白藜芦醇对大鼠胶原诱导性关节炎抑制作用及机制研究

蒋 莹，刘芳兰

(江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000)



白藜芦醇对大鼠胶原诱导性关节炎抑制作用及机制研究

蒋 莹，刘芳兰

(江西医学高等专科学校，江西 上饶 334000)

目的：研究白藜芦醇(RES)对大鼠胶原诱导性关节炎(CIA)的作用及其机制。方法：建立牛Ⅱ型胶原蛋白大鼠CIA模型，测定大鼠足爪炎症肿胀度，HE染色对关节组织进行检查，ELISA法检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α水平。结果：灌胃给予RES能减轻CIA大鼠的关节炎症状，降低血清中IL-6、TNF-α水平，且呈现剂量依赖性趋势(P<0.05或P<0.01)；HE检查发现RES可改善局部关节炎症状。结论：RES对CIA大鼠具有治疗作用，该机制可能与其调节CIA大鼠异常免疫功能有关。

胶原性关节炎；白藜芦醇；炎症；免疫功能

类风湿性关节炎是以慢性、对称性、多滑膜关节炎和关节外病变为主要临床表现，尚未明确病因的全身性炎症性自身免疫炎性疾病[1]。目前，类风湿性关节炎的治疗以迅速缓解疼痛症状为主，但其副作用较强，有一定的局限性。我国传统中药具有毒副作用小等特点，在类风湿性关节炎的治疗方面有广泛的应用前景。白藜芦醇(RES)是一种多酚类化合物，其生物学功能主要有抗肿瘤、抗菌消炎、抗氧化、抗自由基等。目前针对RES的研究热点之一是其抗炎作用。本文研究RES对类风湿关节炎是否具有治疗作用，初步探讨其作用机制。

1 材料与仪器

白藜芦醇(纯度>80%，湖南省洪江华光生物有限责任公司，批号：20130205)；BCA蛋白定量试剂盒(Pierce公司)；牛II型胶原、大鼠TNF-α、IL-6 ELISA检测试剂盒(Sigma公司)；弗氏不完全佐剂(美国Sigma公司)。实验动物：健康雄性4月龄SD大鼠，体重250～275g,由江西中医药大学实验动物中心提供,标准环境饲养，许可证号SCXK(赣)2012-0016。

2 方法

2.1 实验分组及给药方案

将SD大鼠随机分为6组：正常组，CIA模型组，RES低剂量组(20mg·kg-1)、中剂量组(40mg·kg-1)、高剂量组80mg·kg-1)和阳性对照组(布洛芬10mg·kg-1)。各用药组于致炎后第21～35天灌胃给药，每天1次，正常组和CIA模型组灌胃给予等容量的0.5%羧甲基纤维素钠。

2.2 大鼠CIA模型制备与评价[3]

牛II胶原500μg溶于0.05mol·L-1醋酸0.2mL中，与等体积弗氏完全佐剂混合充分，注射至大鼠尾根部皮下。初次致敏后第21天，再次大鼠尾根部皮下注射同体积试剂。每日观察关节皮下结节、红肿程度等情况。评价标准：4分：全部足爪肿胀；3分：踝关节以下的足爪肿胀；2分：足趾和趾关节有肿胀；1分：趾关节有红肿；0分：无红肿。

2.3 足爪容积测定及病理检查

足爪仪测定致炎前每只小鼠左后足容积，自第21 天起，每4天测定1次相应足容积，肿胀度=(Vt-Vn)/Vn×100%，Vn指模型前足容积，Vt指模型后足容积。第35天处死小鼠后，剪取左踝关节制病例切片待查。

2.4 血清中炎性因子的检测

第1次免疫后35天麻醉大鼠，眼底静脉丛取血，分离取血清，并按照ELISA试剂盒说明操作，检测血清中IL-6、TNF-α水平。

2.5 统计学处理

3 结果

3.1 RES对大鼠多发性关节炎指数的影响

RES可剂量依赖性地抑制CIA大鼠继发性足肿胀，其足爪肿胀度明显轻于模型组，差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，见表1。

3.2 病理切片观察

常规HE染色病理切片显微镜检发现：健康对照组滑膜关节结构完整，关节软骨表面完整，腔内无渗出液，滑膜组织正常；CIA模型组大鼠镜下可见滑膜关节结构破坏，关节间隙狭窄，可见炎性细胞浸润，并且伴有血管翳形成。CIA阳性对照组可见滑膜关节结构较完整，关节间隙清晰。见图1。

表1 RES对大鼠多发性关节炎指数的影响

注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。

A:健康对照组；B:CIA模型组；C:CIA阳性药物组

3.3 RES对炎性因子表达的影响

经ELISA法检测，相较于正常组，CIA模型组炎性因子IL-6、TNF-α的表达明显增加，而RES给药组可呈剂量依赖性地抑制促炎因子的表达，见表2。

表2 各组大鼠血清炎性因子水平

注：与正常组比较，*P<0.05，**P<0.01；与模型组比较，#P<0.05，##P<0.01。

4 讨论

本研究观察了RES对各实验组大鼠体重的影响。经RES治疗35天后，正常对照组、CIA模型组、CIA阳性对照组、及RES高、中、低剂量组大鼠平均体重比较发现：各实验组两两比较平均体重均无统计学差异(P>0.05)，表明RES对SD大鼠无明显毒副作用。此外，已经出现关节炎症状的CIA大鼠使用RES处理35天，其关节炎指数、足爪容积及滑膜组织病理评分与模型组比较明显下降，与阳性对照药物布洛芬比较，下降稍缓，提示RES对CIA大鼠的关节炎有抑制作用，其作用强度不及布洛芬。本研究首次通过实验动物模型显示RES对CIA大鼠的关节炎有抑制作用，机制可能与其调节CIA大鼠异常免疫功能有关。

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[3] 李洪忠,万敬员,张力,等.积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用[J].药学学报,2007,42(7):698-703.

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(责任编辑：魏 晓)

2015-04-24

蒋莹(1985-)，女，江西医学高等专科学校助理实验师，研究方向为生理学。

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0014-02

10.11954/ytctyy.201519007