蒙药花锚总双苯吡酮提取工艺研究

邰巴达拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那

(内蒙古民族大学，内蒙古 通辽 028000)



蒙药花锚总双苯吡酮提取工艺研究

邰巴达拉胡，娜 拉，拉喜那木吉拉，巴根那*

(内蒙古民族大学，内蒙古 通辽 028000)

目的：确定蒙药花锚双苯吡酮提取工艺。方法：首先用单因素试验法考察花锚双苯吡酮提取的主要影响因素，然后采用正交试验法，以花锚双苯吡酮的量为指标，优化蒙药花锚总双苯吡酮提取的最佳工艺。结果：花锚双苯吡酮提取的最佳工艺为乙醇浓度90%，料液比为1∶40，提取时间8h，提取量可达到13.826mg/g。结论：该实验确定的最佳工艺简便易行，提取率和提取量较高，可为花锚双苯吡酮工业化生产提供参考依据。

花锚；双苯吡酮；提取工艺

蒙药花锚(HaleniacorniculataL. Cornaz.)，蒙药名为希依日-地格达，是蒙医传统药材。系龙胆科(Gentianaceae)花锚属(Halenia)一年生植物的干燥全草[1]，生于山沟、林缘、林下、水池湿草地[2]，主要分布在大兴安岭林区各地以及蒙古、西伯利亚、远东、欧洲等地[3]。该药味苦，性平，效柔、腻，主要功能为退黄，平息“协日”，利胆，愈伤。临床用于肝、胆热，口苦，目黄，头痛，高烧，尿黄，“协日”热，肺热，伤热等疾病[4]。据文献[5]报道，目前已从蒙药花锚中分离得到了双苯吡酮及其苷类、黄酮及其苷类、裂环烯醚萜类、三萜类和生物碱等类型成分，其中双苯吡酮(xanthones)类化合物是龙胆科植物的主要化学成分，也是蒙药花锚的主要成分之一，有苯并色原酮、呫吨酮、氧杂蒽酮等别名。是一种黄色的酚性化合物,植物中多为淡黄或无色的苷类形式存在[6-7]。本文采用正交试验法，以总双苯吡酮含量为指标，研究提取时间、溶剂量和乙醇浓度对蒙药花锚中双苯吡酮提取的影响，从中优化提取的最佳条件，为工业化生产提供参考依据。

1 实验材料

UV-2501型紫外-可见分光光度计(岛津)，Rotavapor R-210旋转蒸发仪(瑞士)Vacuum Pump V-700 真空泵(瑞士)，ISO9001电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。芦丁20086569(中国药品生物制品检定所)，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠和乙醇等均为分析纯。蒙药花锚采集于内蒙古锡林郭勒盟东乌珠穆沁旗，经内蒙古民族大学蒙医药学院巴特尔教授鉴定为龙胆科(Gentianaceae)花锚属(Halenia)一年生植物花锚(HaleniacorniculataL. Cornaz.)的干燥全草。

2 双苯吡酮测定方法

2.1 芦丁对照液制备

精密称取芦丁对照品5.0mg，置于10mL容量瓶中，加无水乙醇溶解，并用无水乙醇至刻度，摇匀，即得。

2.2 总双苯吡酮溶液制备

称取蒙药花锚粉末10.0g，精密称定，置于250mL圆底烧瓶中，加95%乙醇200mL，回流提取8h，滤过，滤液即为样品液。

2.3 检测波长扫描

分别取样品液和对照液0.6mL，分别置于25.0mL和50.0mL容量瓶中，其余按线性关系考察操作。在400～800nm范围内进行扫描，结果见图1。

A为样品液；B为对照液

2.4 标准曲线绘制

分别取对照液0、0.5、1.5、2.0、2.5、3.0mL，于50mL容量瓶中，加5%亚硝酸钠溶液1.5mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1.5mL，摇匀，放置6min，加 4%氢氧化钠20mL，加水至刻度，摇匀，放置20min后以第一管为空白对照参比按分光光度法，在510nm波长处测定吸光度，以吸光度为横坐标，浓度为纵坐标，回归方程为：y=0.083 7x+0.035 1，R2=0.999 3，线性范围为2.5～60μg/mL。结果见图2。

图2 标准曲线

2.5 精密度试验

取样品液6份，每份0.6mL，按“2.4”项下测定其吸光度，测得吸光值的RSD为1.82%。

2.6 稳定性试验

精密吸取样品液0.6mL，置于25mL容量瓶中，按“2.4”项下测定其吸光度，每隔30min测定1次，连续3h，测得吸光值的RSD为1.96%。

2.7 重复性试验

称取蒙药花锚粉末6份，每份5.0g，精密称定，按“2.2”项下制备供试液。分别取供试液0.6mL，按“2.4”项下测定其吸光度，测得吸光值的RSD为1.94%。

2.8 加样回收试验

精密吸取样品液6份，每份0.6mL，分别加对照品溶液0.6mL，其他试剂加入量及时间同“2.4” 项下操作。测定其吸光度，计算平均加样回收率为99.87%，RSD为1.97%。

3 单因素试验

3.1 测定方法

分别精密吸取单因素试验和正交试验项下溶液0.6mL，置于25.0mL容量瓶中，按“2.4”项下操作，测定其吸光度并计算总双苯吡酮含量。

3.2 乙醇浓度对花锚总双苯吡酮的影响

称取花锚粉末5份，每份10.0g，于 500mL圆底烧瓶中，分别加入不同浓度的乙醇溶液(50%、60%、70%、80%、90%)200mL，回流提取8h，滤过。分别精密吸取滤液0.6mL，其他试剂加入量及时间同“2.4” 项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量，结果见图3。

图3 乙醇浓度对花锚双苯吡酮的影响

3.3 提取时间对花锚总双苯吡酮提取率的影响

称取花锚粉末5份，每份10.0g，于 500mL 圆底烧瓶中，分别加90%乙醇200mL，于同一温度下分别回流提取4、6、8、10h，每份提取1次，滤过。分别精密吸取滤液0.6mL，按“2.4” 项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量，结果见图4。

图4 提取时间对花锚总双苯吡酮的影响

3.4 料液比对花锚双苯吡酮含量的影响

称取花锚粉6份，每份10.0g，于 500mL 圆底烧瓶中，分别加90%乙醇1∶5、1∶10、1∶20、1∶30、1∶40 ，回流提取8h，滤过。分别精密吸取滤液0.6mL，其他试剂加入量及时间同“2.4” 项下操作。测定其吸光度，计算其百分含量，结果见图5。

图5 溶剂量对花锚总双苯吡酮提取率的影响

4 正交实验

4.1 影响因素及水平

根据单因素试验结果，确定乙醇浓度、料液比、提取时间作为考察因素，以双苯吡酮含量为评价指标，用L9(34)正交表安排试验，因素水平见表1。

表1 影响因素和水平

4.2 正交实验结果与分析

称取药材，共计9份，每份10.0g，按正交试验表安排实验，以双苯吡酮测得量为考察指标，结果如表2所示。

表2 提取工艺正交实验设计

对表2进行数据处理，由直观分析可知，以总黄酮含量为评价指标，主要因素依次为提取时间、料液比、乙醇浓度，最佳工艺为A3B2C2。花锚总双苯吡酮提取的最佳工艺为：乙醇溶剂浓度为90%，提取时间为8h，料液比1∶40，提取量可以达到13.826mg/g。为确认是否为双苯吡酮，对提取物进行理化鉴别。

5 花锚双苯吡酮的定性鉴别

按照优化提取工艺得到的花锚总双苯吡酮通过如下几种鉴别实验进行定性研究：①浓氨水反应：取该样品溶液点滴在滤纸上，将滤纸在氨水上方蒸熏0.5min，立即置于紫外光下观察，呈明显的黄褐色荧光斑点；②AlCl3反应：取样品溶液点滴在滤纸上，滴加1% AlCl3乙醇溶液，风干后在可见光下观察，呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点；③乙酸镁反应：取样品溶液点滴在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，风干后在紫外光下观察，呈黄色斑点；④盐酸-镁粉反应：取乙醇提取液1mL于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴(1次性加入)，在泡沫处呈橙黄色。

6 讨论

从方法学考察结果看，在实验条件下芦丁具有良好的线性关系，精密度、准确度和稳定性均较高，可作为蒙药花锚总双苯吡酮含量测定的依据。花锚总双苯吡酮提取的最佳工艺为：乙醇溶剂浓度为90%，提取时间为8h，料液比1∶40，提取量可以达到13.826mg/g。通过理化鉴别实验进一步验证，优化工艺条件下得到的花锚提取物主要为双苯吡酮。

[1] 内蒙古卫生厅.内蒙古蒙药材标准[S].赤峰:内蒙古科学技术出版社,1987:418.

[2] 占布拉·道尔吉.蒙医正典[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,2006:227.

[3] 中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准·蒙药分册[S].北京:中国医药科技出版社,1998:45.

[4] 内蒙古自治区革命委员会卫生局.内蒙古中草药[M].呼和浩特:内蒙古人民出版社,1972:104.

[5] 中华本草编委会.中华本草·蒙药卷[M].上海：上海科学技术出版社,2004:157.

[6] 谭沛,刘永隆.植物口山酮贰类化合物[J].天然产物研究与开发,1995,7(1):45-54.

[7] 马昌.山酮在植物中的分布及其药理作用[J].安徽农业科学,2009,37(31):15244-15245.

(责任编辑：余 婷)

Study on the Extraction Technology of Total Xanthones fromHaleniaCorniculata

Taibadalahu, Nala, Laxinamujila, Bagenna

(Inner Mongolia University For The Nationalities, Tongliao 028000,China)

Objective:To optimize the extraction process of total xanthones fromHaleniacorniculata. Methods:The single factor test was used to study the main factors affecting the extraction of total xanthones from Halenia corniculata,then With the amount of total xanthones as index,the optimum extraction process of total flavonoids from Halenia corniculata was optimized by orthogonal test.Results:The optimum process of total xanthones from Halenia corniculata was ethanol concentration 90%,the ratio of solid to liquid was 1∶40,extraction time 8 h.extraction rate can reach 13.826mg/g. Conclusion:The optimum process is simple,the extraction rate and content is higher,it can provide some reference for the industrialproduction of Halenia xanthone.

Haleniacorniculata;Xanthones;Extraction Process

2015-04-23

国家自然科学基金项目(81360673)；内蒙古民族大学校级研究生资助项目(NMDSS1432)

邰巴达拉胡(1988-)，男，蒙古族，内蒙古民族大学硕士研究生，研究方向为蒙药与方剂学。

巴根那(1960-)，男，博士，内蒙古民族大学教授、博士生导师，研究方向为蒙药与方剂学。

R284

A

1673-2197(2015)19-0016-03

10.11954/ytctyy.201519008