百合地黄汤水提物和醇提物的抗抑郁作用对比*

蒋征奎，李 晓

(1.郑州大学附属肿瘤医院，河南 郑州 450000； 2.河南省植物天然产物开发工程技术研究中心，河南 郑州 450002)

百合地黄汤水提物和醇提物的抗抑郁作用对比*

蒋征奎1，李 晓2

(1.郑州大学附属肿瘤医院，河南 郑州 450000； 2.河南省植物天然产物开发工程技术研究中心，河南 郑州 450002)

目的:对比两种百合地黄汤提取物的抗抑郁作用并探讨其作用机制。方法：以小鼠强迫游泳法、悬尾实验制造抑郁模型，观察百合地黄汤水提物和醇提物对小鼠自主活动、强迫游泳不动时间、悬尾不动时间以及对利血平化小鼠脑单胺递质去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA) 的影响。结果：百合地黄汤可明显缩短小鼠强迫游泳不动时间、悬尾不动时间，提高利血平化小鼠NA、DA、5-HT含量，且醇提液效果优于水煎液。结论：百合地黄汤醇提物抗抑郁作用优于水提物，其可能是通过改变中枢单胺递质含量来实现抗抑郁作用的。

百合地黄汤水提物/药效学；百合地黄汤醇提物/药效学；抑郁/药物作用；小鼠；动物模型

寻找安全有效的抗抑郁药物已成为医学界的热点问题，目前抗抑郁药物筛选的重点正由化学药物转向多靶点起效的天然植物药物[1]。百合地黄汤，又名百合汤，始载于张仲景《金匮要略》，由百合、生地黄组成，是治疗百合病专用方。百合病的症状与现代医学的抑郁症症状比较相似，临床上用百合地黄汤或其加减方治疗抑郁症取得很好的疗效[2-3]。目前，百合地黄汤抗抑郁作用方面的现代药理和作用机制研究较少[4]，且传统药用为水煎液。本研究观察并对比了百合地黄汤水提物和醇提物的抗抑郁作用，初步探讨了其作用机理，以期为其临床开发应用提供药理学参考。

1 材料与方法

1.1 动 物

健康昆明种成年雄性小白鼠，体质量20～25 g，由河南省实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(豫)2010-0002。分笼饲养，饲料由河南省实验动物中心提供，室温(25±2)℃，自然光照。

1.2 药品、试剂与仪器

百合、生地黄，购自河南省张仲景大药房，经河南省科学院赵天增研究员分别鉴定为百合科植物百合LiliumbrownieF.E.Brown var.viridulumBaker的干燥肉质鳞叶、玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch.的干燥块根。盐酸丙米嗪片，上海医药有限公司信谊制药总厂产品，批号110201，用羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成质量分数1 g/L溶液；利血平注射液，1 mg/mL，通化茂祥制药有限公司产品,批号110563；多巴胺盐酸盐、去甲肾上腺素酒石酸盐、5-羟色胺，均为Sigma公司产品，购自上海恒远生物科技有限公司，CAS号依次为90274-24-1,69815-49-2,153-98-0。RF-540荧光分光光度计、DR-3数据处理机，均为日本岛津公司产品；RE-52AA 旋转蒸发器， 上海亚荣生化仪器厂产品；FA2104B型电子天平，上海精密科学仪器分公司产品；ZIL-2程控自主活动箱，中国医学科学院药物研究所生产；玻璃组织匀浆器、离心机，海门市天龙实验器材厂产品；电热恒温水浴箱，常州国华电器有限公司产品。

1.3 受试溶液的制备

百合地黄汤中百合和生地用量比例为 4∶3。百合地黄汤水煎液(以下简称BST) 为全方用水煎煮2次，每次1 h，合并提取液，减压浓缩为每毫升含1 g生药溶液，备用。百合地黄汤醇提液(以下简称BCT)为全方分别以700 mL/L乙醇回流提取2次，合并提取液，减压回收至无醇，制成每毫升含1 g生药溶液，备用。

1.4 对小鼠自主活动影响的实验

参照文献[5]进行。取实验小鼠80只，随机分为正常对照组，丙咪嗪组，BST组和BCT组的高、中、低剂量(24，12，6 g/kg)组 8组，每组10只。BST组和BCT组的高、中、低剂量(24，12，6 g/kg)组分别灌胃相应药物，丙咪嗪组给以1 g/L盐酸丙米嗪溶液0.02 mL/g，正常对照组给以生理盐水20 μL/g，上午8时灌胃给药，1 d 1次。给药第8天30 min后开始小鼠自主活动实验，用程控自主活动箱测定小鼠放入自主活动区后5 min内的活动次数。

1.5 对小鼠悬尾不动时间影响的实验

参照文献[5]进行。上述1.4中动物灌胃给药第9天给药30 min开始小鼠悬尾不动实验。用铁夹固定小鼠尾部后1/3处悬吊于铁架台上，头部离台面约30 cm，四周用板隔离动物视线，待动物适应1min出现不动时开动秒表计开始记录，累计后5 min内的悬尾不动时间。

1.6 对小鼠强迫游泳不动时间影响的实验

参照文献[5]进行。上述1.4中动物灌胃给药第10天给药30 min开始小鼠强迫游泳实验，将小鼠放入水深16 cm， 长19 cm、宽 18 cm的玻璃缸内，水温25℃，水中适应2min后出现不动时开动秒表开始计时，累计后4 min内的小鼠强迫游泳不动时间。

1.7 抗抑郁作用机制实验

参照文献[5]进行。取实验小鼠90只，随机分为正常对照组、模型对照组、丙咪嗪组、BST组和BCT组高、中、低剂量组9组，每组10只。除正常对照组外，各组均先以0.25 μg/g利血平皮下注射6 d；第3天开始模型对照组以生理盐水20 μL/g灌胃，丙咪嗪组以1 g/L盐酸丙米嗪溶液 20 μL/g灌胃，百合地黄汤组分别以24,12,6 g/kg灌胃，连续给药10 d。末次给药30 min后，断头取脑，称量质量，水浴中去除小脑，冰浴制作脑组织匀浆，用玻璃匀浆器以3 000 r/min离心20 min，分离后取其上清液，采用荧光法测定去甲肾上腺素(NA)、5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)的含量。

1.8 统计学方法

2 结 果

2.1 各组小鼠5 min自主活动数量对比

百合地黄汤各组小鼠的5min自主活动数量与正常对照对照组对比，差别无统计学意义。结果表明：百合地黄汤对小鼠自主活动无明显影响 。见表 1。

组 别动物数剂量/(g·kg-1)5min自主活动数量/次正常对照组10—319.54±16.48丙咪嗪组100.02323.06±15.94BST高剂量组1024316.54±20.08BST中剂量组1012309.02±23.22BST低剂量组106311.19±16.03BCT高剂量组1024320.30±20.11BCT中剂量组1012312.57±21.38BCT低剂量组106304.30±23.56

2.2 各组小鼠5min悬尾不动时间对比

百合地黄汤醇提液高、中剂量组和水提液高剂量组小鼠悬尾不动时间缩短，与正常对照组对比，差别有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，其中以醇提液高剂量组尤为显著(P<0.01)；其他剂量组小鼠5min悬尾不动时间较正常对照组缩短，但差别无统计学意义。见表2。结果表明：百合地黄汤高剂量可以对抗小鼠因强迫悬尾造成的抑郁症状。

组 别动物数剂量/(g·kg-1)5min悬尾不动时间/s正常对照组10—145.23±39.90丙咪嗪组100.0278.73±30.46**BST高剂量组1024110.25±35.97*BST中剂量组1012125.02±39.22BST低剂量组106142.54±40.08BCT高剂量组102489.27±28.78**BCT中剂量组1012100.83±35.48*BCT低剂量组106120.30±46.11

注：与正常对照组对比，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 各组小鼠4 min强迫游泳不动时间对比

与正常对照组对比，百合地黄汤醇提液3个剂量组和水提液高剂量组小鼠的4 min强迫游泳不动时间缩短，其中以醇提液高、中剂量组尤为显著(P<0.01)；其他剂量组也有不动时间的缩短趋势，但差别无统计学意义。结果表明：百合地黄汤可以对抗小鼠因强迫游泳造成的抑郁症状。见表3。

组 别动物数剂量/(g·kg-1)4min强迫游泳不动时间/s正常对照组10—155.23±39.90丙咪嗪组100.02108.73±30.46**BST高剂量组1024119.25±35.97*BST中剂量组1012128.02±39.22BST低剂量组106142.54±40.08BCT高剂量组1024109.27±28.78**BCT中剂量组1012113.83±35.48**BCT低剂量组106122.30±37.11*

注：与正常对照组对比， *P<0.05，**P<0.01。

2.4 各组小鼠脑组织匀浆中NA、DA、5-HT水平对比

模型对照组小鼠脑组织匀浆中NA、5-HT、DA含量均减少，与正常对照组对比，差别有统计学意义(P<0.01)。 与模型对照组对比，百合地黄汤醇提液3个剂量组与水煎液高、中剂量组小鼠脑组织匀浆中NA、5-HT、DA含量增加，差别有统计学意义 (P<0.01或0.05)。结果显示：百合地黄汤可显著增加脑内NA、5-HT、DA的含量，提示其抗抑郁作用机制可能与增加脑内单胺类神经递质的含量有关。见表4。

组 别动物数剂量/(g·kg-1)NADA5-HT正常对照组10—349.2±12.7689.5±23.6541.3±18.1模型对照组10—116.7±14.5**287.0±41.8**257.0±19.0**丙咪嗪组100.02202.2±15.1##394.3±41.6##369.8±18.7##BST高剂量组1024165.7±21.9##348.9±35.8##318.9±21.8##BST中剂量组1012142.7±18.9#323.7±34.7#281.9±22.6#BST低剂量组106123.7±25.9302.4±44.2269.9±28.3BCT高剂量组1024197.0±13.5##389.6±41.2##366.3±20.7##BCT中剂量组1012186.1±15.3##359.9±39.2##334.9±19.7##BCT低剂量组106145.1±17.2#325.1±39.5#308.5±22.7#

注：与正常对照组对比，**P<0.01 ；与模型对照组对比，#P<0.05，##P<0.01。

3 讨 论

抑郁症的病因和发病机制还不明确，目前公认的发病机制认为：抑郁症的发生与脑单胺类神经递质包括NA、5-HT、DA的减少有关[6]。百合地黄汤组方中百合可益气安神、润肺清心，生地黄可益心营、清血热，配伍百合，共成凉血清热、润养心肺之方剂。本研究结果显示：百合地黄汤能明显缩短悬尾及强迫游泳实验中小鼠的不动时间，而对其自主活动无显著影响，可提高利血平小鼠脑NA、DA、5-HT含量；表明该方在不产生中枢兴奋作用的前提下，有较好的抗抑郁作用，且醇提液比水煎液的疗效显著。本研究提示：百合地黄汤的抗抑郁作用机制可能与增加脑内单胺类神经递质的含量有关。此机制尚需进一步研究。

[1]张曼,张丽萍.中医药治疗抑郁症研究进展[J].中华实用中西医杂志,2007,20(7):568-570.

[2]缪卫红.甘麦大枣汤合百合地黄汤治疗老年抑郁症19例临床观察[J].中医药导报,2012,18(5):39-40.

[3]聂皎,李青,曹颖颖.百合地黄汤治疗慢性心力衰竭合并抑郁状态33例[J].云南中医中药杂志,2010,31(11):41-42.

[4]戴丽.百合地黄汤的临床应用和实验研究[J].海峡药学,2012，18(5)：39-40.

[5]张均田,杜冠华.现代药理实验方法[M].北京：中国协和医科大学出版社,2012:1360-1362.

[6]何舒，林渝峰，李霞.抑郁症的发病机制研究进展[J].四川生理科学杂志,2006,28(3):126-128.

(编辑 陶 珠)

1001-6910(2015)08-0055-03 ·实验研究·

R285.5

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.08.27

河南省科技攻关项目(122300410069)

2015-03-05；

2015-05-26