]/AO× 100%.Results:The concentrations of polysaccharides in EShe n extractswere 0.389 9mg/m L and 38.99%;the inhibition rate of polysaccharides in EShen extracts on superoxide anion increased as the concentrations of polysaccharides raised in the concentrations between 0.1 and 1mg/m L,the inhibition rates enhanced obviously in the concentrations between 0.6 and 1mg/ML,maximum inhibition rate reached 31.22%.Conclusion:Polysaccharides in EShen extracts are in high contents,which show better antioxidantactivity in vitro,itwould provide scientific basis for the developmentof polysaccharides in EShen extractsasa naturalantioxidant.

EShen;polysaccharide;contentdetermination;antioxidantactivity

R284.2

A

1004-6852(2015)08-0021-02

2014-10-25

四川省应用基础项目(编号:05JY029-099-1)。

王岳峰(1957—)男,副教授。研究方向:中药学。

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