秋石斛组织培养的研究

2015-04-29张娟

湖北林业科技 2015年3期

张娟

摘要：秋石斛为兰科植物，具有较高的观赏价值。本试验旨在建立秋石斛的工厂化育苗模式。采用秋石斛的高位芽为外植体，用75%酒精消毒1min后，再用0.1%HgCl2消毒20min，达到最佳的消毒效果。试验发现最佳的不定芽诱导培养基为MS+6-BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系数为4.5。最佳的生根壮苗培养基为MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。移栽成活率达到95%。

关键词：秋石斛;组织培养;不定芽诱导;生根培养

中图分类号：S723.1+32.6文献标识码：A文章编号：1004-3020（2015）03-0020-03

TissueCultureTechniqueofDendrobiumhybrida

ZhangJuan

（FujianResearchInstituteofForestryFuzhou350012）

Abstract：DendrobiumhybridabelongstofamilyOrchidaceaewithhighornamentalvalue.WeestablishedamassproductionmethodforD.hybrida.Takinghighpositionbudsastheexplants，theoptimaldisinfectiontreatmentwas75%alcoholfor1minuteandthen0.1%HgCl2for20minutes.TheresultsshowedtheoptimalmediumforproliferationofadventitiousbudwastheMSmediumsupplementedwith1mg·L16-BA，0.5mg·L1IBA，100mg·L1mashedpotatoand1mg·L-1activatedcharcoal（AC），providingaproliferationcoefficientof4.5.TheoptimalmediumforrootingwasMSmediumsupplementedwith0.8mg·L1IBA，100mg·L1mashedPotatoand1mg·L1AC，providing99%rootingrateand95%survivalrate.

Keywords：Dendrobiumhybrida;tissueculture;inductionofadventitiousbud;rootingculture

秋石斛Dendrobiumhybrida为兰科石斛属，主要分布在我国西南、华南、台湾等热带、亚热带和秦岭以南地区，喜高温、湿润环境。秋石斛每年秋季开花，花色多，花量多，而且花期可长达两个月，具有非常高的观赏价值，又由于其花形类似蝴蝶，故称蝴蝶石斛[1]，作为一种新型的切花品种，常用于餐盘布置、插花等，近年来市场需求量很大[2]。目前秋石斛的主要繁殖方式为分株和高芽繁殖[3]，繁殖系数低，推广局限性大。本试验对秋石斛外植体消毒、增殖培养、生根培养等进行研究，以期为大规模的组培苗生产提供了技术支撑。

1材料和方法

1.1材料

本试验以秋石斛品种“阳光”的高位芽为外植体，秋石斛材料由鑫闽种业有限公司提供。

1.2方法

1.2.1外植体的消毒

于2012年3月中旬，将生长状况良好的植株上萌发的高位芽取下，剥去外层叶片，剪去根和顶部叶片，用饱和洗衣粉溶液浸泡30min后，清水冲洗干净。在超净工作台中进行消毒处理，先用75%酒精消毒，再用0.1%Hgcl2浸泡，最后用无菌水冲洗5次，消毒处理见表1。

经过消毒处理的材料接种于MS+6BA2.0mg·L1+NAA0.5mg·L1+胰蛋白胨2g·L1的外植体培养基。每瓶接种一个茎段，试验重复3次。

1.2.2不定芽的增殖

经过初代培养的材料接种在继代培养基中，用于诱导不定芽。比较不同种类和不同用量的添加物，对秋石斛不定芽增殖的影响。每瓶培养基中接种5个茎段，每个处理20瓶，试验重复3次。接种50d后，观察苗木生长情况，统计增殖率。继代培养基：①MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+蛋白胨2g·L1;②MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+花宝一号2g·L1;③MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1;④MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+香蕉泥80g·L1;⑤MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1。

1.2.3根的诱导

将经过增殖培养，生长至3～4cm的单株从不定芽中剥离，接种在添加不同浓度的ABT（0.6，0.8，1.0）和IBA（0.6，0.8，1.0）MS培养基中，并在培养基中添加80g·L1土豆泥和1g·L1活性炭（Ac），进行生根壮苗培养。每瓶培养基中接种10个单株，每个处理10瓶，试验重复3次。50d后观察根的生长情况以及苗木生长状况。生根培养基如下：①MS+ABT0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;②MS+ABT0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;③MS+ABT1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;④MS+IBA0.6mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑤MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1;⑥MS+IBA1.0mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1。

1.2.4炼苗移栽

将高长至7～8cm的生长健壮、根系发达的生根苗移到大棚。打开瓶盖炼苗3d后，取出生根苗，洗净根部附着培养基，移栽于水苔基质中，观察移栽成活率。

1.3培养条件

试验培养基中均添加30g·L1白糖，卡拉胶6g·L1，pH值均为5.8。经过121℃、1.1kg·cm2高压消毒20min。培养室温度为25±2℃，光强1000～1500lx，光照时间12h·d1。

1.4数据统计

污染率=污染株数/接种数×100%;存活率=存活株数/接种数×100%;生根率=生根株数/接种数×100%;移栽成活率=成活株数/移栽总株数×100%。

2结果与分析

2.1不同消毒处理对秋石斛消毒效果的影响

试验中设计6种不同的消毒处理，将经过消毒的芽接种于初始培养基中，15d后观察统计污染率和成活率。统计结果如表1。试验结果表明采用处理5：酒精消毒1min后，用0.1%HgCl2消毒20min，能达到最佳的消毒效果，存活率达到68%。在0.1%HgCl2消毒时间一致时，发现酒精消毒30s的消毒效果远比酒精消毒1min效果差。当升汞消毒时间增加到25min时，由于过长的消毒时间对植物细胞产生毒害，使其死亡率提高。

2.2不定芽增殖

在继代培养基中添加不同的添加物，观察其对不定芽增殖的影响，50d后统计增殖率并进行方差分析。从表2和表3中可以看出，不同培养基配比下，秋石斛的增值系数存在显著性差异（F0.05（4，10）=3.47805

2.3生根培养

将长为3cm左右的无根单株接种到生根培养基中，从表4可以看到：在MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+AC1g·L1的培养基中，生根率和根数都优于其它组合，并且苗木叶片浓绿、茎粗壮、生长状况优良。试验中发现IBA对秋石斛根的诱导作用优于ABT，罗岚[6]在秋石斛的生根培养试验中，认为IBA能促进秋石斛生根，这与本试验结果一致。

3结论与讨论

试验发现最佳的不定芽诱导培养基为MS+6BA1.0mg·L1+IBA0.5mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，增殖系数为4.5;最佳的生根壮苗培养基为MS+IBA0.8mg·L1+土豆泥80g·L1+活性炭1g·L1，生根率99%。

秋石斛多种植于高温高湿的环境中，茎叶中繁殖着大量的微生物，给外植体的消毒造了很大的困难。陆顺教[7]等分别对秋石斛外植体的取材部位进行了研究，认为基部萌发的侧芽细菌较多，而高位芽不易受内生菌感染。本试验采用高位芽为外植体，一定程度上避免了来自基质的污染，且内生菌较少，消毒效果较好。

试验在秋石斛的增殖过程中发现，有添加土豆泥培养基较未添加土豆泥的培养基，能更为有效的促进苗木生长，苗木叶片浓绿，茎秆粗壮;未添加活性炭的培养基与添加活性炭的培养基相比，苗木容易出现褐化现象，从而影响了植物快速繁殖的成功率。这是以后试验或生产上需要注意和值得进一步思考的地方。

参考文献

[1]邹成勇，刘燕.我国石斛属植物研究进展[J].安徽农业科学，2010，38（12）：61646166.

[2]王春.石斛兰组织培养及快繁技术研究[J].浙江林业科技，2002，22（2）：3840.

[3]江秀娜，李军，詹海洋，等.解读秋石斛的四大繁殖方法[J].中国花卉盆景，2004，（9）：38.

[4]陈亚鸿，洪磊，陈雄庭.减少秋石斛在组织培养中的褐化研究[J].现代农业科学，2009，16（3）：4448.

[5]周华伟，李世君，钱秀红，等.组织培养中若干因素对石斛兰试管苗生长的影响[J].浙江农业大学，1995，21（6）：622624.

[6]罗岚.秋石斛立体快速繁殖研究[J].佛山科学技术学院学报，2004，22（02）：6971.

[7]陆顺教，易双双，任羽.秋石斛侧芽外植体消毒方法的研究[J].基因组学与应用生物学，2014，33（3）：674681.