珠海地区635例地中海贫血基因检测结果分析

李佩芳 庞文正

珠海地区635例地中海贫血基因检测结果分析

李佩芳 庞文正

目的研究珠海地区地中海贫血的发生率、基因突变类型和构成比。方法α基因变异用聚合酶链式反应(PCR)法检测3种常见基因缺失(--SEA、-α4.2、-α3.7), β基因变异用反向点杂交法检测 17种常见突变位点(β0包括Int, CD41-42, CD31, CD14-15, CD17, CD71-72, IVS-Ⅰ-1, CD43, CD27/28；β+包括IVS-Ⅱ-654, -28, -29, -30, -32, CAP, IVS-Ⅰ-5, βE )。结果635例送检个体中, 地中海基因变异总检出率为49.76%(316/635), 其中α地中海贫血基因缺失阳性率为30.87%(196/635), β地中海贫血基因突变阳性率为15.91%(101/635), αβ复合型地中海贫血基因突变阳性率为2.99%(19/635)。结论研究珠海地区地中海贫血的发生率、基因突变类型和构成比, 为遗传咨询和婚育指导提供了有价值的基础资料。

地中海贫血；小细胞低色素；基因型

地中海贫血(thalassemia)简称地贫, 是由于血红蛋白的珠蛋白肽链合成障碍或速率降低、血红蛋白产量减少所引起的一组遗传性溶血性贫血。临床有重要意义的主要为α及β珠蛋白生成障碍性贫血, 可由单纯α基因缺失或β基因突变, 或α、β同时变异引起。广东省是该病的高发区,据文献报道, 广东省地中海贫血基因的携带率达11.07%左右［1］。地中海贫血患者外周血红细胞可表现为单纯小细胞或者小细胞低色素。为调查这些个体中地中海贫血的发生率和基因类型。作者选取了635例血液学检测提示单纯小细胞或小细胞低色素的个体行地中海基因检测并对结果进行分析。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月～2015年1月本院门诊及住院患者共635例, 其中男265例, 女370例, 年龄6 d～85岁。单纯小细胞或小细胞低色素诊断标准参见文献［2］。所有个体伴或不伴贫血。

1.2 方法

1.2.1 血液学检测方法无菌EDTA抗凝管抽取静脉血2 ml,全自动血液分析仪(西斯美康2000i)检测红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、平均血红蛋白含量(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)等参数。

1.2.2 地中海贫血基因检测 该方法由广州金域医学检验中心基因诊断室提供：用无菌EDTA抗凝管抽取静脉血2 ml, α基因变异用PCR法检测3种常见基因缺失(--SEA、-α4.2、-α3.7), 试剂由亚能公司提供；β基因变异用反向点杂交法检测 17种常见突变位点(β0包括Int, CD41-42, CD31, CD14-15, CD17, CD71-72, IVS-Ⅰ-1, CD43, CD27/28；β+包括IVS-Ⅱ-654, -28, -29, -30, -32, CAP, IVS-Ⅰ-5, βE), 试剂由深圳益生堂生物公司提供。

2 结果

2013～2015年共送检标本635例, 316例检测结果为阳性,总阳性率为49.76%, 其中196例检测出单纯α地中海贫血基因缺失, 阳性率为30.87%, 101例检测出单纯β地中海贫血基因突变, 阳性率为15.91%, 19例αβ复合型, 阳性率为2.99%。α、β及αβ复合型地中海贫血基因检测结果具体见表1, 表2, 表3。

表1 α地中海贫血基因检测结果(n, %)

表2 β地中海贫血基因检测结果(n, %)

表3 αβ复合型基因检测结果(n)

3 讨论

地中海贫血在我国以南方地区多见, 尤以广东、广西最甚, 据估计两省地中海贫血人数占全国总人数的2/5 以上［3］,广东省α地中海贫血基因携带率为8.53%［4］, β地中海贫血基因携带率为2.54%［4］, 同时携带 α 和 β 地中海贫血基因突变的比例为0.26%［5］。

本研究结果显示, 在635例送检个体中, 经基因检查确诊316例, 阳性率为49.76%, 其中α地中海贫血196例, 阳性率为30.87%, β地中海贫血101例, 阳性率为15.91%, 与文献报道类似［6］。最常见的α基因缺失类型为--SEA/αα, 其次是-α3.7/αα、-α4.2/αα、--SEA/-α3.7, 而--SEA/-α4.2相对较少见。在17种中国人常见的β地中海贫血基因突变类型中, CD41-42所占比例最高, 其次是IVS-Ⅱ-654、CD17、-28, 而IVS-Ⅰ-1、CD14-15、CD27/28相对较低。主要基因构成比与文献报道类似［7］。另外, 本研究还检测出19例αβ复合型地中海贫血, 阳性率为2.99%, 共检出7种β基因突变, 主要复合--SEA/αα和-α3.7/αα基因型。

地中海贫血红细胞参数可表现为单纯小细胞或小细胞低色素, 这种异常血液学检测还可见于缺铁性贫血、环形铁粒幼细胞性贫血、慢性病性贫血等。临床上, 一些地中海贫血基因携带者, 症状不典型, 血红蛋白检测正常, 若临床医生不注意, 往往会延误地中海贫血的诊断, 不利于优生优育。

地中海贫血是一组常染色体隐性遗传病, 如果夫妻双方均为同型地中海贫血基因携带者, 其后代有1/4的几率为中间或中型地中海贫血患儿。目前对于地中海贫血患儿尚无有效的治疗方法, 只能对症输血或进行干细胞移植, 而干细胞移植因配型困难和费用高昂, 一般家庭难以承受。对于外周血表现为小细胞低色素的个体, 本研究地中海贫血的阳性率为49.76%, 比例并不低。所以, 为了提高人口素质, 预防和控制地中海贫血重症患儿的出生, 应加强地中海贫血知识的普及和宣传, 同时临床医生对于血液学检测表现为单纯小细胞或小细胞低色素的个体, 应提高警惕, 杜绝漏诊。

［1］ 杜丽, 尹爱华, 张彦, 等.2171例地中海贫血产前基因诊断回顾性分析.国际妇产科学杂志, 2012, 39(2):208-210.

［2］ 熊立凡, 刘成玉 .临床检验基础 .第4版.北京:人民卫生出版社, 2007:34.

［3］ 李长钢.地中海贫血临床诊治中存在的问题.临床儿科杂志, 2009, 27(8):714-717.

［4］ Xu XM, Zhou YQ, Luo GX, et al.The prevalence and spectrum of alpha and beta thalassaemia in Guangdong Province: implications for the future health burden and population screening.Journal of Clinical Pathology, 2004, 57(5):517-522.

［5］ Ho PJ, Hall GW, Luo LY, et al.Beta-thalassaemia intermedia: isit possible consistently to predict phenotype from genotype? Br J Haematol, 1998, 100(1):70-78.

［6］ 田文芳, 唐喜军, 易素芬, 等.广东省珠海地区α-和β-地中海贫血基因突变类型研究.检验医学与临床, 2011, 8(12): 1487-1488.

［7］ 褚玉新, 王晓春, 胡朝晖, 等.广东省β-地中海贫血基因突变类型研究.中国地方病学杂志, 2010, 29(2):162-166.

Analysis of gene detection results of 635 thalassemia cases in Zhuhai area

LI Pei-fang, PANG Wen-zheng.Department of Inspection, The Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-Sen University, Zhuhai 519000, China

ObjectiveTo research incidence, gene mutation type and constituent ratio of thalassemia.MethodsPolymerase chain reaction method was applied to detect 3 common gene deletions in α gene mutation (--SEA, -α4.2, -α3.7), and reverse dot blot method was applied to detect 17 common mutation sites in β gene mutation (β0 included Int, CD41-42, CD31, CD14-15, CD17, CD71-72, IVS-Ⅰ-1, CD43, CD27/28; β+ included IVS-Ⅱ-654, -28, -29, -30, -32, CAP, IVS-Ⅰ-5, βE).ResultsIn the 635 detected cases, the total detect rate of Mediterranean gene mutation was 49.76% (316/635).Positive rate of α thalassemia gene deletion was 30.87% (196/635), positive rate of β thalassemia gene mutation was 15.91% (101/635), and positive rate of αβ combined thalassemia gene mutation was 2.99% (19/635).ConclusionThis research of incidence, gene mutation type and constituent ratio of thalassemia in Zhuhai area provides valuable basic value for genetic counseling, marital and fertility instructions.

Thalassemia; Microcytic hypochromic anemia; Genetype

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.25.008

2015-02-26］

519000 中山大学附属第五医院检验科

庞文正