食品中叶绿素铜钠测定方法的改进分析

2015-04-23孔鲁裔

生命科学仪器 2015年1期

孔鲁裔

（国家农业标准化监测与研究中心（黑龙江），哈尔滨 150000）

前言

叶绿素铜钠盐是叶绿酸铜钠的俗称，用有机溶剂从蚕沙中提取叶绿素，在经皂化、铜代所得到的墨绿色粉状品，是一种天然色素，在医药、食品及日用工业上有广泛的用途，可在食品加工中作罐头青豆、苦瓜以及糖果、蜜饯、饮料等的着色剂[1～5]。国标GB/T 23749-2009食品中叶绿素铜钠的测定分光光度法，是目前测定食品中叶绿素铜钠的唯一国家指定方法[1～11]。该方法从2009年延用至今，标准中规定的测定波长为404nm，样品处理时解析液用量为45mL，样品定容量为50mL。经过多年的实际应用和反复实验发现，测定波长选择405nm，标准曲线更稳定、线性更好。样品处理时解析液用量提升为75mL，样品解析回收率明显提高。样品定容量提升为100mL与标准工作液定容量统一，能减少方法系统误差。

1 实验材料与方法

1.1 试剂与材料

以下试剂除有特殊说明外，均为分析纯，用水均为GB/T6682-2008中规定的三级水[1]。

冰乙酸；无水乙醇；聚酰胺粉：80目～100目。

0.1mol/L氢氧化钠溶液：称取0.400g氢氧化钠，加水至100mL，溶解混匀。

4mol/L氢氧化钠溶液：称取16.0g氢氧化钠，加水至100mL，溶解混匀。

0.2mol/L乙酸铵缓冲液：称取7.708g乙酸铵，加水至500mL，溶解混匀。

解吸液：0.1mol/L氢氧化钠溶液：无水甲醇溶液=1：10（体积比）。

叶绿素铜钠标准品：大于等于99.7﹪

标准储备液：精确称取经105℃干燥至恒重并按其纯度折算为100﹪质量的叶绿素铜钠标准品0.0500g，用蒸馏水溶解并定容至100mL棕色容量瓶中，此溶液浓度为500μg/mL，当天配制，避光保存[1～5]。

1.2 实验方法

1.2.1饮料、酒样品

将样品摇匀，准确称1mL～10mL（精确至0.1mL）样品至100mL烧杯中，加入0.2mol/L的乙酸铵溶液30mL，在55℃～60℃的水浴中加热3min～5min，去除酒精。用4mol/L氢氧化钠溶液和冰乙酸调PH5～6。加入3.0g聚酰胺粉，浸泡1分钟再充分搅拌。将样品溶液约20mL蒸馏水转移至G3砂芯漏斗中抽滤，弃去滤液。用75mL解吸液分3次解吸色素（同5.5.1），收集滤液，用解吸液定容至100mL。

1.2.2糖果样品

将样品置于瓷研钵中研细、混匀，准确称取1g～10g（精确至0.001mL）样品至100mL烧杯中，加入0.2mol/L的乙酸铵溶液30mL，用4mol/L氢氧化钠溶液和冰乙酸调PH5～6。加入3.0g聚酰胺粉，浸泡1分钟再充分搅拌。将样品溶液约20mL60℃蒸馏水转移至G3砂芯漏斗中抽滤，弃去滤液。再用75mL解吸液分三次解吸色素（同5.5.1），收集滤液，用解吸液定容至100mL。

1.2.3罐头样品

取有代表性的样品置于捣碎机中充分捣碎，准确称取1g～10g（精确至0.001g）混匀浆液至100mL烧杯中，加入0.2mol/L的乙酸铵溶液30mL。充分搅匀后，用4mol/L氢氧化钠溶液和冰乙酸调PH5～6，加入3.0g聚酰胺粉，浸泡1分钟再充分搅拌。分数次转移到G3砂芯漏斗中抽提，弃去滤液。再用75mL解吸液分三次解吸色素（同5.5.1），收集滤液，用解吸液定容至100mL。

1.2.4叶绿素铜钠标准曲线的绘制

1.2.4.1标准工作液的配制

准确移取500μg/mL标准溶液10ml至100mL烧杯中，加入0.2 mol/L的乙酸铵溶液30mL，用4mol/L氢氧化钠溶液和冰乙酸调PH5～6。加入3.0g聚酰胺粉，充分搅拌2min，避光静置5min，用约20mL 蒸馏水转移至G3砂芯漏斗中抽滤，弃去滤液。用75mL解吸液分3次解吸色素：每次倒入约25mL解吸液，浸泡2min，再摇匀2min，抽滤并用10mL解吸液洗净抽滤瓶中残液。收集滤液，用解吸液定容至100mL，配制成浓度为50μg/mL的标准溶液，此溶液临用时配制。

1.2.4.2标准系列的绘制

分别取标准工作液0mL、5.0mL、10mL、20mL、30mL、40mL、50mL，至50mL容量瓶中，用解吸液稀释至刻度，配制成浓度为0μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、30μg/mL、40μg/mL、50μg/mL的标准系列。以0μg/mL溶液为空白，用分光光度计以1cm比色杯于405nm波长下测定其吸光值。

2 实验结果

2.1 标准曲线

经实验改进分析，本方法首次采用了405nm测定，通过对叶绿素标准品的实际考量，405nm更具有稳定性.本方法的标准曲线为Y=0.0486x-0.0055 ，相关系数r=0.9998，大大提高了方法的重现性，详见图1。

图1标准曲线线性图

2.2 方法的准确度、精密度实验

如表1所示，改进后本方法的平均回收率在98%—103%之间比原方法均有提高，相对标准偏差均小于0.05%，由此可见准确度与精密度都有提高。

2.3 检出限的测定

运用分光光度法将标准曲线中的5μg/mL 的标准溶液逐级稀释，实测出其检出限为0.0005g/Kg。经实验改进分析，本方法首次采用了405nm测定，通过对叶绿素标准品的实际考量，405nm更具有稳定性，与国标0.001 g/Kg相比，大大降低了方法的检出限[7～10]。

3 讨论

首先，本方法首次采用了405nm测定，得到405nm波长下的标准曲线更具有稳定性。本方法的标准曲线为Y=0.0486x-0.0055 ，相关系数达到0.9998。并且与国标方法的最低检出限0.001 g/Kg相比，本方法实测检出限为0.0005g/Kg，进一步降低了方法的检出限。其次，通过加大解析液用量至75mL，同时提高样品定容体积至100mL，使样品回收率在98%～103%之间均有提高，标准偏差均小于0.05%，不但确保了样品测定的重现性和稳定性，还提高了方法的精密度与准确度。