自身抗体检测对自身免疫性肝病的临床应用价值分析

潘丽艳 丁旭 潘丽 苏姝 赵宏岩

自身抗体检测对自身免疫性肝病的临床应用价值分析

潘丽艳 丁旭 潘丽 苏姝 赵宏岩

目的 探讨自身抗体检测在自身免疫性肝病(ALD)诊断中的价值。方法 对400例不明原因肝功能反复异常的患者应用间接免疫荧光法检测抗核抗体(ANA)、抗线粒体抗体(AMA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗纤维肌动蛋白抗体(F-actin)、抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA), 应用欧蒙印迹法检测抗线粒体抗体M2型(AMA-M2)、抗M2-3E(BPO)、抗Ro52、抗Sp100、抗gp210、抗肝肾微粒体抗体(LKM-1)、抗肝细胞溶质抗原1(LC-1)、抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/LP)、抗早幼粒细胞白血病抗体(PML), 观察检测结果。结.400例患者自身抗体阳性55例, 诊断自身免疫性肝炎(AIH)10例, 阳性率2.50%；诊断原发性胆汁性肝硬化(PBC)18例, 阳性率4.50%。AIH患者检出的自身抗体有ANA、抗SMA、抗F-actin、抗Ro52、抗LKM-1、抗LC-1、抗SLA/LP, 其中ANA、抗SMA抗体阳性率最高, 其次为抗F-actin；PBC患者检出的自身抗体有ANA、AMA、AMA-M2、抗M2-3E、抗Sp100、抗Ro52、抗gp210、抗LKM-1, 其中以ANA、AMA、抗M2-3E阳性率最高, 其次为AMA-M2。结论 对于不明原因肝功能反复异常的患者, 主要以检测ANA为主, 对于怀疑AIH的患者检测SMA与F-actin, 如果为阴性, 应进一步联合检测LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro52, 对于怀疑PBC的患者检测AMA、AMA-M2、M2-3E, 如为阴性, 应进一步联合检测Sp100、gp210、LKM-1、Ro52。多种自身抗体的联合检测有助于ALD的早期诊断。

自身抗体；自身免疫性肝病；自身免疫性肝炎；原发性胆汁性肝硬化

自身免疫性肝病(autoimmune liver diseases, ALD)是一组原因未明、免疫介导的慢性肝脏疾病, 包括自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis, AIH)、原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis, PBC)和原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis, PSC)。ALD临床表现缺乏特异性, 其病因和发病机制尚未完全阐明, 是导致肝衰竭的重要病因［1］。如能早期发现、明确诊断、正确分类并给予有效地治疗, 对于控制病情的进展, 改善患者的生活质量有极大的帮助。ALD患者的血清中常会出现一些特征性的自身抗体, 自身抗体的检查对于与其他各种肝炎鉴别诊断是极为重要的。本研究对400例不明原因反复肝功能异常的患者进行相关自身抗体的检测, 以评价不同抗体对ALD诊断的应用价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2012年1月～2014年6月本院不明原因反复肝功能异常的患者400例, 其中28例诊断为ALD。

1.2 试剂 自身抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法), 基质为Hep-2、猴肝、大鼠肾、大鼠胃；抗纤维肌动蛋白抗体检测试剂盒, 基质为VSM47；抗中性粒细胞胞浆抗体检测试剂盒(间接免疫荧光法), 基质为Hep-2、猴肝、乙醇固定的中性粒细胞、甲醛固定的中性粒细胞；自身免疫性肝病检测试剂盒(欧蒙印迹法)。以上试剂均为德国欧蒙公司生产, 在有效期内使用。

1.3 主要仪器 奥林巴斯荧光显微镜BH-2, TS-8型转移脱色摇床。

1.4 检测项目与方法 应用间接免疫荧光法检测ANA、AMA、SMA、F-actin、ANCA, 应用欧蒙印迹法检测AMAM2、抗M2-3E(BPO)、抗Ro52、抗Sp100、抗gp210、LKM-1、LC-1、SLA/LP、PML。以上检测均严格按照说明书操作。荧光法以出现特征性黄绿色荧光判断为阳性, 印迹法以出现相应条带判断为阳性。

1.5 统计学方法 采用SPSS12.0统计学软件对研究数据进行统计分析。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2..400例肝功能反复异常的患者中, 其中至少一项抗体阳性的例数为55例, 总阳性率13.75%, ANA阳性40例, 阳性率10.00%；抗AMA抗体阳性20例, 阳性率5.00%；抗SMA抗体阳性12例, 阳性率3.00%；抗F-actin阳性5例, 阳性率1.25%；ANCA阳性3例, 阳性率0.75%；AMA-M2阳性16例, 阳性率4.00%；抗M2-3E阳性18例, 阳性率4.50%；抗Ro52阳性11例, 阳性率2.75%；抗Sp100阳性4例, 阳性率1.00%；抗gp210阳性2例, 抗LKM-1阳性3例, 抗LC-1阳性1例, 抗SLA/LP阳性1例, 抗PML阳性1例。

2..400例肝功能反复异常的患者中, 被诊断为ALD的患者28例, 阳性检出率为7.00%, 其中被诊断为AIH的患者10例, 阳性检出率为2.50%；被诊断为PBC的患者18例, 阳性检出率4.50%。未检出PSC患者。AIH患者检出的自身抗体有ANA、抗SMA、抗F-actin、抗Ro52、抗LKM-1、抗LC-1、抗SLA/LP, 其中ANA、抗SMA抗体阳性率最高, 其次为抗F-actin；PBC患者检出的自身抗体有ANA、AMA、AMA-M2、抗M2-3E、抗Sp100、抗Ro52、抗gp210、抗LKM-1, 其中以ANA、AMA、抗M2-3E阳性率最高, 其次为AMA-M2。见表1。

表 AIH、PBC、非ALD患者各自身抗体检出情况［n(%)］

3 讨论

近年来, 自身抗体的检测越来越受到临床医生和实验室人员的重视, 过去曾认为自身免疫性肝病多发于欧美白种人,中国人患病率较低, 而近年来该病呈上升趋势, 主要是由于实验室对自身免疫性肝病抗体谱检测开展的普及以及临床医生对本病认识逐渐提高的结果［2］。抗核抗体是以细胞核及胞浆成分为靶抗原的总称, ANA是最先被发现与自身免疫性肝病相关的自身抗体, 本研究中, AIH和PBC患者ANA的检出率为60.00%与100.00%, 与非ALD患者比较差异有统计学意义(P＜0.05), 但是因为ANA可出现于各种自身免疫性疾病, 所以它不具有诊断特异性, 但在自身免疫性肝病中抗体滴度较高, 高滴度的ANA对自身免疫性肝病具有诊断意义。SMA无器官及种属特异性, 它所针对的抗原是胞浆骨架蛋白,如肌动蛋白、肌钙蛋白、原肌球蛋白和纤维肌动蛋白。最具诊断价值的靶抗原是F-actin, 它与AIH关系密切, 为AIH特异性自身抗体［3,4］。

在本研究中, AIH患者SMA的检出率为60.00%, 在非ALD组中, 也出现了6例阳性, 但阳性率仅为1.61%, 两者差异有统计学意义(P＜0.05), F-actin的检出率为50.00%, 但在非ALD组中未检出该抗体, 所以F-actin的检出对于AIH的诊断更具有特异性。另外在AIH患者中还检出了LKM-1、LC-1、SLA/LP, 虽然阳性率逊于SMA与F-actin, 但是特异性强, 与非ALD组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

AMA在许多疾病中均可检测到, 它分为9型, M1～M9,其中2、4、8、9对诊断PBC的价值较大。本研究中PBC组AMA的阳性率100.00%, AMA-M2阳性率88.89%, M2-3E阳性率为100.00%, 与非ALD组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而且非ALD组未检出AMA-M2与M2-3E, 由此可见AMAM2与M2-3E更具有诊断特异性。这与文献报道类似［5］。另外在PBC患者中还检出了Sp100、gp210、LKM-1, 阳性率低于AMA-M2与M2-3E, 但是特异性强, 与非ALD组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

抗Ro52抗体主要见于系统性红斑狼疮(SLE)、原发性干燥综合征(pSS)和硬皮病等自身免疫病［6］, 对ALD的意义研究不多, 本研究显示在AIH与PBC患者中阳性率分别为30.00%与22.22%, 与非ALD组比较差异有统计学意义(P＜0.05), 这与赵丹彤等［7］的报道类似。虽然抗Ro52抗体缺乏疾病特异性, 但是抗Ro52抗体阳性的患者应注意ALD及其他自身免疫性疾病相关指标的检测。

ANCA主要与血管炎相关, 有报道PSC患者ANCA阳性率较高, 在本研究中作者未检出PSC患者, ANCA也仅有3例阳性, 且出现于非ALD组。这可能与PSC患者较少、研究数量不够多有关。

综上所述, 自身抗体检测对ALD的诊断有重要意义。对于不明原因肝功能反复异常的患者, 主要以检测ANA为主,对于怀疑AIH的患者检测SMA与F-actin, 如果为阴性, 应进一步联合检测LKM-1、LC-1、SLA/LP、Ro52, 对于怀疑PBC的患者检测AMA、AMA-M2、M2-3E, 如为阴性, 应进一步联合检测Sp100、gp210、LKM-1、Ro52。多种自身抗体的联合检测有助于ALD的早期诊断与治疗。

［1］ 郭建华, 谷鸿彦.自身免疫性肝病的研究进展.中国医药导报.2011.8(33):13-14.

［2］ 李永哲.自身抗体检测技术临床推广应用和质量保证工作中应重视的问题.中华检验医学杂志.2006.29(9):769.

［3］ Berg PA, Klein R. Autoimmune hepatitis and overlap syndrome: diagnosis. Praxis.2002.91(34):1339-1346.

［4］ 张利方.自身免疫性肝病相关自身抗体研究进展.微循环学杂志.2009.19(2):55-57.

［5］ 杜慧慧, 李青梅, 周希祺, 等.多种自身抗体联合检测在原发性胆汁性肝硬化中的诊断价值.中国肝脏病杂志.2013.5(1).19-23.

［6］ Peene I, Meheus L, Veys EM, et al. Diagnostic associations in a large and consecutively identified population positive for anti-SSA and/or anti-SSB: the range of associated diseases differs according to the detailed serotype. Ann Rheum Dis.2002.61(12):1090-1094.

［7］ 赵丹彤, 闫惠平, 檀玉芬, 等.抗Ro-52抗体在自身免疫性肝病中的检测.中华微生物学和免疫学杂志.2009.29(7):656-659.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.35.018

2015-07-27］

一汽集团公司科研课题项目(项目编号：ky2011-28)

130011 吉林大学第四医院检验科