肝气郁结对雄性大鼠精瘀影响实验研究

范 薇，杨芳艳，夏丽娜

(成都中医药大学，四川 成都 610075)



肝气郁结对雄性大鼠精瘀影响实验研究

范 薇，杨芳艳，夏丽娜

(成都中医药大学，四川 成都 610075)

目的：建立肝郁雄性大鼠模型，探讨肝气郁结对精瘀影响的可能病理改变。方法：采用束缚筒慢性应激法建立肝郁模型，自制电棒刺激法建立电棒精瘀模型，对大鼠进行行为学测定，运用酶联免疫分析试剂盒检测大鼠股动脉血清中α-糖甘酶(α-Glu)及雌二醇(E2)含量。结果：旷场实验中，肝郁组与空白组大鼠在穿格次数、站立次数和理毛次数等指标存在显著差异(P<0.05)；与空白组比较，肝郁组、电棒精瘀组的血清中α-Glu、E2含量差异有统计学意义(P<0.05)，肝郁组与电棒精瘀组血清中α-Glu 、E2含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论：肝气郁结可导致雄性大鼠精瘀的发生，血清中α-Glu、E2含量水平改变是其病理变化的重要因素。

肝气郁结；精瘀；基础研究

中医理论认为肝主筋，司疏泄，能畅达气机，调畅情志，其经脉过阴器，使宗筋举，启动精门，促进精液排泄，维持男子正常生殖功能。如果肝气郁结，则可导致精液排出不畅而致精瘀，从而影响男性生殖机能。本实验通过束缚筒慢性应激法建立大鼠肝郁模型，电棒刺激法建立大鼠精瘀模型，通过大鼠行为学表现，测定血清中α-糖苷酶(α-Glu)、雌二醇(E2)浓度，揭示肝气郁结对精瘀影响的可能病理改变，为深层次揭示情志—肝郁—精瘀的发生机制，阐释精液瘀阻的致病机理。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物 清洁级SD大鼠24只，雄性，8周龄，体重200～250g(24只雄鼠经过筛选具备性活动能力)，购自成都中医药大学动物试验中心。

1.1.2 试剂 ELISA α-Glu试剂盒， ELISA E2试剂盒，美国R&D公司生产，购于北京中天正商贸有限公司。

1.1.3 仪器 Legend RT+ 230v冷冻离心机，JJT-900/1300型超净工作台，Thermo酶标仪。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠饲养于室温(22±2)℃，光照周期12h∶12h；自由摄食饮水、相对湿度40%条件下，每笼4只。适应1周后，将大鼠随机分成3组：空白组8只，肝郁组8只，电棒精瘀组8只。

1.2.2 造模用具 束缚筒(自制)：用硬塑料制成束缚筒，该筒为管状，其上打满通气孔，长约21cm，筒口外径6cm，内径5.3cm，筒内前端置一直径略小于筒内径并可前后调节的无底圆嘴塑料瓶，其瓶口为通气口(距离筒口5cm左右)，后端为可开关闸门，调节束缚强度。大鼠头向通气口置入后，关闭闸门，可通过调节塑料瓶改变大鼠活动空间。

电动刺激棒：自制铁棒(棒长6cm)，一端用导线连于电针机(华佗牌电子针疗仪 SDZ-II)。

1.2.3 造模 ①肝郁模型组。实验采用张立侠等[1]方法，建立雄性大鼠肝郁模型。大鼠适应1周后开始造模，将肝郁模型组大鼠束缚于束缚筒内，每天180min，以后每天增加束缚10min，并调节缩小束缚筒空间，逐日加大束缚强度, 通过增强束缚强度和时间消除大鼠对应激的耐受性，造模第31天，束缚时间为480min，并维持此时间与强度，继续束缚19天，造模时间共计50天。每次束缚时，使大鼠钻进束缚筒内，平架在木板上，不予进食和水。

②电棒精瘀组 。采用电动刺激棒，插入大鼠肛门2～2.5cm，采取断续波，1V电流大小电刺激，连续刺激1min，以大鼠阴茎勃起充血，有前列腺液溢出但不射精为度，每日1次，连续刺激50天。

1.2.4 行为学观察 实验在无噪音的实验环境条件下进行。操作者握住大鼠的尾巴根部1/3处，轻轻将大鼠放入开阔箱的中央格，并开始计时。由两位实验人员共同观察记录大鼠5min内的行为举动，每只大鼠仅做1次开阔箱行为测定，实验要求在单盲条件下进行。(每只大鼠在实验完毕后被取出后，应及时将其排泄物清扫干净，以免留有气味而干扰下一只大鼠的观察结果。)

观察指标：穿格次数，三爪以上跨入邻格的次数；直立次数，两前肢完全离开地面或伏于侧壁上的次数；理毛修饰次数，前肢向上抬举，抓痒、洗脸、舔足的次数。

1.2.5 生化指标检测 造模第50天，于末次束缚(或电棒刺激)2h后处死大鼠，三组大鼠股动脉取血，采用ELISA法检测血清中α-Glu及E2含量。

2 结果

2.1 大鼠行为学观察结果

旷场实验中，肝郁组与空白组大鼠在穿格次数、站立次数和理毛次数上存在显著差异(P<0.05)，大鼠行为学观察结果见表1。

表1 旷场实验观察慢性束缚应激模型大鼠行为变化比较 ±s，次)

注：与空白组比较，*P<0.05。

2.2 血清中α-Glu及E2含量检测结果

与空白组比较，肝郁组、电棒精瘀组小鼠血清中α-Glu、E2含量差异有统计学意义(P<0.05)，肝郁组与电棒精瘀组血清中α-Glu 、E2含量差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

组别α-Glu(U/L)E2(ng/L)空白组(n=8)5.1251±1.09358.7634±1.23280肝郁组(n=8)3.3895±1.4464*12.2655±1.9420*电棒精瘀组(n=8)2.5897±1.0369*13.5084±0.83462*

注：与空白组比较，*P<0.05。

3 讨论

临床流行病学资料显示，中医肝脏病证占五脏总体病证的40%，肝郁证为肝脏病证的基本病理变化，是肝病证候核心，为最为常见的中医证候[2]。精瘀是指生殖之精瘀滞于生殖道或精室所形成的一种腐败浊邪，由精液排出障碍引起的以疼痛、生殖机能异常为主的病证[3]。精瘀一旦形成，其致病广泛，以泌尿、生殖系统疾病较为常见，是导致慢性非细菌性前列腺炎病变的主要因素[4]。根据中医理论，情志—肝郁—精瘀具有相关性，本实验通过建立肝郁大鼠模型及电棒精瘀模型，检测相关指标，验证肝气郁结对雄性大鼠精瘀的影响。

实验选择束缚筒慢性束缚应激法制作肝郁模型，旷场实验中，肝郁组与空白组大鼠比较在穿格次数、站立次数和理毛次数上存在显著差异(P<0.05)，肝郁组大鼠行为学显示与文献中肝郁证动物模型相一致，提示肝郁模型建立成功。实验指标检测中，血清α-Glu含量的测定显示，与空白组比较，肝郁组、电棒精瘀组的血清中α-Glu、E2含量差异有统计学意义(P<0.05)，肝郁组与电棒精瘀组血清中α-Glu、E2含量差异无统计学意义(P>0.05)。

α-Glu由附睾分泌，可反映附睾的功能，与附睾精子成熟有关。当输精管和附睾阻塞时，α-Glu量会明显减少，因此可作为精道阻塞的重要依据。男性不育症，如精索静脉曲张、精子缺乏或精子活力下降及输精管切除后均可见血清中α-Glu活力降低。本试验中，血清E2水平明显改变，空白组与肝郁组、空白组与电棒精瘀组有显著差异。雌激素主要作用在于维持和调控副性器官的功能。大量动物实验结果显示，慢性无菌性前列腺炎的发生是由于血清中E2浓度增高所引起的，性激素可调节前列腺的正常生理功能[5]。本试验显示，肝气郁结可致血清E2浓度水平升高，导致精瘀的形成。肝郁组与电棒精瘀组比较差异无统计学意义(P>0.05)。

4 结论

本实验结果表明，肝气郁结可导致雄性大鼠精瘀的发生，血清中α-Glu、E2含量水平改变是其病理变化的重要因素。目前，肝郁精瘀动物实验研究仍处在探索阶段，在肝气郁结的何种阶段、何种程度会导致精瘀及精瘀的病理判定标准有待进一步深入研究。

[1] 张立侠，王慧.肝郁证勃起功能障碍大鼠模型模型建立的实验研究[J].中国男科学杂志，2006,20(11)：29-31.

[2] 杨文明，程彪，鲍远程，等.肝郁证实验研究概览[J].中国中医药信息杂志，2004，11(12)：1125-1127.

[3] 王承平, 徐中环, 周波.“白淫”、“白浊”、“败精”之内涵辨析[J].河南中医,2005，25(3)：24-25.

[4] 王承平, 胡卡明, 王永刚.败精致病性与慢性非细菌性前列腺炎相关性研究[J].四川中医，2009，27(2)：11-14.

[5] 沈周俊，何竑超.慢性无菌性前列腺炎与性激素[J].中国男科学杂志，2008,22(2):1-6.

(责任编辑：李岚春)

Research on Effects of Liver Depression of Male Rat Srerm Stasis

Fan Wei ,Yang Fangyan,Xia Lina

(Chengdu Univercity of TCM, Chengdu 610075, China)

Objective:To establish liver qistagnation male rats model and investigate pathological change of sperm stasis by the stagnation of liver qi.Methods:barrel bound chronic irritated method was adopted to establish the model of liver depression, and self-made electric prods stimulation method was adopted to establish the model of sperm stasis. The rats behavior determination and alpha glycoside enzyme (alpha-Glu),estradiol (E2) content detection in femoral artery serum by ELISA kit were processed. Results:In the open field test, there are significant differences between liver depression group and blank control group rats in wear lattice times, stand up times and teddying hair times (P<0.05). It shows big difference in the contents of the serum alpha-Glu, E2 between the groups of liver depression group, sperm stasis group and the control group(P<0.05). While there is some difference between the group of liver depression and sperm stasis with no statistical significance (P>0.05).Conclusion:The liver qi stagnation can lead to the occurrence of male rat sperm stasis, level of alpha-Glu, serum E2 content change is an important factor in the pathological changes.

Liver Depression;Sperm Stasis;Effection

2014-12-17

成都中医药大学科技发展基金(ZRYB201143)

范薇(1972—)，女，博士，成都中医药大学讲师，研究方向为中医藏象及败精理论。E-mail:921575069@qq.com

R271.1

A

1673-2197(2015)06-0007-02

10.11954/ytctyy.201506003