某肉鸡场新城疫和禽流感抗体监测与调查分析

何飞 付太银 朱明霞

摘  要：为调查肉鸡新城疫、禽流感H5亚型（Re-6株）和H9亚型的免疫效果，从山东省某肉鸡场采集血样120份，利用微量红细胞凝集试验（HI）进行抗体水平监测。结果表明：试验鸡ND的抗体水平在33d前维持在6个滴度以上、8个滴度以下，33d后多在8个滴度以上，有的超过10个滴度;H9在12d、19d大都在4～6之间，26d时有所升高，33d时迅速升高至9个滴度以上;H5在12d时为7、8个滴度，19～26d时下降至5～2个滴度之间，33d时个别鸡只抗体水平有所增加。该结果为规模化肉鸡场有效预防和控制这3种主要疫病提供了科学依据。

关键词：肉鸡;新城疫;禽流感H5亚型;禽流感H9亚型;抗体监测

中图分类号：S858.312.4     文献标识码：B     文章编号：1673-1085（2015）04-0036-04

肉鸡呼吸道疾病属多病因呼吸道病综合征，常造成肉鸡养殖的严重损失，死淘率可达30%以上，并造成发病鸡生长迟缓、胴体降级或废弃，而成为危害肉鸡养殖业的重要疾病[1，2]。肉鸡呼吸道病病因极为复杂[3～5]，然而众多研究发现，对规模化肉鸡养殖危害最大的还是新城疫和禽流感。Lewis等[6]研究发现在目前普遍采用疫苗免疫的情况下，ND在部分地区流行依然严重，且表现出新的流行病学特点，如高免鸡群发病等。于康震等[7]对部分地区商品鸡及养鸡专业村禽流感血清学调查，发现H9亚型阳性鸡群占禽流感阳性鸡群总数的93.7%，证实禽流感、尤其是中等毒力以下H9亚型禽流感在中国的广泛存在，是目前影响中国养禽业的主要禽流感病毒亚型，所以对肉鸡而言，H9被称为“万病之源”。而H5亚型禽流感主要威胁肉种鸡，所以在肉种鸡往往要做好H5亚型的免疫，以保证商品肉鸡有足够的母源抗体。为更有效地控制这三种疾病对肉鸡的威胁，本研究采用红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验对某规模化肉鸡场的120份血样进行新城疫、H5和H9亚型禽流感抗体水平监测，分析抗体水平的消长规律，制定出一套科学的适合该肉鸡场的免疫程序。

1  材料与方法

1.1  材料

1.1.1  仪器  96孔微量反应板、移液枪、恒温箱。

1.1.2  试剂  ①试验试剂：阿氏液（红细胞保存液）、PBS液、1%鸡红细胞悬液均自配;②生物制品：鸡新城疫血凝抑制试验抗原由青岛易邦生物工程有限公司生产，批号为（20130301），禽流感病毒H5（Re-6株）和禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原为哈尔滨维科生物技术开发公司生产，批号分别为2013002、2013002.

1.2  方法

1.2.1  样品采集  试验期内每周（第1、2、3、4、5周）分别从2个试验舍（2号舍、4号舍）的前、中、后共挑选不同呼吸道症状的活鸡12只，采集血样，进行抗体监测，共采集血样120份。

1.2.2  血样的处理  将血液样品2000～2500r/min离心15min，用移液枪吸取血清加入灭菌的0.5ml离心管，置-20℃冰箱保存。

1.2.3  鸡红细胞悬液的配制  用加有抗凝剂的注射器采集未免疫的健康公鸡血液，用pH值7.2的0.01mol/l的PBS液洗涤3次，每次均以1000r/min离心10min，洗涤后用PBS液配成1%（V/V）的红细胞悬液，4℃保存备用。

1.2.4  检测方法  禽流感血凝抑制（HI），抗体效价的测定，参照GB/T18936-2003，新城疫血凝抑制（HI），抗体效价的测定，参照GB/T16550-2008。

1.2.5  该肉鸡场的免疫程序  1日龄：新支二联弱毒疫苗、传支弱毒苗喷雾;法氏囊弱毒疫苗、新流二联油苗颈部皮下注射;9日龄新支流三联油苗颈部皮下注射;22日龄免新城疫弱毒苗饮水。

2  结果与分析

2.1  2号舍抗体监测结果  见图1。

由图1可知：①2号舍12～26d，ND抗体水平维持在6log2以上，8log2以下，26d后均在7log2以上，33日龄有个别达到9log2;②2号舍H9抗体水平12～26d间始终维持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③2号舍H5抗体水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，33日龄又有所升高。

2.2  4号舍抗体监测结果  见图2。

由图2可知：①4号舍12d、19d和26dND抗体水平维持在6log2以上、8log2以下，而33d多数在8log2以上，有的达到10log2以上;②4号舍H9抗体水平12d到26d间始终维持在6log2以上，26d后上升到10log2以上;③4号舍H5抗体水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后1周又上升到6log2。

2.3  2号舍、4号舍抗体比较  由图1、图2可知：①2号、4号舍ND抗体水平始终维持在6log2以上，8log2以下;②2号、4号舍H5抗体水平由12d的8log2左右，一直下降到26d的4log2，此后一周4号舍H5抗体水平又上升到6log2;③2号、4号舍H9抗体水平12～26日龄间始终维持在6log2以上，26日龄后均上升到10log2以上。

2.4  试验舍死亡情况统计  见图3。

由图3可知：试验期间2舍和4舍死亡率在26日龄前大体相等，27日龄后2号舍死亡率显著上升。

3  讨论与分析

3.1  2号舍和4号舍ND的抗体水平在33d时多在8个滴度，有的超过10个滴度，疫苗免疫该日龄一般不会超过8个滴度，所以怀疑有可能存在新城疫感染。

3.2  H9的抗体水平在12d、19d大都在4～6个滴度之间，26d时有所升高，33d时忽然迅速升高，大都高于9个滴度，怀疑是由于感染H9野毒所致，确切原因还有待于病原分离与鉴定。

3.3  H5的抗体水平在12d时为7、8个滴度，说明雏鸡均具有很高的母源抗体，19～26d时下降至5～2个滴度之间，但33d时检测有的鸡只抗体水平有所增加，不能排除有H5感染的可能。

3.4  根据死亡情况统计可知：26d以前2个鸡舍死亡趋势和数目大致相当，同时符合肉鸡生长期内死亡规律，但27d后2号舍死亡率急剧上升，应综合各方面因素查找死亡诱因，以减少经济损失。

4  结论

根据本次研究结果和实践经验，对规模化肉鸡场而言，控制新城疫、H5和H9亚型禽流感，重点应落实在一个“防”字，在预防方面应着重做好以下几个方面工作：

4.1  做好种鸡的饲养管理和免疫预防，保证种鸡和鸡苗的健康。

4.2  做好孵化以及出苗的各项相关工作，防止鸡苗在出壳后第一环境的感染。

4.3  做好肉鸡场的各项饲养管理工作，保证场区清洁，做好疫病净化和病鸡隔离工作，确保场区内无这三种病原存在，确保所有进场的车辆、人员、物品都是安全的，确保携有病原的人员和物品与鸡群彻底隔开。

参考文献：

[1]Mersha，Tamiru N，Samuel B T.Occurrence of concurrent infectious diseases in broiler chickens is a threat to commercial poultry   farms in Central Ethiopia[J].Trop Anim Health Prod，2009，41：1309-1317.

[2]  蔡宝祥.鸡多病因呼吸道病的流行动态[J].中国家禽，2010，02：1-7

[3]  Malik，Y S，Patnayak D P，Goyal S M，et al. Detection of three avian respiratory viruses by single-tube multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction assay[J].Vet Diagn Invest，2004，16：244-248.

[4]  Vandekerchov D，De Herdt P，Laevens H. Singnificance of interactions between     Escherichia coli and respiratory pathogens in layer hen flocks suffering from colibacillosis-associated mortality[J].Avian Pathology，2004，33（3）：298-302.

[5]  Matthijs M G R，Ariaans M P，Dwars R M，et al. Course of infection and immune responses in the respiratory tract of IBV infected broilers after superinfection with E.coli veterinary[J].Immunology and Immunopathology，2009，127：77-84.

[6]  Lewis P D， Ciccone N， Sharp P J， et al. Light Intensity can Influence Plasma FSH and Age at Sexual Maturity in Domestic Pullets[J].Br Poult Sci，2005，46（4）：506-509.

[7]  于康震，付朝阳，崔尚金，等.中国禽流感防制研究进展[J].中国兽医学报，2001，21（1）：103-106