薯莨正丁醇部位洗脱液对人型支原体培养基pH值的影响

朱蕾 钟超

薯莨正丁醇部位洗脱液对人型支原体培养基pH值的影响

朱蕾 钟超

目的 探讨薯莨抗人型支原体的作用机制。方法 人型支原体液体培养基中加入25%乙醇洗脱流分的薯莨正丁醇部位作为实验组, 加入0.9% NaCl溶液作为对照组, 检测两组菌落数及培养基pH值。结果 加入实验组菌落数及培养基pH值均低于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。结论 薯莨提取物可能通过降低培养基的pH值抑制人型支原体。

薯莨正丁醇部位洗脱液；人型支原体培养基；pH值

泌尿生殖道支原体感染是妇科常见病, 应用抗生素是主要的治疗手段, 但泌尿生殖道支原体耐药性也日益明显。本课题组的早期研究发现薯莨具有抗泌尿道人型支原体的作用［1］, 但其机制尚不清楚, 现将本实验结果报告如下, 为研究薯莨体外抗抗泌尿道人型支原体的作用机制提供理论依据。

1 实验材料

1.1 培养基的配制 人型支原体的液体培养基参照吴移谋等［2］的方法。20% 新生小牛血清、10%新鲜酵母菌液、0.002%酚红、1∶1牛心组织消化液、含有青霉素20000 U/L。使用0.1%的精氨酸溶液将液体培养基的pH值调定到6.5［3］。

1.2 原株的获取 临床患者阴道分泌物的标本培养得到30株, 鉴定传代培养3次后, 于-70℃保存备用。在常温条件下融化前期制备的原株菌液, 以1∶100稀释液体培养基, 37℃, 24～48 h培养后达到106颜色变化单位/0.1 ml作为实验用的接种物。

1.3 原药处理 薯莨正丁醇部位洗脱液采用前期实验的方法取得。

2 实验方法

2.1 实验组选用固体培养基, 37℃恒温箱复温10 min, 培养基中央滴入正丁醇部位25%洗脱部位的1% DMSO溶液(1%二甲基亚砜无抗人型支原体的作用)50 μl, 倒置10 min, 无菌接种环在药液区内均匀接种原株, CO2培养箱培养；选择滴入同剂量的0.9%的NaCl溶液的培养基做为对照组。两组培养基培养96 h后, 取出培养基, 倒置, 在10倍物镜显微镜下,观察视野中煎蛋样菌落, 顺时针方向取5个视野, 记录菌落数［4］。0.1 g/ml阿奇霉素溶液作为阳性对照。

2.2 pH值的测定 将实验组和对照组的培养基溶液经蒸馏水稀释至0.2 g/ml用Bechman ∮61型pH计进行检测。

2.3 统计学方法 采用SPSS15.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验；计数资料采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 经正丁醇部位25%洗脱部位处理的培养基的菌落数明显低于同剂量的0.9%的NaCl溶液处理培养基的菌落数, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

3.2 pH值测定 薯莨正丁醇部位洗脱液组的pH值与阿奇霉素组相近, 且其低于同剂量0.9%的NaCl溶液培养基的pH值, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 三组培养基pH值测定结果( x-±s, n=30)

4 讨论

人型支原体是女性泌尿生殖道感染的常见病原之一, 可引起盆腔炎、急性肾盂肾炎等多种生殖道疾病和创伤感染、支原体血症等生殖道外感染, 目前治疗人型支原体的药物均已显示不同程度的耐药性, 例如红霉素、链霉素、卡那霉素、氯霉素等常用抗生素。中药薯莨对人型支原体的抑制作用本课题在之前已有报道, 但具体作用机制不清。

作者在前期实验中发现薯莨的正丁醇部位经D101大孔树脂梯度洗脱后, 其25%乙醇洗脱流分在体外条件下具有一定的抗人型支原体生长的作用。如果标本中有较高比例的大肠埃希氏菌、变形杆菌、假单胞菌、葡萄球菌等产脲酶细菌,而不能被抑菌剂抑制, 它们就能迅速生长繁殖, 在生长过程中分解尿素, 产氨和二氧化碳, 使液体pH值升高, 液体培养基就会变红且混浊［5］说明支原体对生长环境的pH值非常敏感, 培养过程中产生的酸性物质加速其死亡。本实验发现滴入薯莨正丁醇部位洗脱液培养基的pH值与对照组相比有明显降低, 显示酸性, 类似于女性阴道的正常酸性环境, 而酸性环境可能是抑制支原体生长的因素之一。

临床上治疗人型支原体感染多应用抗生素如阿奇霉素等。但是抗生素引起的病原体变异和副作用也是影响治疗效果的难题［6］, 本实验结果为研究中药薯莨的药理作用, 尤其是抗人型支原体的机制提供了重要参考依据。

［1］ 钟超, 朱蕾.薯莨提取物体外抗人型支原体的作用.中国现代医生, 2013, 51(26):102-103.

［2］ 吴移谋, 余敏君, 宋颖, 等.泌尿生殖道支原体感染的实验室诊断研究.中华医学检验杂志, 1991, 14(3):157-159.

［3］ 吴移谋, 尹卫国, 余敏君, 等.六种抗菌药物体外抗解脲脲原体与人型支原体的抗菌作用.中华皮肤科杂志, 1994, 27(3): 134-135.

［4］ 傅琳玲, 曹双林, 符梅, 等.黄连等单味中药对人型支原体的药敏试验.中华皮肤科杂志, 2007, 40(11):700.

［5］ 卢志勇, 杨丽霞.女性泌尿生殖道支原体感染与耐药性分析.检验医学与临床, 2011, 8(2):2.

［6］ 陈波, 黄海樱.61例解脲脲原体液体培养基变红及混浊原因探讨.中国卫生检验杂志, 2001, 10(5):587-588.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.09.211

2014-12-22］

518106 深圳市光明新区人民医院妇科(朱蕾), 药剂科(钟超)