正交试验法优选杧果叶中芒果苷的闪式提取工艺*

龚云麒，高小惠，李 莹，张 伟，杨兆祥

(昆明制药集团股份有限公司药物研究院，云南 昆明 650100)

正交试验法优选杧果叶中芒果苷的闪式提取工艺*

龚云麒，高小惠，李 莹，张 伟△，杨兆祥

(昆明制药集团股份有限公司药物研究院，云南 昆明 650100)

目的 研究杧果叶中芒果苷的闪式提取工艺。方法 以芒果苷的提取转移率为指标，采用正交试验设计，对闪式提取的影响因素进行考察。结果 闪式提取的最佳工艺是10倍70%乙醇、提取3次、每次提取8 min。结论 该方法操作简单，速度快，提取率高，可为杧果叶的开发利用提供参考。

杧果叶；芒果苷；闪式提取；正交试验

杧果叶为漆树科植物芒果(MangiferaindicaL.)的叶，具有止咳、化滞、止痒的功效，主治消渴，疳积，湿疹瘙痒，疣[1]。现代研究表明芒果叶提取物具有平喘、止咳、祛痰、抗炎、镇痛、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等作用[2]。芒果苷(mangiferin)又名芒果素，知母宁，为杧果叶中的有效成分。研究发现，芒果苷具有广泛的药理活性，包括抗糖尿病、抗肿瘤、抗氧化、抗炎、免疫调节、解热、镇咳、平喘等作用[3]。此外，还有研究表明芒果苷可显著降低高尿酸血症小鼠血清尿酸、肌酐和尿素氮水平，具有促进肾脏尿酸排泄和保护肾功能作用[4]。可见芒果苷具有广泛的开发前景。

芒果苷提取，传统的提取方法多为有机溶剂回流提取，存在提取时间长、能耗高等问题。近几年发展的闪式提取技术是依据组织破碎提取的原理，利用适当溶剂在闪式提取器里将物料快速破碎至适当粒度，同时具有高速搅拌、超强振动、负压渗滤等功能来达到提取目的，具有省时、节能、有利环保等优势[5]。本实验以芒果苷含量为指标成分，应用正交试验，对闪式提取杧果叶中有效成分的工艺条件进行优选，以期为提取杧果叶中芒果苷提供新的思路和数据支持。

1 仪器和试剂

JHBE-50T型闪式提取器(河南智晶科技有限公司)；步琦R-215型旋转蒸发仪(瑞士步琦公司)；赛多利斯BP-221S型电子天平(德国赛多利斯公司)；Aglient1260高效液相色谱系统(美国安捷伦公司)。干燥杧果叶，购自西双版纳。经中科院刘恩德博士鉴定为漆树科植物芒果Mangifera indica L.的干燥叶。乙腈(美国Fisher公司，色谱纯)；乙醇为分析纯，水为纯化水。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱为 PhenomenexGimin C18(150 mm × 4.6 mm，5μm)；流动相：以0.2%磷酸水溶液-甲醇(70∶30)为流动相；检测波长为240 nm；流速为1.0mL·min-1；柱温为30℃[6]。理论塔板数按芒果苷峰计算应不低于5000，结果见图1、图2。

图1 芒果苷对照品色谱图

图2 杧果叶药材色谱图

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芒果苷对照品适量，加80%甲醇溶解，并稀释制成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80%甲醇50 mL，称定重量，超声处理(功率250 W，频率35kHz)30 min，放冷，称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线的制备 精密称取芒果苷对照品适量，加80%甲醇制成0.354 mg·mL-1的浓溶液，分别精密量取浓溶液适量，用80%甲醇分别稀释成0.354、0.295、0.236、0.177、0.118、0.0886、0.0591、0.0295 mg·mL-1的对照品溶液，按照确定的色谱条件，分别取10 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以芒果苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线，的回归方程为y=31133x-12.824，r=0.9999。

2.5 精密度、稳定性、加样回收率实验 取芒果苷对照品溶液，重复进样6 次，记录芒果苷峰面积，其RSD为0.28%。结果表明仪器精密度良好。

分别精密吸取同一份供试品溶液于制备后0、1、2、4、6、8、10、12 h进样，测定芒果苷的峰面积，其RSD为0.24%，说明芒果苷对照品溶液在常温下12 h内稳定。

取已知芒果苷质量分数的药材9份，加入相应对照品溶液适量，制备供试品溶液，并按上述色谱条件进行测定，结果芒果苷平均回收率为102.4%，RSD%为2.55%，符合实验要求。

2.6 正交试验设计 参考文献及相关报道，选用乙醇作溶剂设计正交试验。选择提取次数、提取时间、溶剂浓度、溶剂倍数为考察因素，每个因素设计4 个水平，采用(L1644)进行正交试验。因素水平见表1。

表1 杧果叶闪式提取工艺研究正交试验因素水平表

2.7 试验方法和结果 分别称取已知芒果苷质量分数的杧果叶药材粗粉50 g，根据因素水平表进行闪式提取，提取器转速固定为2000r/min，提取后减压抽滤，取滤渣，置干燥箱中干燥，测定滤渣中芒果苷的含量后计算芒果苷的转移率。结果见表2。将数据进行方差分析，结果见表3。

表2 芒果苷闪式提取表

表3 方差分析表

F0.05(2，2)=19.00

由上述结果可看知，以提取转移率为指标，各因素影响的大小依次为A>D>C>B。通过方差分析可知，4个因素中，A具有显著性影响(P<0.05)，其他因素均不具有显著影响。经正交试验得出的最佳组合是A3B2C3D1，即10倍70%乙醇、提取3次每次提取8min。

2.8 验证试验 称取杧果叶药材粗粉3份，每份50 g，按A3B2C3D1提取条件进行3次平行操作，测定芒果苷含量，计算转移率，分别为97.86%，99.23%，98.49%，表明该方法稳定可行。

3 讨论

从试验结果来看，运用闪式提取法对杧果叶中芒果苷进行提取，有效成分几乎能够完全被提取，试验过程使用的溶剂全部为食用乙醇，无毒、廉价且易于回收。闪式提取与传统加热回流法相较，不需要加热，降低了能耗，也减小了资源的浪费，而且保护了有效成分不受温度的影响。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草[M].上海：上海科学技术出版社，1999：(5)80-81.

[2]胡彦君，刘燊，王定勇.芒果叶的化学成分研究[J].亚太传统医药，2010，6(3)：18-19.

[3]姚风艳，孙连娜.芒果苷药理作用及其结构修饰的研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(12)：248-252.

[4]胡庆华，张宪，王珏，等.芒果苷促进高尿酸血症小鼠尿酸排泄和肾功能改善以及调节相关肾脏转运体的作用[J].药学学报，2010，45(10)：1239-1246.

[5]刘延泽.植物组织破碎提取法及闪式提取器的创制与实践[J].中国天然药物，2007，5(6)：401-407.

Flash Extraction Process of Mangiferin in Mango Leaves by Orthogonal Test

GONG Yun-qi, GAO Xiao-hui, LI Ying, ZHANG Wei, YANG Zhao-xiang

(DrugInstitute,KunmingPharmaceuticalGroupCo.,Ltd.,Kunming650100,Yunnan)

Objective: To study the flash extraction process of mangiferin in mango leaves. Methods: By taking mangiferin extraction transfer rate as an index, orthogonal experiment was designed to investigate the influence factors of the flash extraction. Results: The optimal process of the flash extraction was 10 times of 70% ethanol, extracted three times and extracted 8 min each time. Conclusion: The method is simple and fast with high extraction rate and can provide a reference for the development and utilization of mango leaves.

mango leaves, mangiferin, flash extraction, orthogonal test

云南省科技计划(NO：2012BC008).

龚云麒(1981.8-)，男，汉族，云南安宁人，工程师，从事植物有效成分提取分离研究，E-mail：gongyun911@163.com

△通信作者:张伟，Tel：0871-68183902，E-mail：wzhangkm@sohu.com

R284.2

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1007-2349(2015)07-0061-03

2015-03-04)