紫外线分光光度法测定新疆红花中总黄酮含量

邢晓轲，黄 斐

(许昌职业技术学院，河南 许昌 461000)



紫外线分光光度法测定新疆红花中总黄酮含量

邢晓轲，黄 斐

(许昌职业技术学院，河南 许昌 461000)

利用紫外线分光光度法测定新疆红花的总黄酮含量，通过实验得到：新疆B地红花当中总黄酮含量为1.76%，新疆C地红花当中总黄酮含量为1.22%。新疆A地红花总黄酮含量为1.08%。实验结果表明新疆B地的黄酮含量最高。

新疆红花；总黄酮含量；紫外线分光光度法

红花(Carthamus tinctorius)为菊科植物，一年生草本植物干燥的管状花，是祖国传统医学的活血化瘀的良药，也是世界卫生组织鼓励使用的药食兼用的天然色素之一，现已用于医药、食品、保健品，人工染料等行业。当前，在红花栽培面积上，印度居于首位，美国、墨西哥以及中国次之[1]。目前，红花的主要栽培品种为油用品种，在国内外得到了广泛的栽培[2]。油用红花是优质油脂的来源之一，主要用于食品加工以及烹调等。除此以外，红花的花绒能够提取出天然色素,红花天然色素能够作为食品添加剂、人工染料以及保健品和美容产品等[3]。当前我国栽培红花已经有2000年，我国红花栽培上除了用于提炼油脂以及人工色素以外，更重要的是作为中药材入药。在2005版的药典中对红花的功能进行了这样的描述：活血、散瘀。用于痛经、经闭、疮疡肿痛、跌扑损伤。现代临床和药理作用表明红花具有对心血管方面的药理作用，并广泛应用于临床[4]。

黄酮是红花中中药的药用成分之一[5]。对红花总黄酮含量进行测定在很大程度上能够对红花质量状况进行判定。当前测定红花黄酮类含量的方法主要有这样几种：分光光度法、库仑滴定法、HPCE法以及HPLC法。紫外线分光光度计法测定红花中总黄酮的含量操作简单，稳定性与重复性较高，是一个很好的方法[6]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料

新疆红花(1号)采自新疆A地；新疆红花(2号)采自新疆B地；新疆红花(3号)采自新疆C地。

1.1.2 仪器

Shimadzu UV-2401紫外-可见分光光度计；X-5显微熔点测定仪北京泰克仪器有限公司生产；2F-C型三用紫外分析仪上海康乐光电仪器有限公司生产；电热恒温水浴锅北京市永光明医疗仪器厂生产；EYBLA旋转蒸发仪上海爱朗仪器有限公司生产；SHZ-D9(Ⅲ)循环水式真空泵巩义市予华仪器有限责任公司生产；电子分析天平AR1140；托盘天平。

芦丁对照品(中国生物制品鉴定所)；

石油醚、无水乙醇、亚硝酸钠、NaOH以及硝酸铝均为分析纯。水为蒸馏水。

1.2 方法

1.2.1 对照品和供试品溶液制备

1)对照品溶液制备

精密称取芦丁对照品5.00 mg，置50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解定容，配成浓度为 0.1mg/ml的对照品溶液。

2)供试品溶液制备

从 3个红花样品中各取 1 g，粉碎(40目)，得红花粗粉。在250 ml圆底烧瓶中加入经称量的 1.00g的红花粉末 ，并标号 1，2，3。向装有红花样品的圆底烧瓶中加入60%乙醇溶液，加至瓶颈处。对溶液进行充分摇动，随后进行超声分离，时间为30min。超声分离处理后放在室温下进行冷却处理。待溶液冷却后用60%乙醇溶液定容到 100 ml的容量瓶当中，静置备用。

1.2.2 线性关系考察

精密移取芦丁对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分别置于10ml比色管中，加60%乙醇稀释至5.0ml。将5ml60%的乙醇溶液作为空白，并向其中加入0.3 ml5%NaNO3。对混合液进行充分摇匀，随后进行静置处理6分钟。静置处理结束后向其中加入0.3 ml的10%硝酸铝溶液。对混合液进行充分摇匀，最后进行静置处理6分钟。静置结束后向混合液中加入4ml的4%NaOH溶液。将混合液充分摇匀，随后静置处理12分钟。静置结束后，将波长设定为510 nm，对芦丁对照组进行吸光度的测定。利用Excel表对试验数据进行处理得到芦丁标准曲线，芦丁标准曲线数据如表1所示。

如图1所示，横坐标为芦丁浓度，纵坐标为吸光度值A。回归方程y = 12.16x - 0.0138, R2= 0.9977。

试验结果表明，在0.01-0.05mg/ml范围内，芦丁线性关系良好。

表1 芦丁标准曲线数据

图1 芦丁标准曲线图

1.2.3 精密度试验

以芦丁作为对照组。加入60%的乙醇，并进行稀释。稀释到5.0ml。向稀释后的芦丁乙醇混合液当中加5%的NaNO2溶液0.3 ml。将混合液充分摇匀。随后进行静置处理6 分钟。静置结束后加入10%的AlNO3溶液0.3 ml。将混合液进行充分的摇匀，随后静置处理6 分钟。静置结束后加入4%的NaOH溶液4.0 ml以及60%的乙醇溶液0.4 ml。将混合液进行充分摇匀，随后静置处理12分钟。将波长设定为510 nm，对对照组溶液的吸光度进行测定。

对对照组溶液进行6次重复测定。对6次的测定结果进行相对标准偏差的计算。

计算结果为：RSD=0.2%。从表2实验数据中可以看到，本实验具有良好的精密度。

表2 精密度试验结果

1.2.4 稳定性试验

通过对来源于海晖药店的红花材料进行处理，得到其红花提取液。对红花提取液进行重复性测试。根据上文的方法进行测定。即在紫外线吸收波长最大处对其吸光度进行测定。选取海晖红花样品2ml,每隔10min测一次。从表3中可以看到，在波长为510nm时，对红花提取液当中总黄酮含量进行测定,试验数据表明吸光度具有一定的稳定性。试验结果表明该试验具有良好的重复性。

表3 稳定性实验结果

1.2.5 重复性试验

通过对来源于人民同泰药店的红花材料进行处理，得到其红花提取液。对红花提取液进行重复性测试。根据上文的方法进行测定。即在紫外线吸收波长最大处对其吸光度进行测定。从表4中可以看到，在波长为510nm时，对红花提取液当中总黄酮含量进行测定,试验数据表明吸光度具有一定的稳定性。试验结果表明该试验具有良好的重复性。

表4 稳定性实验结果

1.2.6 回收率试验

供样液为总黄酮提取物溶液,分别取供样液 110ml 、115ml 、2ml 、215ml 、3ml分置与比色管当中。加入芦丁对照液110ml。充分混合均匀。如表5进行回收率实验设计，按照1.2.4所述的方法进行测定。

表5 回收率实验设计表格

1.2.7 新疆产红花含量测定

取已制备好的3份样品溶液测定，以60%乙醇为空白溶液，在510nm处测定。每个样品进行3次重复试验。根据得到的标准曲线对新疆产红花当中所含的总黄酮进行测定。

2 结果与讨论

表6 红花总黄酮含量测定

表6中，红花总黄酮含量的结果表明：新疆A地红花总黄酮含量为1.08%,新疆B地红花总黄酮含量为1.76%,新疆C地红花总黄酮含量为1.22%。新疆三地中B地的红花总黄酮含量较高。

本研究中实验设计精密度良好，具有一定的稳定性，实验结果具有较高的可信度，为当前测定新疆红花总黄酮含量提供了简便且可行的办法。本文通过紫外分光光度法对新疆产红花当中的有效化学活性物质总黄酮进行了含量上的定量测定，对新疆红花质量做了评价，在红花质量评价上形成了一个简要的研究方向，同时也为红花质量标准的评定给出了一定的依据。此外，本文对新疆产红花品质情况做了具体的阐述，为新疆红花产业的进一步壮大发展提供了方向。

3 结论

当前我国栽培红花已经有2000年，我国红花栽培上除了用于提炼油脂以及人工色素以外，更重要的是作为中药材入药[7]。红花在市场上的价格较高，有不法分析为例获得更高的利益不惜制假，以次充好，轻者利用低等级红花冒充高等级红花，重者造假制假。这些非法行为不仅为红花市场带来了一定的干扰，而且严重影响了新疆红花的信誉度。通过切实有效简单的方法测定红花中有效成分含量以此判断市场上红花质量定将成为红花市场进行质量鉴定的重要手段。

[1] Obara H., J.Onodera. The structure of carthamin ,a component of safflower [J].ChemistryLetters,1979,(12).

[2]OnoderaJ.,H.Obara&M.Osone,etal.Thestructureofsaffomin-A,acomponentofsaffloweryellow[J].ChemistryLetters,1981,(16).

[3]OnoderaJ.,H.Obara&R.Hirose,etal.ThestructureofsaffominC,aconstituentofsafflower[J].ChemistryLetters, 1989,(9).

[4]MeselhyR．,S．Kadota&Y.Momose,etal.TwoNewQuinochalconeYellowPigmentsfromCarthamustinctoriusandCa2+AntagonisticActivityefTinctormine[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin, 1993, (10).

[5]KimM.N.,F.L.Scao-Bogaert&M.Paris.FlavonoidsfromCarthamustinctoriusFlowers[J].PlantaMedica,1992,(3).

[6] 董顺福，韩丽琴，赵文秀，等.中药红花总黄酮及微量元素含量的分析研究[J].光谱学与光谱分析，2008,(1).

[7] 陈雪英，李页瑞，陈勇，等.近红外光谱快速测定红花逆流提取过程中羟基红花黄色素A的含量[J].分析化学，2009，(10).

[编校：张芙蓉]

Determination of Total flavone Content in Xinjiang Safflower by Ultraviolet Spectrophotometry Method

XING Xiaoke, HUANG Fei

XuchangVocationalTechnicalCollege,XuchangHenan461000)

The paper determines the total content of flavonoids in Xinjiang safflower by UV-Vis. The test results run as follows: the total content of flavonoids in Xinjiang B safflower is1.76%.; the total content of flavonoids in Xinjiang C safflower is1.22%; the total content of flavonoids in Xinjiang A safflower is1.08%. Thus the conclusion can be made: the content of flavonoids in Xinjiang B is the highest.

Xinjiang safflower; the total content of flavonoids; UV-Vis

2015-07-15

邢晓轲(1980- )，女，河南禹州人，讲师，研究方向为分析化学。

R284

A

1671-9654(2015)03-056-04