绵羊小反刍兽疫高免血清的制备

郝志香 卢晓辉

(新乡市动物疫病预防控制中心，河南 新乡 453002)

1 概述

小反刍兽疫(pestedespetitsruminants，PPR)，又名小反刍兽伪牛瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病。主要感染小反刍动物，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。OIE将其列为A类疫病。我国规定为一类动物疫病。免疫血清是紧急预防和早期治疗相应传染病的有效制剂。近期，我市报道有小反刍兽疫发生，为了快速控制快速控制疫情的传播，降低成本，提高治疗效果，促进畜牧业的健康发展，特制备当地毒株的高免血清。

2 方法

2.1 制备高免血清，对绵羊的选择

制备高免血清应选用近期有过典型临床表现且明显康复绵羊或者将采集有典型临床症状的病山羊的含毒组织接种体质健壮，无特殊病原体感染的健康绵羊。

2.2 制备高免血清的程序

2.2.1 抗原制备与接种

采集有典型临床症状的病山羊含毒组织作抗原，接种体质健壮，无特殊病原体感染的健康绵羊。抗原接种：动物在免疫过程中分为基础免疫及高度免疫。基础免疫一般是注射疫苗，然后连续多次注射强毒进行高度免疫，每次注射剂量，要随着注射次数的增加而增加。接种抗原的次数和剂量，应根据制造抗血清的品种和动物健康情况加以调整。为了获得效价高的抗血清，动物饲养条件必须保持良好。

2.2.2 血清抗体的检测

免疫程序接近结束时，测定血清的抗体效价，如果效价已达规定的要求，即可视作免疫成功，开始采血。若经试血，血清效价不合格，则可继续增加注射抗原次数或剂量，如再试血仍不合格，应将动物淘汰。测定免疫血清效价是及时掌握采血时机的重要步骤。如果用琼脂扩散试验测定血清效价时,若在抗原孔与抗体孔之间出现沉淀线者,即为阳性。最高稀释倍数血清孔出现的沉淀线,即为该血清的抗体效价。琼脂扩散试验的效价通常比环状沉淀反应稍低。

2.2.3 血清的采集与提取

免疫后，经试血，抗体滴度达到要求后可采血。动物采血应在上午空腹时进行，禁食一夜，可避免血中出现乳糜而获得澄清的血清。在操作过程中,应该注意的是,血清的分离应在无菌条件下进行,并应尽量防止溶血。采血用的器械、容器等用前要进行灭菌,以无菌操作采血,分离的血清加防腐剂经检验合格后分装和保存。

2.2.4 免疫血清的检验

抗血清的检验包括物理性状检验、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验、安全检验、效力检验和苯酚或汞类防腐剂残留量测定。物理性状检验、无菌检验、支原体检验、外源病毒检验均按“质量标准”中成品检验的有关规定进行。效力检验则按不同病原的抗血清规定方法和剂量进行。苯酚或汞类防腐剂残留量测定应符合兽用生物制品通则的规定。

3 注意事项

动物的选择；应选择体质健壮，无特殊病原体感染的动物，并且动物的饲养条件要好；抗原制备与接种：采集含毒组织时要做好个人防护及无菌操作，防止抗原的污染；试验全程都要做好无菌操作，采血用的器械、容器等用前要进行灭菌，以无菌操作采血，所有的采血均需要一动物一注射器，并且尽量防止溶血；制备的免疫血清一定要进行无菌检验，确保做到无菌后再进行免疫，防止因免疫而造成其他疾病的传播。

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