氯霉素滴眼液无菌检查方法的研究

董自艳 戴 翚

·实验研究·

氯霉素滴眼液无菌检查方法的研究

董自艳 戴 翚

目的 建立氯霉素滴眼液的无菌检查方法。方法 无菌检查采用薄膜过滤法, 冲洗液为0.1%蛋白胨溶液, 冲洗量为400 ml/滤筒。结果 此法能有效消除抑菌成分的干扰, 各试验菌生长良好。结论 经方法学验证, 所建立的方法适用于氯霉素滴眼液的无菌检查。

氯霉素；无菌检查；方法验证

氯霉素滴眼液用于治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致的眼部感染, 如沙眼、结膜炎、角膜炎、眼睑缘炎等。《中国药典》2010年版首次规定眼用制剂必须做无菌检查［1］, 因此需建立氯霉素滴眼液的无菌检查方法并进行验证。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 HTY-2000A型集菌仪(Gaodetailin)；NS01-A3型全封闭无菌试验过滤培养器(批号20120701, 北京牛牛基因技术有限公司)；培养箱(Binder)。硫乙醇酸盐液体培养基(批号120203)、改良马丁培养基(批号120302)、改良马丁琼脂培养基(批号120520)、营养肉汤培养基(批号120508)、营养琼脂培养基(批号120513)、0.1%蛋白胨溶液(批号120217), 由中国食品药品检定研究院培养基室提供, 用前进行无菌性和灵敏度检查, 符合规定。氯霉素滴眼液, 规格：8 ml：12.5 g, 辽宁某药厂生产。

1.2 菌种 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)［CMCC(B)63 501］、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)［CMCC(B)26 003］、生孢梭菌(Clostridium sporogenes)［CMCC(B)64 941］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10 104］、大肠埃希菌(Escherichia coli)［CMCC(B)44 102］、白色念珠菌(Candida albicans)［CMCC(F)98 001］、黑曲霉(Aspergillus niger)［CMCC(F)98 003］均由中国药品生物制品检定所提供。

1.3 方法

1.3.1 菌液的制备 接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪胨大豆肉汤培养基中, 34℃培养24 h；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中, 24℃培养48 h；接种生孢梭菌至硫乙醇酸盐液体培养基中, 34℃培养24 h。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上, 24℃培养7 d, 加入5 ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液清洗孢子, 用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成孢子悬液。上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释, 枯草芽孢杆菌悬液稀释至10-5、金黄色葡萄球菌悬液稀释至10-6、铜绿假单胞菌与大肠埃希菌悬液稀释至10-7、白色念珠菌悬液稀释至10-5、生孢梭菌悬液稀释至10-7、黑曲霉菌孢子悬液稀释至10-4。按药典规定检验上述实验用菌液, 均约为50～100 cfu/ml［2］。

1.3.2 方法验证 取供试品10支, 用薄膜过滤法注入无菌滤器中, 每个滤筒分别用0.1%蛋白胨溶液300 ml和400 ml冲洗, 每个滤筒100 ml/次, 然后将1 ml试验菌液接种到硫乙醇酸盐液体培养基或改良马丁琼脂培养基中, 另取一个装有同体积相同培养基的无菌滤筒, 加入等量试验菌, 作为对照［3,4］。结果表明, 采用薄膜过滤法以0.1%蛋白胨溶液作为冲洗液, 400 ml/滤筒的冲洗量进行无菌检查可消除抑菌作用。

2 结果

无菌检查：根据方法验证各试验菌的生长情况与《中国药典》2010版的相关规定, 选择金黄色葡萄球菌作为无菌检查的阳性对照菌。取供试品10支泵入无菌滤器中, 滤过后分别用0.1%蛋白胨溶液400 ml冲洗, 每个滤筒100 ml/次, 冲洗后每个滤筒加入硫乙醇酸盐液体培养基或改良马丁琼脂培养基, 在相应条件下培养14 d, 逐日观察其结果。具体结果见表1。

表1 供试品无菌检查结果

3 小结

《中国药典》2010年版首次规定眼用制剂必须做无菌检查, 因此需建立氯霉素滴眼液的无菌检查方法, 而文献中并未见其报道, 因此本文建立了氯霉素滴眼液的无菌检查法并进行了验证, 为此项检查工作提供借鉴。

［1］ 国家药典委员会.中国药典(二部).北京:中国医药科技出版杜, 2010:1031.

［2］ 李国成, 刘春霞, 余晓霞.复方萘甲唑林滴眼液质量标准的研究.今日药学, 2011(3):161-164.

［3］ 张新妹, 胡昌勤, 赵霞, 等.注射用伏立康唑无菌检查法的建立.天津药学, 2003, 15(5):9-11.

［4］ 顾珉.头孢地尼原料药的无菌检查方法学验证.抗感染药学, 2014, 11(1):35- 36.

Research of sterility test method for chloramphenicol eye drops

DONG Zi-yan, DAI Hui.Liaoning Fushun City Food and Drug Inspection Institute, Fushun 113006, China

Objective To establish a sterility test method for chloramphenicol eye drops.Methods Membranefilter procedure was applied for sterility test, with 0.1% peptone solution as flushing fluid and 400 ml/filter cartridge as flushing volume.Results This method could effectively eliminate interference by antibacterial components, with good growth of every test organisms.Conclusion Through methodology validation, this established method is suitable for sterility test in chloramphenicol eye drops.

Chloramphenicol; Sterility test; Method validation

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.16.200

2014-12-23］

113006 辽宁省抚顺市食品药品检验所(董自艳)；中国食品药品检定研究院(戴翚)