榆苋方对溃疡性结肠炎Pim—1、STAT3表达水平的影响

邱伟　方晓华　杨振斌　殷鸿

[摘要] 目的 探讨Pim-1、STAT3蛋白在UC中的表达情况，并观察榆苋方对其表达的影响。 方法 通过免疫组织化学的方法检测60例UC患者和50例正常人肠黏膜中Pim-1、STAT3的表达，并观察榆苋方灌肠后同一UC患者黏膜中Pim-1、STAT3的表达。 结果 UC患者肠黏膜中Pim-1、STAT3阳性表达率明显高于正常人，差异有统计学意义（P<0.05），且在 UC患者肠黏膜中Pim-1的表达与STAT3呈正相关（r=0.512，P<0.05）；UC患者通过榆苋方灌肠后Pim-1、STAT3蛋白的阳性表达明显下降，与治疗前相比差异有统计学意义（P<0.05）。 结论 Pim-1、STAT3所介导的免疫网络与UC的发生、发展有关，榆苋方可干扰Pim-1、STAT3所介导的免疫反应，达到治疗的效果。

[关键词] 榆苋方；溃疡性结肠炎；Pim-1；STAT3

[中图分类号] R574.62 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2015）17-0121-03

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）是一种机制尚不完全明确的非特异性炎症性疾病，遗传、免疫、感染等因素在溃疡性结肠炎的发生和发展中起着重要作用，尤其免疫介导UC越来越得到重视。近年来Pim-1、STAT3因子在免疫系统的作用逐渐受到重视，且与UC炎症程度密切相关，可作为评估病情及预后的重要依据[1]。UC的治疗目前以激素、免疫抑制剂、氨基水杨酸类为主，因副作用多、耐药性、反跳性，依从性、远期疗效欠佳，因此寻找安全、高效、价廉的治疗方法刻不容缓。我科通过榆苋方灌肠治疗，临床上取得确切疗效，可干扰Pim-1、STAT3所介导的免疫网络系统，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2010年3月～2013年3月间我院消化科门诊与病房患者，均在我院行肠镜检查，共60例，病变均位于降结肠，病情均为活动期，其中位于直肠16例，直乙结肠12例，左半结肠32例；初发型36例，慢性复发型12例，慢性持续型12例；轻度15例，中度18例，重度27例；男32例，平均年龄（34±2）岁；女28例，平均年龄（36±3）岁。60例患者病理标本均来自于我院病理科。西医诊断：所有患者均符合炎症性肠病诊疗治疗规范共识意见关于 UC 诊断标准。中医诊断：符合《溃疡性结肠炎中医诊疗共识（2009）》。所有患者需要排除结肠癌、肠结核、阿米巴脓肿、克罗恩病、肠易激综合征、孕妇、严重精神病及严重心、肺功能疾病者。

1.2 方法

选取60例UC患者病理标本作为实验组，另选取正常人病理标本50例作为空白对照组，采取免疫组织化学的方法检测，步骤按试剂盒进行操作。鼠抗人Pim-1蛋白购自上海基兔实验有限公司、STAT3购自武汉博士德生物有限公司作为一抗，二抗免疫组织化学试剂盒购自北京生物金桥有效公司，一抗以PBS作为阴性对照。所有实验组患者给予榆苋方保留灌肠（生地榆50 g、马齿苋50 g、生苡仁30 g、白头翁30 g、秦皮30 g、黄柏30 g、仙鹤草30 g、白芨粉5 g，浓煎至100 mL），活动期每日一次灌肠2周，以后隔日一次10周，共12周。同一患者再次检测治疗后Pim-1、STAT3表达情况，并检测患者血常规、肝肾功能指标。

1.3 结果判断[2]

Pim-1、STAT3蛋白主要在细胞浆内表达，呈棕色或黄色颗粒状。每张切片选择染色良好区域，随机连续观察5个高倍视野（×400）， 阳细胞数<25%阴性，25%～50%为（+），50%～75%为（++），>75%（+++）。根据表达率情况，阴性（-）、弱阳性（+）、阳性（++）、强阳性（+++）分别计分为0、1、2、3分。

1.4 统计学方法

应用SPSS13.0统计学软件进行数据处理，计量资料、计数资料分别采用t检验、χ2检验，对UC患者肠黏膜中Pim-1、STAT3的表达进行相关性分析。

2 结果

2.1 Pim-l、STAT3在UC、正常肠黏膜组织中表达情况

由表1可以得出，与对照组相比，实验组中Pim-1、STAT3表达明显增高，差异有统计学意义（P<0.05）。

表1 Pim-1、STAT3在UC、正常肠黏膜组织中表达情况[n（%）]

注：与对照组比较，Δχ2=34.623，ΔP=0.021，*χ2=41.990，*P=0.018

2.2 UC中Pim-1、STAT3的表达关系

由表2可以看出，Pim-1蛋白的表达与STAT3表达呈正相关（r=0.512，P=0.036）。

表2 UC中Pim-1、STAT3的表达关系

2.3 UC治疗前后黏膜组织中Pim-1、STAT3表达情况

由表3可以看出，与治疗前相比，治疗后患者Pim-1蛋白、STAT3蛋白表达明显下降，差异有统计学意义（P<0.05）。

表3 UC治疗前后黏膜组织中Pim-1、STAT3表达情况（x±s）

注：与治疗前比较，Δt=3.510，ΔP=0.041；*t=3.310，*P=0.028

2.4安全性

所有患者治疗后均检测血常规、肝肾功能未见明显异常。

3讨论

UC又称慢性非特异性溃疡性结肠炎，病变主要侵及黏膜层，多累及直肠和左半结肠，也可遍及整个结肠，且病程较长、复发性高、有癌变倾向。UC的发病原因尚不完全明确，目前认为与免疫系统紊乱有关。Pim-1、STAT3蛋白近年来研究表明在免疫系统中的作用越来越得到重视，Chevaux JB[3]研究表明，Pim-1、STAT3所介导的免疫网络在UC的发生、发展中起着极重要的作用。被激活的STAT3因子能直接参与Pim-1基因启动子表达而使Pim-1基因表达上调，通过阻断Pim-1信号通路对UC急性期有明显治疗作用[4，5]，抑制Th0向Th1、Th17分化。CD4+Th受到外在刺激后分化为Th0细胞，然后分化为不同的亚群，如Th1、Th2、Th3等。研究表明UC与Th1、Th2型因子上调有关[6，7]。早期UC的发生可能与Thl应答有关，后期则以Th2为主。阻断Pim-1因子表达可抑制巨噬细胞的激活，抑制TLR-2、TLR-4、NF-κB相关通路所调控的炎症因子IL-4、IL-10、IL-12等表达。研究发现UC患者TLR-2、TLR-4和NF-κB表达明显增加，TLR2通过识别PAMPs从而激活NF-κB活化途径，在UC的病理生理过程中起到枢纽性作用。随着UC病理分级程度越高，肠黏膜中NF-κB的表达越明显[8-11]。本研究显示，与正常肠黏膜相比，在UC中Pim-1、STAT3蛋白表达明显增高（P<0.05），且Pim-1、STAT3之间的表达呈正相关。

祖国医学文献中并无此病的专门记载，属肠风、痢疾、滞下、大癖泻、休息痢等范畴，活动期的病机要点是湿热蕴肠、气滞络瘀、脂膜血络受损而成疡，肉腐膜疡为其基本病理表现，故以凉血止痢、敛疮生肌为治疗大法。元刘河间对于痢疾曾提出“调气则后重自除，行血则便脓血自愈”的治疗大法。我科通过多年的研究和临床实践，在白头翁合芍药汤基础上进行加减，自创中药复方凉血止痢敛疮法之榆苋方灌肠，其基本组成为地榆、马齿苋、白头翁、秦皮、黄柏、仙鹤草、白芨，诸药合用，共奏凉血止痢、敛疮生肌之功，临床使用中疗效显著。本实验研究通过分子生物学的研究从微观上探究榆苋方的作用，从实验中可以看出通过榆苋方灌肠治疗后UC患者肠黏膜中Pim-1、STAT3表达明显下降（P<0.05），且无明显毒副作用，说明该方具有多靶点修复溃疡、调节机体免疫反应等多种效应。

综上，溃疡性结肠炎的治疗难度大，安全、有效、价廉的中医中药成为一种重要的途径，榆苋方作为我科已多年使用的药方已在临床上取得极好的疗效，现通过分子水平进一步证实其疗效的确切性，为今后的临床应用提供新的理论依据，当然，我们仍需要进一步探索UC免疫网络机制，为更好地指导我们应用中药治疗UC提供更多的依据。

[参考文献]

[1] 周婷婷，仝巧云. 溃疡性结肠炎发病机制的研究进展[J]. 胃肠病学和肝病学杂志，20l2，21（12）：1163-1166.

[2] Jiao Jeta. An essential role for N-eadherin and beta-catenin for progression in tongue squamous cell earcinoma and their effect on invasion and metastasis of Tca8113 tongue cancel cells[J]. Oncol Rep，2010，21（5）：1223-1233.

[3] Chevaux JB. Recent advances in cytokines：Therapeutic implications for inflammatory bowel diseases[J]. World J Gastroenterol，2011，17（5）：547-556.

[4] Logan-Collins J，Thomas RM，Yu P，et al. Silencing of RON receptor signaling promotes apoptosis and gemcitsensi sensitivity in pancreatic cancer[J]. Cancer Res，2010， 70（3）：1130-1140.

[5] Brault L，Gasser C，Bracher F，et al. PIM serine/threonine kinases in patheogenesis and therapy of hematologic malignancies and solid cancers[J]. Haematologica，2010，95（6）：1004-1015.

[6] Jin Y，Chen JN， Tong DY，et al. Overexpression of osteopontin and the Pim-1 associated with prognostieally important clinicopathlogic variables in non-small cell lung cancer[J]. PLoS One，2012，7（10）：e48575.

[7] Andújar I，Recio MC，Giner RM，et al. Inhibition of ulcerative colitis in mice after oral adminiistration of a polyphenol-enriched cocoa extract is meddiated by the inhibition of STAT1 and STAT3 phosphorylation in colon cells[J]. J Agric Food Chem，2011，59（12）：6474-6483.

[8] Lu XF，Sun N. Toll-like receptors 2 and 4 and nuclearfactor-κB in colonic mucosa of ulcerative colitis expression and clinical significance[J]. Journal of Shandong University，2012，50（2）：60-63.

[9] 陈晓，王启之，梁冰，等. Toll样受体4、Myd88在溃疡性结肠炎结肠组织中的表达及相关性研究[J]. 中华消化杂志，2011，31（10）：699-700.

[10] 石永强.溃疡性结肠炎肠黏膜中Act1、IL-17、NF-κBp 65 的表达及意义[J]. 东南大学学报：医学版，2013，32（5）：599-602.

[11] Shen H. Effect of qingchang huashi recipe on NF-kappaB/Tolls pathway in ulcerative colitis patients and mechanism study[J]. Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi，2013，33（9）：1216-1220.

（收稿日期：2015-03-19）