仙茅酒对小鼠抗疲劳作用的影响

潘 明，陈欲云，刘春丽，邬亚平，代联伶，陈利娟

(四川理工学院 a.生物工程学院;b.化学与制药工程学院，四川 自贡 643000)

引言

仙茅(Curculigo orchioides Gaertn.)，又名地棕、独茅、仙茅参等，为仙茅属药用植物;具有补肾助阳、益精血、强筋骨和行血消肿的作用。文献［1］报道仙茅、大叶仙茅和三叶鬼针草已被传统医学用于治疗各种疾病，如阳痿、腰膝无力、胃肠道和心脏疾病。董国明［2］研究表明，仙茅提取物对阳虚型SD大鼠血清SOD、血清Zn/Cu比值、血浆cAMP/cGMP水平的恢复可能是仙茅壮阳作用的机制。Wu Xiuying［3］的研究表明仙茅苷可以降低老年大鼠脑AchE的活性，并下调BACE1的表达而改善老年大鼠记忆缺失的症状。

运动性疲劳亦称体力性疲劳，在中医学属于“劳”、“虚劳”的范畴，即劳动或运动可导致机体阳气不足而引发肢软乏力、神疲倦怠等气虚症候，形成体力性疲劳［4］。运动过程中，可因出汗津液损耗导致阴虚之症;另一方面运动可致气虚血瘀之症;故人体能否迅速补充由于运动所消耗的精气，排出运动过程中产生的代谢产物，恢复机体阴阳平衡是机体抗运动性疲劳的关键。

中国民间仙茅浸泡于酒中，制成仙茅酒用于治疗阳痿滑精，腰膝冷痛，男子精寒，女子宫冷不孕，老年遗尿，小便余沥等疾病。但尚未见仙茅酒抗疲劳作用的文献报道，本研究对仙茅酒影响小鼠抗运动性疲劳作用机制做初步探讨。

1 材料与仪器

1.1 材料

超氧化物歧化酶(SOD)测试盒，批号:20131206;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒，批号:20140317;肌糖原及肝糖原测定试剂盒，批号:20140121;全血乳酸(LD)试剂盒，批号:20140305;均购于南京建成生物工程研究所。仙茅，批号:20131208，购于四川省中药饮片有限公司。

1.2 实验动物

SPF级ICR小鼠50只，雄性，购于中国医学研究院四川省人民医院动物实验中心，动物生产许可证SCXK(川)2013-15。

1.3 仪器

H-1850R台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司;JJ-1电动搅拌器，常州国华电器有限公司;756pc紫外可见分光光度计，上海舜宇恒平科学仪器有限公司。

2 实验方法

2.1 仙茅酒的制备

将仙茅200 g切成3 cm小段后浸泡于1000 mL小曲酒中，密封21天后过滤即得。

2.2 动物分组及给药

SPF级ICR小鼠50只，正常饲养1周，开始实验。按体质量随机分为空白对照组、小曲酒组、仙茅酒低剂量、中剂量、高剂量5组，每组10只。给药量参照《药理与中药药理实验》［5］中推荐的成人服用中药剂量折换成小鼠服用剂量，即空白对照组灌胃等剂量生理盐水0.1 mL/10gBW，小曲酒组灌胃等剂量小曲酒0.1 mL/10gBW，仙茅酒低、中、高剂量组分别灌胃剂量为0.06 mL/10gBW、0.12 mL/10gBW、0.24 mL/10gBW，每天灌胃1次，连续14 d。

2.3 血清SOD、LDH测定

各组小鼠连续给药14 d，参照《保健食品功能学评价程序和方法》［6］中抗疲劳作用检验方法进行实验。各组小鼠末次给药30 min后，称重，在小鼠尾根部负荷一块质量为小鼠体质量10%的重物，将小鼠置于水温25℃、水深25 cm的水箱中游泳3 min，然后将小鼠取出，5 min后摘眼球取血，收集于 2 mL离心管中，3500 r/min离心8 min，取上清即得血清。

血清SOD活力测定按照试剂盒说明书操作，血清中总SOD(T-SOD)活力计算公式:

血清LDH活力测定，乳酸脱氢酶催化乳酸生成丙酮酸的同时将烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)还原成NADH。通过测定NADH在440 nm处吸光度可求得各样本乳酸脱氢酶的活力。

2.4 全血乳酸(LD)含量测定

依照全血乳酸(LD)试剂盒说明书步骤操作，按2.3项小鼠摘眼球取血，留取50 μL全血，置于用肝素钠处理过的离心管中，再加入0.6 mL蛋白沉淀剂，静置10 min，3500 r/min 离心 8 min，取上清液 20 μL 加入酶工作液和显色剂充分混匀，37℃孵育10 min，加入终止剂终止反应。于530 nm波长处测定其吸光度值。

2.5 肝糖原和肌糖原含量测定

［7］浓硫酸可使得糖原脱水生成糖醛衍生物，后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。各组小鼠取血后立即脱颈椎处死，解剖取出肝脏和后肢肌肉，置于冰冻生理盐水中，剔除结缔组织，用滤纸吸干，称重(样本质量≤100 mg为宜)。按样本质量(mg):碱液体积(μL)=1:3配制浓减溶液，将样本加入浓碱溶液中，沸水水浴20 min，流水冷却后加入蒸馏水，按照试剂盒说明书操作，于620 nm波长处，测各样本OD值。糖原含量的计算公式:

2.6 统计学方法

采用SPSS19.0统计学软件，各组数据以±s表示。组间差异用单因素方差分析进行统计学分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果与讨论

3.1 小鼠一般情况变化

对小鼠一般情况观察(表1)，用药两周后与空白对照组比较，仙茅低、中剂量组小鼠毛色、食欲正常，精神状态好，体质量无显著性差异(P＞0.05);仙茅酒高剂量组小鼠体质量显著性增加(P＜0.05)，这可能是由于仙茅酒高剂量增加了小鼠食欲使得体质量显著性增加。

表1 各组小鼠体质量

3.2 血清SOD的含量

小鼠血清中SOD的含量见表2，与空白对照组比较，仙茅酒高、中剂量组血清 SOD含量显著升高(P＜0.05)，仙茅酒低剂量组有增加趋势，但无统计学意义;与小曲酒组比较，仙茅酒高、中剂量组血清SOD含量也显著性升高(P ＜0.05)。

在劳累性运动中，SOD被认为是抑制活性氧产生的抗氧化酶系中最先起作用的酶系之一［8］。另有研究报道［9］，血清中的SOD活性增加与运动性疲劳所致的氧化应激反应加强有关系;SOD能够增强机体内代谢废物的清除能力，从而消除疲劳。连续给药14 d后，仙茅酒中的活性成分显著性地增加小鼠血清SOD含量，说明仙茅酒能增加小鼠体内阴离子自由基的清除从而增加小鼠抗疲劳能力。

表2 仙茅酒对小鼠血清SOD含量的影响

3.3 血清LDH的活力

检测小鼠血清中LDH含量，结果见表3。与空白对照组相比，仙茅酒组LDH活力均有提高，但没有统计学意义。

表3 仙茅酒对小鼠血清LDH活力的影响

LDH是一个能够准确反应肌肉损伤程度的指标，LDH可以催化乳酸转化为丙酮酸，与乳酸的清除代谢相关，可减少乳酸的堆积［10］。由此可见，血清LDH活力是反映乳酸清除速度的指标。连续给药14 d后，负重游泳3 min，各组小鼠血清中LDH含量均有增高的趋势，但无统计学意义。可能延长仙茅酒干预时间，可以显著性地提高小鼠血清LDH而加快乳酸清除速度。

3.4 全血LD的含量

小鼠全血LD含量检测结果见表4，与空白对照组比较，仙茅酒高剂量组(P＜0.05)小鼠全血LD含量显著性降低，小曲酒组、仙茅酒低、中剂量组小鼠全血LD含量有降低趋势，但无显著性差异(P ＞0.05);与小曲酒组比较，仙茅酒高剂组小鼠全血LD含量显著性降低(P ＜0.05)，提示仙茅酒中的活性成分增加了小曲酒的抗疲劳作用。

表4 仙茅酒对小鼠全血乳酸含量的影响

Chang Qi［11］的研究表明，全血乳酸是一个运动强度指标，电流刺激组的大鼠肌肉乳酸浓度低于运动对照组，提示肌肉乳酸浓度降低促进了运动大鼠有氧代谢过程中ATP的产生。肌乳酸是供能体系的中间产物，长时间剧烈运动会使机体相对缺氧，糖酵解加快，产生大量肌乳酸，这是导致疲劳的重要原因。运动过程中，肌肉产生的乳酸会在5～15 min内渗入血液，使血乳酸含量上升，最终二者达到平衡，所以可以通过测定血乳酸含量反映肌乳酸情况［12］。本研究中各组小鼠连续给药14 d，负重游泳3 min后，仙茅酒高剂量组可显著性地降低小鼠全血中LD含量，从而提高小鼠抗疲劳的能力。

3.5 肝糖原及肌糖原的含量

小鼠肝糖原和肌糖原含量测定结果见表5，与空白对照组比较，仙茅酒高、中剂量组小鼠肌糖原含量明显增高(P＜0.05)，仙茅酒高剂量组小鼠肝糖原含量也显著性增高(P＜0.05);与小曲酒组比较，仙茅酒高剂量组小鼠肌糖原含量显著性升高(P＜0.05)。

表5 仙茅酒对小鼠肝糖原与肌糖原的影响

在运动过程中，ATP的消耗和能源的不足是身体疲劳的关键因素，机体的能量供应主要依赖于糖原发生糖酵解产生的ATP，所以糖原的储备直接影响运动能力［13］。在中等运动强度过程中，疲劳主要是由于肌肉中的糖原耗尽［14］。文献［15］报道，运动使得肌糖原不断消耗，机体为维持血糖水平，将动用肝糖原而导致肝糖原减少。在本研究中，仙茅酒可以通过增加肝糖原与肌糖原含量从而增加小鼠的运动耐力，减轻疲劳程度。

4 结束语

实验结果显示，仙茅酒高剂量组(0.24 mL/10gBW)和中剂量组(0.12 mL/10gBW)可以提高小鼠的运动耐力，其机制可能与仙茅酒增加小鼠血清SOD含量从而加强机体清除运动过程中产生的代谢产物的能力，间接地增强小鼠运动耐力有关;同时降低小鼠全血LD含量及升高小鼠肌糖原和肝糖原含量，为小鼠运动抗疲劳提供直接的能源。

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