虫草菌粉对雏鸡免疫功能的影响

潘美慧，陈如圣，何后军，张祥华，邬向东，邓舜洲，王 萍，朱芝秀，陈瑞光

(江西农业大学 动物科学技术学院，江西 南昌 330045)

虫草菌粉为蝙蝠蛾拟青霉Cs-4菌粉，又称为发酵虫草菌粉，俗称虫草粉，虫草菌粉，虫草提取物，发酵虫草粉等。蝙蝠蛾拟青霉菌粉是从新鲜冬虫夏草菌(Cordyceps sinensis(Berk)sacc)中分离所得的虫草菌——蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen＆Dai)经液体深层发酵培养、过滤、干燥、粉碎制成的产品。蝙蝠蛾拟青霉菌种是江西国药有限责任公司与中国医学科学院药物研究所卫生部天然药物生物合成重点实验室经过10年时间从青海产天然冬虫夏草中分离纯化而得，该菌种生产的发酵虫草菌粉自1989年获得卫生部批准为一类原料药新药(文号:［89］卫药准字Z-17号)，在10多年的临床应用当中，其良好的临床效果以及可靠的安全性，深获国内外医药专家学者的认可。并于2001年3月23日被国家卫生部发文(卫法监发［2001］84号文)，被确认为可用于保健食品的真菌名单。但其研究多为人类医学研究，对家畜家禽的影响还未有报道，为此本试验将虫草菌粉添加到雏鸡饲料中，进而研究其对雏鸡免疫器官发育、细胞免疫和体液免疫功能3个方面的影响，为虫草菌粉应用于畜禽养殖提供理论依据。

1 材料与方法

1．1 材料

全价雏鸡鸡饲料，购自南昌正大集团;雏鸡(余干乌鸡)，购自江西省农业科学院畜牧兽医研究所;绵羊新鲜全血，采自本实验自养健康绵羊;虫草菌粉，由江西国药集团惠赠。Hank’s液、肝素、PHA、特级无菌犊牛血清等，均购自长城生物公司。

1．2 试验分组

将240羽10日龄健康雏鸡随机分为4组(表1)，每组60羽，NDV疫苗常规免疫，在饲料中添加不同剂量虫草菌粉，4个组均以相同南昌正大全价雏鸡饲料为基础日粮。NDV疫苗免疫程序:7日龄首免、21日龄二免;免疫途径为饮水免疫;疫苗为NDV II系弱毒冻干苗。

表1 试验分组与虫草菌粉用量Tab．1 Grouping and the amount of Cordyceps power

1．3 免疫功能评价指标测定

饲喂至第10、20、30天每组分别随机抽取20羽，先心脏采血供免疫功能检测，然后处死检测免疫器官。

1．3．1 对免疫器官发育的影响 将处死的雏鸡剖解摘取中枢免疫器官法氏囊和外周免疫器官脾脏，去除筋膜和杂质，于电子天平称取其质量并记录结果。

1．3．2 对细胞免疫功能的影响 E-玫瑰花环试验参照文献［1］方法进行操作。先分离淋巴细胞;再采绵羊血，用肝素抗凝，用Hank’s液制备1%SRBC悬液;最后进行E-玫瑰花环试验，计算花环率。

淋巴细胞转化试验采用PHA形态学检查法，参照文献［1］方法进行操作。

1．3．3 对体液免疫功能的影响(鸡新城疫抗体检测) 对鸡NDV免疫抗体检测，采用血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)。方法参照《新城疫微量红细胞凝集抑制试验操作规程》(SN/T 1109-2002)。

1．4 数据处理

采用SPSS 17．0软件进行数据处理，单因素方差分析比较2组间差异。所有数值均以“平均值±标准差”表示。

2 结果与分析

2．1 对中枢免疫器官法氏囊影响结果

结果见表2，可知在饲喂20 d时，高剂量组与空白对照组法氏囊质量差异显著(P＜0．05)，饲喂30 d时，中、高剂量组与空白对照组法氏囊质量差异显著(P＜0．05)，且高剂量组与空白对照组差异极显著(P＜0．01)。

表2 雏鸡饲喂虫草菌粉10、20、30 d，各组法氏囊质量Tab．2 The weight of the bursa in each group after feeding Cordyceps for 10，20 or 30 days

2．2 对外周免疫器官脾脏影响

结果见表3，可知在饲喂20 d时，中、高剂量组与空白对照组脾脏质量差异显著(P＜0．05)，且高剂量组与空白对照组差异极显著(P＜0．01)，饲喂30 d时，试验组与对照组相比脾脏质量略有增加。

表3 雏鸡饲喂虫草菌粉10、20、30 d，各组脾脏质量Tab．3 The weight of spleen in each group after feeding Cordyceps for 10，20 or 30 days

可见在饲喂20 d后，试验组与空白对照组对相比可明显增加中枢免疫器官法氏囊与外周免疫器官脾脏的质量，而且该作用与剂量相关，随剂量增加，促进免疫器官发育作用越强。

2．3 细胞免疫功能检测

结果见表4，可知在饲喂10 d时，低剂量组E-玫瑰花环率低于空白对照组，饲喂20 d时，中剂量组、高剂量组与空白对照组差异显著(P＜0．05);由表5可知，在饲喂10 d时，中剂量组、高剂量组与空白对照组淋巴细胞转化率差异极显著(P＜0．01)，当饲喂20、30 d时，低、中、高剂量组与空白对照组差异皆显著(P＜0．05)。结果表明，饲喂10 d时，低剂量组E-玫瑰花环阳性率偏低，而饲喂20 d时，中、高剂量虫草菌粉可提高阳性E-玫瑰花环率，增强T细胞活性;在饲喂10 d时，中、高剂量虫草菌粉对淋巴细胞转化作用已经表现出来，饲喂20 d后，低、中、高3个剂量皆能够显著提高淋巴细胞转化率，增强细胞的免疫水平。

表4 虫草菌粉对E-玫瑰花环率的影响Tab．4 The effect of Cordyceps power on E-rosette rates

表5 虫草菌粉对淋巴细胞转化率的影响Tab．5 The effect of Cordyceps power on lym phocyte transformation rates

2．4 体液免疫功能检测

结果由表6可知，在饲喂虫草菌粉20 d时，中、高剂量组与空白对照组NDV抗体水平差异显著(P＜0．05)，且高剂量组与空白对照组NDV抗体水平差异极显著(P＜0．01);在饲喂虫草菌粉30 d时，虽然试验组与对照组无差异，但同时可见试验组与对照组NDV抗体水平均已经达最高水平。结果说明，饲喂虫草菌粉可以显著促进抗体产生，在20 d时中剂量组比对照组抗体水平提高1∶22．1，高剂量组比对照组提高1∶22．53，能使特异性抗体提前达到高水平。

表6 雏鸡饲喂虫草菌粉10、20、30 d，各组NDV抗体检测结果Tab．6 NDV antibody test results in each group after feeding Cordyceps power for 10，20 or 30 days

3 小结与讨论

(1)本试验发现虫草菌粉能够加快雏鸡免疫器官的发育，提高T淋巴细胞活性，具有增强雏鸡细胞免疫功能;在饲喂虫草菌粉20 d时中剂量组比对照组抗体水平提高1∶22．1，高剂量组比对照组提高1∶22．53，使特异性抗体提前达到高水平，说明虫草菌粉亦可以提高体液免疫水平。

(2)法氏囊和脾脏的质量可用于评价雏鸡的免疫状况，本试验证实了虫草菌粉有促进动物免疫器官的发育;活性E-玫瑰花环试验，能敏感地反映机体的免疫水平和动态的变化［2］。淋巴细胞转化试验可以反映机体免疫状态，是细胞免疫的一个测定指标［3］，本试验证实了虫草菌粉可以提高T细胞的免疫活性。说明虫草菌粉具有促进机体免疫力的功能，这与以往的报道相符［4-16］。

(3)NDV弱毒疫苗免疫雏鸡，雏鸡产生相应的抗体，将虫草菌粉加入饲料饲喂，发现试验组明显加快了NDV疫苗抗体的产生，在20 d即达到高水平，说明虫草菌粉可以促进抗体的产生。这与林继和［6］2011年的报道类似。

本次试验结果说明，中剂量虫草菌粉可发挥较好的免疫增强作用。据悉，市场上虫草菌粉价格约为196元/kg，按照肉杂鸡日采食量等于日龄×2．2 g，日粮中添加虫草菌粉0．6 g/kg，对雏鸡1～30日龄饲喂30 d计算，一只鸡大约增加饲养成本0．12元，不影响虫草菌粉在实践中的推广，在畜牧业中有很好的应用前景。

［1］何昭阳，胡桂学，王春风．动物免疫学试验技术［M］．长春:吉林科学技术出版社，2002．

［2］谷新利，陈韩英，李炳奇，等．中药方剂中提取的多糖对家兔免疫功能的影响［J］．畜牧与兽医，2005，37(12):17-20．

［3］刘彦威，刘娜，刘利强．冬虫夏草有效成分的研究进展［J］．动物医学进展，2004，25(3):51-53．

［4］Yu L，Zhang B，Ruan，et al．Effects of different components of C sinensis polysaccharide on immune function［J］．Journal of Zhejiang College of Traditional Chinese Medicine，2004，28(1):49-50．

［5］付海田，邓超，王敏，等．虫草发酵多糖的提取，结构分析及生物活性研究［J］．天然产物研究与开发，2014(1):111-116．

［6］林继和，姚中磊，王世杰，等．复方中药对免疫新城疫和禽流感疫苗三黄鸡抗体产生的影响［J］．中国家禽，2011，33(9):64-65．

［7］刘勇．虫草菌粉对日本沼虾免疫功能的影响［J］．河北渔业，2007(1):11-13．

［8］马玲，刘春光，姚小曼．虫草多糖对小鼠免疫功能的影响［J］．卫生毒理学杂志，1995，9(3):162-176．

［9］陈爱葵，龙晓凤，张树地，等．冬虫夏草精粉对小白鼠免疫功能的影响研究［J］．中医药学刊，2004(9):1756-1757．

［10］彭日煌．虫草菌粉活性物质与营养成分研究［D］．南昌:南昌大学，2005．

［11］李星艳，谷新利．中药多糖免疫增强剂的研究概况［J］．畜牧兽医杂志，2008，27(5):40-42．

［12］吴友良，贡成良．关于冬虫夏草对乙型肝炎疗效及免疫性肝损伤保护作用的研究［J］．常熟高专学报，2002，16(4):39-42．

［13］陈晓燕．冬虫夏草的药理与临床研究进展［J］．中医药导报，2009，15(2):91-93．

［14］YalinWu．Effectof various extracts and a polysaccharide from the ediblemycelia of Cordyceps sinensis on cellular and humoral immune response against Ovalbumin inmice［J］．Phytotherapy Research，2006，20(8):646-652．

［15］Ng T B，Wang H X．Pharmacological actions of Cordyceps，a prized folk medicine［J］．Journal of Pharmacy and Pharmacology，2005，57(12):1509-1519．

［16］吴垠．虫草菌粉有效部位的主要药效学及作用机制研究［D］．杭州:浙江中医药大学，2006．