无梗五加果实抗疲劳活性研究

管美玉，刘玉强，才 谦，刘禹彤，曾申磊

(辽宁中医药大学 药学院,辽宁 大连 116600)



无梗五加果实抗疲劳活性研究

管美玉，刘玉强，才 谦*，刘禹彤，曾申磊

(辽宁中医药大学 药学院,辽宁 大连 116600)

目的：研究无梗五加果实各提取物的抗疲劳作用，为无梗五加的广泛应用提供依据。方法：采用小鼠力竭游泳实验，考察连续灌胃无梗五加果实提取物2周对小鼠抗疲劳能力的影响，并对给药后小鼠体内血乳酸、血尿素氮、肝糖原和肌糖原的变化进行检测。结果：无梗五加果实提取物能够延长小鼠力竭游泳时间、降低小鼠运动后的乳酸堆积和血尿氮的生成,增加肝糖原、肌糖原的储备量。结论：无梗五加果实具有抗疲劳作用，尤以无梗五加果实醇提物抗疲劳作用最显著。

抗疲劳；无梗五加果实；血乳酸；血尿素氮；肝糖原；肌糖原

无梗五加[Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.]又名短梗五加、乌鸦子，主要分布于东北、华北、陕西等地，与刺五加同为五加科(Araliaceae)五加属植物，刺五加具有调节免疫、抗肿瘤、抗疲劳、抗衰老功效[1]。并且同科属植物药理作用有很多相似之处，冯颖等[2]曾在研究中提到无梗五加果实多糖具有抗疲劳作用，但对无梗五加果实醇提物抗疲劳作用缺乏研究，本研究采用小鼠力竭游泳实验分别对无梗五加果实乙醇提取物和2种不同提取方法所得到的多糖的抗疲劳活性进行了研究，初步明确无梗五加果实抗疲劳作用及其作用机理,为无梗五加果实抗疲劳的药理作用的进一步开发利用奠定基础。

1 仪器和试药

1.1 试药

无梗五加果实购自辽宁省丹东农业科学院，由辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为Acanthopanaxsessiliflorus(Ruqr.et Maxim)Seem.的干燥果实。1，6-二磷酸果糖购自大连美仑生物技术有限公司(批号：20130921)。

1.2 动物

昆明种小鼠，SPF级，体重18～22g，雄性，由辽宁长生生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK(辽)2010-0001 。

1.3 仪器和试剂

RE-52C型旋转蒸发仪(巩义市予华仪器有限责任公司)；酶标仪(DNM9602G型号，北京普朗公司)；万分之一克电子天平(上海越平科学仪器有限公)；低温冷冻离心机(TGL-16，大连松谱瑞特贸易公司)冷冻干燥机(LGJ-10压盖型，北京博医康实验仪器有限公司)；数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)；101型电热鼓风干燥箱(天津泰斯特仪器有限公司)。尿素氮试剂盒购自上海科兴商贸有限公司(批号：201409)；血乳酸试剂盒购自上海科兴商贸有限公司(批号：201409)；肝糖原试剂盒购自上海科兴商贸有限公司(批号：201409)；肌糖原试剂盒购自上海科兴商贸有限公司(批号：201409)。

2 方法

2.1 无梗五加果实各提取物制备

2.1.1 乙醇提取物制备 干燥的无梗五加果实粉末，加80%乙醇回流提取3次，每次2h，过滤，合并提取液，浓缩至1.25g/mL,1mL无梗五加果实乙醇提取液相当于1.25g生药。

2.1.2 多糖1制备 醇提后的果实残渣自然晾干后，以10倍的水进行回流提取3次，每次2h，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至250mL，加入一定量95%乙醇使含醇量达到80%，静置放置24h，除去上层溶液，留下层多糖沉淀，然后将下层沉淀浓缩一定程度后进行冷冻干燥，得棕色的无梗五加多糖1，1g多糖1相当于14.58g生药。

2.1.3 多糖2制备 干燥的无梗五加果实粉末，以10倍量水进行回流提取3次，每次2h，合并提取液，滤过、减压浓缩至600mL,加入一定量95%乙醇使含醇量达到80%，静置放置24h，除去上层溶液留下层多糖沉淀，然后将下层沉淀浓缩一定程度后进行冷冻干燥，得棕色的无梗五加多糖2，1g多糖2相当于11.90g生药。

2.2 动物分组与给药

将实验动物分为8组，每组10只，分别为空白组(蒸馏水)，阳性对照组(1,6-二磷酸果糖0.5g/(mL·d))，无梗五加果实醇提物高剂量组(0.58g/(mL·d))、无梗五加果实醇提物低剂量组(0.29g/(mL·d))、多糖1高剂量组(800mg/(kg·d))、多糖1低剂量组(400mg/(kg·d))、多糖2高剂量组(980mg/(kg·d))、多糖2低剂量组(490mg/(kg·d))，给药体积为0.2mL/(10g·d)，给药方式均为灌胃给药，并且保证给药各组生药量相等(阳性组除外)，每日给药1次，连续给药2周。

2.3 测定指标

2.3.1 力竭游泳实验[3-4]末次给药30min后，将小鼠尾巴系上一块质量为2g的铅块，将小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水温控制在(25±2)℃左右，强迫小鼠游泳直到力竭，以小鼠全身没于水面以下，8s内不能浮出水面即为力竭，记录开始游泳至力竭的时间，为小鼠力竭游泳时间，计算给药后各组小鼠平均游泳时间。

2.3.2 血乳酸(LAC)和血清尿素氮(BUN)的含量测定 末次给药30min后，将小鼠尾巴系上一块质量为2g的铅块，将小鼠置于水深30cm的游泳箱中，水温控制在(25±2)℃左右，游泳30min，出水休息30min 后立即摘眼球取血，4℃下静置1h后，5 000r·min-1离心15min，取血清，按ELISA试剂盒要求测定小鼠给药后血清BUN、LAC的含量。

2.3.3 肝糖原和肌糖原的含量测定[5]同“2.3.2”操作，出水休息30min后立即脱颈椎处死，取肝脏和大腿肌肉并用生理盐水清洗后，用滤纸吸干，分别称取小鼠肝脏和大腿肌肉约60mg，加入一定量的PBS(PH 7.4)，用匀浆器将标本匀浆化，离心20min左右(2 000～3 000r·min-1)。仔细收集上清液，按照ELISA试剂盒要求测定小鼠给药后肝糖原、肌糖原的含量。

2.4 统计学分析

3 结果

3.1 无梗五加果实各提取物对小鼠力竭游泳时间的影响

与空白组比较无梗五加果实醇提物、多糖1、多糖2、阳性药均能延长小鼠力竭游泳时间，其中醇提物高剂量组、多糖2高低剂量组、阳性药组能显著延长小鼠力竭游泳时间，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表1。

表1 无梗五加果实各提取物对小鼠力竭游泳时间的影响

注：与空白组比较，*P<0.05。

3.2 无梗五加果实各提取物对小鼠体内血乳酸和血尿素氮水平的影响

与空白组比较无梗五加果实醇提物高低剂量组、多糖1高低剂量组、多糖2高低剂量组、阳性药组均能显著降低小鼠运动后乳酸的积累量和降低小鼠运动后血尿素氮的生成，差异有统计学意义(P<0.05)，详见表2。

3.3 无梗五加果实各提取物对小鼠体内肝糖原、肌糖原的影响

与空白组比较，无梗五加果实醇提物高低剂量组、多糖1高低剂量组、多糖2高低剂量组、阳性药组均能增加小鼠运动后体内肝糖原、肌糖原的储备量。其中无梗五加果实醇提物高剂量组、无梗五加果实多糖2高剂量组及阳性药组能极显著同时增加小鼠运动后体内肝糖原、肌糖原的储备量(P<0.01)，具体数值见表3。

表2 无梗五加果实各提取物对血乳酸和血尿素氮的影响

注：与空白组比较，*P<0.05。

表3 无梗五加果实提取物对肝糖原、肌糖原的影响

注：与空白组比较，*P<0.05，**P<0.01。

4 讨论

疲劳是由运动引起的机体一系列生化指标改变而导致的肌肉力量的降低。传统对运动疲劳产生机制的认识主要在于能量耗竭学说、代谢产物堆积学说、内环境稳态失调学说、机体突变理论、神经疲劳学说和自由基学说[6],因此对疲劳的评价方法应以耐力实验和生化指标为主。耐力实验主要包括运动跑台、爬杆和游泳[7]。生化指标包括血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原等。根据1996年颁布的《保健食品功能学评价程序和检测方法》,如果14项或1项以上的耐力运动试验(负重游泳和爬杆试验)和2项或2项以上的生化指标(血乳酸、血清尿素氮、肝糖原、肌糖原等)结果呈阳性,就可以得出受试药物具有抗疲劳活性。

本实验主要考察的是负重游泳实验、血乳酸、血尿素氮、肝糖原、肌糖原5项指标。研究发现，无梗五加果实各提取物能延长小鼠力竭游泳时间、降低小鼠运动后的乳酸堆积和血尿氮的生成、增加肝糖原、肌糖原的储备量，其中以无梗五加果实醇提物抗疲劳作用最显著。但对于抗疲劳的机制尚不明确，有待进一步深入研究。

[1] 王祥.中药刺五加药理作用的研究进展[J].求医问药，2012,10(5):320-321.

[2] 冯颖,孟宪军,王建国,等.无梗五加果多糖组成及生物活性的研究[J].食品科学，2008,29(4):378-380.

[3] 张颖,张立木,李同德,等.紫荆叶对模型小鼠的消炎镇痛及耐缺氧抗疲劳作用的研究[J].中国药房，2009,20(36):2817.

[4] 陈奇.中药药理研究方法学 [M]. 第2版.北京:人民卫生出版社，2006:717.

[5] 丛登立,王浩天,高笑一,等.刺五加果的抗疲劳作用[J].吉林大学学报，2010,36(5):891-893.

[6] 李晓莉,王斌,刘架麟.枸杞多糖对小鼠耐常压缺氧能力的影响[J].营养学报，2000(4):337-340.

[7] BONGIOVANNI,LGANDHAGBARTH,K-E.Tonic vibration reflexes elicited during fatigue from maximal voluntary contractions in man [J].Journal of Physiology Online,1990,423(1):1-14.

(责任编辑：宋勇刚)

Study on the Anti-fatigue Effect of Acanthopanax Sessiliflorus Fruits

Guan Meiyu,Liu Yuqiang,Cai Qian*,Liu Yutong,Zeng Shenlei

(College of Pharmacy,Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Dalian 116600，China)

Objective:To study on the anti-fatigue effect of the extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits,to provide the basis for the wide application of Acanthopanax sessiliflorus.Methods:Exhaustive swimming test were employed to evaluate anti-fatigue effect of extracts of Acanthopanax sessiliflorus fruits in mice,extract orally administraded for two weekends consecutively.Further,lactic acid level and urea nitrogen level were examined,and hepatic gly-Cogen and muscle glycogen level after swimming were determined.Results:The extract of Acanthopanax sessiliflorus fruits extended swimming time,lactic acid level and urea nitrogen level were decrease-d,hepatic glycogen and muscle glycogen level were increased after Treatment.Conclusion:Acanthopanax sessiliflorus fruits have obvious anti-fatigue effects.the alcohol extract the of Acanthopanax sessiliflorus fruits showed more remarkable anti- fatigue.

Anti-fatigue;Acanthopanax Sessiliflorus Fruits; Blood Lactic Acid;Blood Urea Nitrogen;Hepatic Glycogen;Muscle Glycogen

2015-04-17

管美玉(1989-)，女，辽宁中医药大学硕士研究生，研究方向为中药化学。

才谦(1972-)，女，辽宁中医药大学教授，研究方向为中药化学和中药炮制学。E-mail：caiqianmail@sina.com

R285.5

A

1673-2197(2015)19-0010-03

10.11954/ytctyy.201519005