老年高脂血症患者SCAP基因单核苷酸多态性的研究

王伟 罗蓉 李延武 李卓成

老年高脂血症患者SCAP基因单核苷酸多态性的研究

王伟 罗蓉 李延武 李卓成

目的 研究老年人群中甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)单核苷酸多态性, 分析基因型及血脂水平与高脂血症之间的关联性。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的分析方法, 检测66例老年高脂血症患者(高脂血症组)和100例老年体检健康者(对照组)的SCAP基因Ile796Val的等位基因频率。结果 高脂血症组、对照组等位基因A的频率分别为0.48、0.32,等位基因G的频率分别为0.52、0.68。高脂血症组与对照组之间的基因型和等位基因的频率差异有统计学意义(P＜0.05)。结论 SCAP基因单核苷酸多态性导致脂质代谢紊乱, 等位基因A可能是高脂血症的一个危险因子。

甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白；单核苷酸多态性；高脂血症

1 资料与方法

1.1 一般资料 老年对照组：本院老年体检健康者随机选取100例, 男47例, 女53例, 年龄61～78岁, 临床检查和实验室检查指标均正常。高脂血症组：本院住院患者66例,男35例, 女31例, 年龄64～82岁, 胆固醇＞6.0 mmol/L, 甘油三酯(TG)＞2.0 mmol/L；以上两组均排除肝脏、肾脏、内分泌等影响血脂代谢的疾病。两组年龄、性别等一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 方法 受检者空腹静脉采血2份, 1份血清检测血浆脂质及载脂蛋白的水平, 另一份EDTA抗凝, 采用Fermentas DNA抽提试剂盒, 按说明书操作提取外周血基因组DNA。利用软件Primer 5.0设计引物以扩增SCAP基因。PCR扩增产物用MslI内切酶进行酶切。PCR扩增产物和酶切产物均采用8%PAGE电泳, 然后用银染方法进行显色。

1.3 统计学方法 所有统计分析使用SPSS20.0统计学软件完成。组间基因型、等位基因频率的比较采用χ2检验；不同基因型及组间的血脂水平以均数±标准差( x-±s)表示,采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 基因多态性分析 SCAP基因16外显子单核苷酸多态性, 表现为796密码子的Ile/Val的氨基酸替换, 若该位点为ATC, 则存在MslI酶切位点(…CATCTGCGTG…), 经过MslI酶切后产生158bp和77bp两条片段；若该位点为GTC, 则不能被MslI酶切而为1条235bp片段。SCAP基因Ile796Val的AA基因型有158bp和77bp两条带；GG型仅1条235bp电泳带；AG型有235bp、158bp、77bp 3条带。

2.2 SCAP基因Ile796Val基因型及等位基因频率比较 本组中国广东地区人群中, SCAP基因型分布符合Hardy-winberg平衡, 均有群体代表性。高脂血症组和对照组等位基因A的频率分别为0.48、0.32, 等位基因G的频率分别为0.52、0.68。高脂血症组和对照组之间的基因型和等位基因的频率差异有统计学意义(P＜0.05), 且高脂血症组等位基因A的频率显著性升高(P＜0.05)。见表1。

表1 SCAP基因Ile796Val(A/G)基因型频率和等位基因频率

2.3 SCAP基因Ile796Val多态性与血浆脂质及载脂蛋白的关系 高脂血症组TC［AA(6.87±0.86)mmol/L、AG(6.27±1.52) mmol/L、GG(5.31±1.29)mmol/L］、LDL-C［AA(3.77±0.75)mmol/L、AG(3.90±1.16)mmol/L、GG(3.86±0.98)mmol/L］水平均高于正常对照组TC［AA(3.80±0.21)mmol/L、AG(4.42±0.94)mmol/ L、GG(4.25±0.82)mmol/L］、LDL-C［AA(2.05±1.88)mmol/L、AG(2.48±0.07)mmol/L、GG(2.57±0.73)mmol/L］(P＜0.05), 而其他血脂指标差异无统计学意义(P＞0.05)。高脂血症患者中AA基因型与GG基因型的TC和LDL-C水平差异有统计学意义(P＜0.05)。

3 讨论

Wang等［3］1994年报道, 在胆固醇反馈调节系统中的膜结合转录因子SREBP起重要的作用, 控制着胆固醇合成和血浆脂质蛋白中受体介导的摄入过程。SCAP是SREBP的重要调节因子, 通过刺激转录因子SREBP的裂解, 调控着SREBPs蛋白的水解反应。由SCAP激活的水解作用使SREBP的活性片段从内质网上释放出来, 进入细胞核后发挥转录作用, 从而控制着动物内的脂质代谢合成。

近年来关于SCAP的结构和功能已引起国内外学者的注意［1-4］, 但是国内对SCAP基因单核苷酸多态性及点突变鲜有研究。本实验采用PCR-RFLP的方法, 检测了100例老年体检健康者和66例高脂血症患者, 检出等位基因A频率分别为0.32、0.48, 等位基因G频率分别为0.68、0.52, 高脂血症组SCAP基因单核苷酸多态性AA、AG、GG基因型和等位基因A/G的频率与对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05)。在高脂血症组中AA基因型与GG基因型TC和LDL-C水平差异有统计学意义(P＜0.05), 并且AA基因型的TC水平显著性升高, 这说明该SNP与胆固醇水平有关联, 并与高脂血症密切相关。Hua等［1］研究发现, SCAP基因在胆固醇敏感区域的点突变(如D443N和Y298C), 将导致甾醇抑制作用的耐受,血浆高胆固醇将会在动脉血管中堆积, 最终导致动脉粥样硬化的发生。这说明SCAP基因变异是胆固醇代谢调节的内在遗传机制, 同时也是引起血脂水平和组织中脂质代谢紊乱的因素之一。本研究初步证实了SCAP基因Ile796Val多态性与高脂血症密切相关, 其中等位基因A具有较高的血浆胆固醇水平, 由此推断等位基因A可能是高脂血症的一个危险因子。但是对照组不同基因型之间血浆血脂水平差异无统计学意义(P＞0.05), 这可能与研究标本量不大有关, 在正常人群中该SNP与血脂的关系有待临床大样本研究的进一步证实。

综上所述, SCAP基因Ile796Val多态性对于高脂血症的遗传学研究具有重要意义, SCAP对胆固醇的具体调节机制还有待于进一步深入研究。

［1］ Hua X, Nohturfft A, Goldstein JL, et al.Sterol resistance in CHO cells traced to point mutation in SREBP cleavage-activating protein.Cell, 1996, 87(3):415-426.

［2］ Iwaki K, Nakajima T, Ota N, et al.A commom Ile796Val polymorphism of the human SREBP cleavage-activating protein (SCAP) gene.J Hum Genet, 1999, 44(6):421-422.

［3］ Wang XD, Sato R, Brown MS, et al.SREBP-1, A membrancebound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis.Cell, 1994, 77(1):53-62.

［4］ Arazi SS, Genvigir FD, W illrich MA, et al.Atorvastatin effects on SREBF1a and SCAP gene expression in mononuclear cells and its relation with lowering-lipids response.Clin Chim Acta, 2008, 393(2):119-124.

Research of single nucleotide polymorphism in SCAP gene of senile hyperlipidaem ia patients

WANG Wei, LUO Rong, LI Yan-wu, et al.Department of Inspection, Shenzhen City the Second People’s Hospital, Shenzhen 518035, China

Ob jective To research single nucleotide polymorphism in SREBP cleavage-activating protein (SCAP) gene of senile hyperlipidaemia patients, and to analyze correlation in gene type, blood lipid level, and hyperlipidaemia.M ethods Polymerase chain reaction-restricted fragment length polymorphisms (PCR-RFLP) was applied to detect allele frequency of Ile796Val in SCAP gene of 66 senile hyperlipidaem ia patients (hyperlipidaem ia group) and 100 healthy old people (control group).Results Frequency of allele A in hyperlipidaemia group and control group were respectively 0.48 and 0.32, and that of allele C were 0.52 and 0.68.There were statistical significant differences of gene type and allele frequency between hyperlipidaemia group and control group (P＜0.05).Conclusion Single nucleotide polymorphism of SCAP gene will cause lipid metabolism disorders, and allele A may be one of the high risk factors of hyperlipidaemia.

SREBP cleavage-activating protein; Single nucleotide polymorphism; Hyperlipidaemia高脂血症在老年人群中尤为常见, 以血浆胆固醇异常改变为特征的脂代谢紊乱是动脉硬化性心血管疾病的重要致病因素之一。甾醇调节因子结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein, SCAP)是动物细胞内调节胆固醇合成和摄取的重要调节因子。SCAP基因研究最早见于1996年报道［1］, 众多研究表明人类SCAP基因遗传变异将会导致血浆脂质代谢改变和组织中脂质代谢紊乱［2-4］。为了研究老年人群SCAP基因多态性与血浆血脂及高脂血症的关系, 作者应用PCR-RFLP方法检测SCAP基因Ile796Val多态性。选取60岁以上老年人166例, 其中66例高脂血症者和100例体检健康者, 探讨老年人群SCAP基因单核苷酸多态性及与高脂血症之间的关系。现报告如下。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.15.026

2015-01-12］

深圳市科创委(项目编号：JCYJ20130401104112197)

518035 深圳市第二人民医院检验科

李卓成