射干不同有效成分体外抗病毒药效学作用分析

2015-04-26徐倩

亚太传统医药 2015年18期

关键词：合胞射干鸢尾

徐倩

(南昌市洪都中医院制剂中心，江西南昌 330008)

射干不同有效成分体外抗病毒药效学作用分析

徐倩

(南昌市洪都中医院制剂中心，江西南昌 330008)

目的：观察分析射干各有效成分的体外抗病毒药学作用。方法：采用组织细胞培养方法，观察分析射干有效成分对疱疹I、呼吸道合胞病毒、柯萨奇16、腺病毒3型、疱疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的对抗作用。结果：经分析发现，除2号和6号外，射干各有效成分均没有毒界线药液，同时对各病毒致细胞病变均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯萨奇16、呼吸道合胞病毒及疱疹等。结论：除2号和6号以外，射干不同有效成分对各种病毒均具有不同程度的对抗作用。

抗病毒；射干；有效成分；药效学

射干是一种多年生草本植物，其根状茎呈不规则块状，颜色为黄色或黄褐色，茎直立。该植物须根较多，茎高一般为1～1.5m，为实心[1-2]。本文就射干不同有效成分的体外抗病毒药效学作用进行分析，观察分析射干有效成分对疱疹I、呼吸道合胞病毒、柯萨奇16、腺病毒3型、疱疹Ⅱ及腺病毒7型等病毒的对抗作用，具体报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

以序列号1～12分装射干不同有效成分，本研究所用受试药物由我院研究所提供。借助于硅胶柱对射干进行分离，用不同比例的氯仿-甲醛液经洗脱获得。受试药物中1～11号由野鸢尾苷元、鸢尾苷元及德鸢尾苷元与次野鸢尾苷元构成，即异黄酮苷元混合物；12号则由德鸢尾苷、鸢尾苷与野鸢尾苷所构成，即异黄酮苷混合物。在温度为120℃及0.1MPa高压条件下进行灭菌，灭菌时间为20min，分装储存于冰箱内备用，装设容量为5mL，冰箱温度为4℃。

所用病毒株有疱疹I、呼吸道合胞病毒、柯萨奇16、腺病毒3型、疱疹Ⅱ及腺病毒7型；细胞株包括非洲绿猴肾细胞、咽喉癌上皮细胞及宫颈癌细胞；试剂主要包含青链霉素母液、胎牛血清、TPCK胰酶、HEPES缓冲液、培养基及EDTA胰酶等。仪器设备有全外排式生物安全柜、二氧化碳培养箱及倒置显微镜等。

1.2 方法

(1)细胞株进行3～5天的复苏传代培养，让其贴壁形成为单层，在折光度和立体感均较强的条件下，利用EDTA胰酶进行消化，当贴壁细胞面有针尖样的小孔，且松动处于流动态时吸尽消化液，再添加相应细胞培养液，使细胞得以吹散，蓝染色计数。将细胞数调至大概3×104/mL，接种96孔的细胞培养板中，每孔为100μ/L，18～24h后，待细胞成片切融合度达80～90%单层再应用。

(2)按比例借助细胞培养液对1～12号射干有效成分进行稀释。在96孔培养板中接种细胞悬液，在二氧化碳含量5%、温度36.5℃的培养箱中培养，时间一般为24h，将原培养液倒掉，借助于Hank’s液对细胞进行清洗。完成上述操作，把已稀释的各有效成分滴加至所对应且已成为单层的各细胞株上，放置在温度为36.5℃的二氧化碳培养箱中培养5～7天，每日于倒置显微镜下观察细胞病变，做好记录工作。

(3)以10倍梯度降低的方式对所用病毒进行稀释，浓度为3×104/mL，采取染毒细胞病变法，把非洲猴肾细胞、咽喉癌上皮细胞及宫颈癌细胞接种于96孔培养板，并放于二氧化碳培养箱中培养，箱内温度为36.5℃，培养时间为24h，倒掉培养液并利用Hank’s液对细胞进行清洗，把所稀释的各病毒液接种于已成为单层的细胞板，其中呼吸道合胞病毒与腺病毒3型、7型所接种的细胞为咽喉癌上皮细胞，剩余病毒所接种的细胞为非洲绿猴肾细胞，放置二氧化碳培养箱中培养大约5天，培养温度为36.5℃，每日于倒置显微镜下观察细胞病变。在射干各有效成分对抗病毒致细胞病变上，进行细胞病变抑制实验。

2 结果

经测定，除2号和6号外，射干各有效成分均没有毒界线药液，同时对各病毒致细胞病变均有抑制作用，如腺病毒3型和7型、柯萨奇16、呼吸道合胞病毒及疱疹等。射干各有效成分不同细胞毒性测定结果见表1。各病毒测定不同细胞半数感染浓度情况见表2。射干各有效成分对抗病毒致细胞病变结果见表3。

表1 射干各有效成分不同细胞毒性测定结果

3 讨论

射干为鸢尾科射干属植物，其根茎为中药材射干主要来源，具有较为长远的药用历史，收载于《中国药典》，具有散血消肿、清热解毒及利咽消痰等作用[3]。其抗病毒机理为扶正祛邪，现代药理学研究表明，中草药抗病毒作用主要经病毒繁殖期间吸附、成熟、穿入及肤质等环节被阻断而使病毒得到抑制，或经机体免疫能力增强及机体非特异性、特异性免疫能力的加强抑制病毒。

表2 各病毒不同细胞板半数感染剂量测定结果

本研究采用病毒先吸附而后加药的方式，观察分析射干不同有效成分的抗病毒作用。研究结果显示，由野鸢尾苷、鸢尾苷及德鸢尾苷所构成的异黄酮苷混合物与由野鸢尾苷元、鸢尾苷元、次野鸢尾苷元及德鸢尾苷元所构成的异黄酮苷元混合物大部分成分均具备显著的体外抗病毒作用，究其原因可能是射干各有效成分经病毒成熟、穿入及复制等环节被阻断，从而发挥抗病毒的功效。