提高绵羊冷冻胚胎移植受胎率的方法

闵寒香，李 伟，刘长彬

(1.新疆生产建设兵团第十师一八三团畜牧兽医工作站，新疆 北屯市836000;2.新疆生产建设兵团第十师畜牧兽医站，新疆 北屯市836000;3.新疆农垦科学院 畜牧兽医研究所，新疆 石河子832000)

绵羊胚胎移植技术的快速发展在动物种质资源保护和运输过程中节约了成本，减少了疫病的传播，降低了人力的投入和进出口的防疫隔离等不利因素，逐渐被广大科研院所和育种企业接受，成为从国外或国内引进良种最有效的手段之一。2015年3月从国内引进良种胚胎608 枚，并分组进行了胚胎移植试验。

1 材料与方法

1.1 材料

受体羊为购进6 个月的湖羊，进行了两病检疫，均为阴性; 冷冻胚胎品种为黑头杜泊羊和黑头萨福克。

1.2 器械药品及耗材

氯前列烯醇(PG)、海绵栓、孕酮、holding液、蔗糖液、乙二醇、酒精、碘酒、新洁尔灭。

内窥镜、胚胎移植消毒桶(架)、子宫钳、手术刀片和刀柄、三棱针、10 号缝合线、子宫角打孔器、恒温水浴锅、1 mL 注射器、捡胚针、四孔板、35 mm 培养皿、实体显微镜、恒温台、弯头止血钳、纱布等。

1.3 方法

1.3.1 同期发情方法 采用海绵栓+PG 的处理方法进行同期发情处理。选择膘情中等以上，无疾病的受体羊。以任意一天放置阴道海绵栓为第0 天，第11 天撤出阴道海绵栓时肌肉注射PG 1 mL，第13 天早晨开始试情，连续试情2 d，发现发情羊及时记录耳号或打标记，待第22 天空腹，第23 天进行移植。

1.3.2 移植方法 采用钝性打孔和子宫角打孔器移植(专利号: 201520272750.4)。通过内窥镜系统将子宫角轻轻牵出至创口外，利用子宫角打孔器在子宫角上打孔，将胚胎移植至子宫体和子宫角方向，温生理盐水冲洗子宫角和打孔器。移植结束后迅速将子宫角推回腹腔，缝合并严格消毒窗口。第7 天拆除缝合线，并检查伤口恢复情况，如有化脓等及时处理。

2 试验结果

2.1 胚胎移植的不同方向对受胎率的影响

试验中将受体羊分为3 组，采取不同的移植方向，将胚胎移植子宫体方向的受胎率低于子宫角方向的受胎率，且差异显著(P ＜0.05)。见表1。

表1 不同移植方向对湖羊受胎率的影响

2.2 不同打孔方法对湖羊受胎率的影响

根据打孔方法的不同将受体湖羊随机分为3组，采用不同的打孔方法进行移植。子宫角打孔器法优于钝性打孔，且差异显著(P ＜0.05)。见表2。

表2 不同打孔方法对受胎率的影响

3 讨论与分析

3.1 影响胚胎移植受胎率的因素分析

胚胎移植成功率受多种因素影响，如胚胎质量［1，2］、气候、天气、品种［3］、营养、饲养管理、手术过程、发情同步差以及移植后的饲养管理等。谢献胜等认为，供体、受体发情同步差在±12 h范围内移植，受胎率显著高于±24 h，同步差为-12 h移植受胎率显著高于12 h 移植受胎率。在胚胎移植过程中同步差越小成功率越高，受胎率越高，反之亦然［4，5］。夏先林等研究认为，采取内窥镜移植的方法因为具有创口小、损伤小、恢复快，对卵巢刺激小、对子宫的牵引较轻和不易产生粘连等优点有助于胚胎发育着床，且速度快、效果好［6］。胚胎移植过程中手术熟练程度直接影响到胚胎移植的成功率，如果操作不当可引起受体羊死亡(打孔时打中腹主动脉)、供体羊生殖系统粘连等严重后果。研究表明，受体羊在移植过程中随时间延长胚胎移植成功率逐渐减低［7］。孙尚信等研究认为，影响胚胎移植成功率的因素很多，环境因素是影响胚胎移植成功的重要因素之一。给胚胎提供良好的成活和生长发育条件，可以提高胚胎移植成功率。另外，胚胎移植部位的一致性也将决定胚胎移植的受胎率。孙尚信等认为，供体冲胚时胚胎所处的子宫位置，在移植时也要将胚胎移植到相应的位置，才能保障较高的受胎率［8］。本试验中为了避免人为干扰试验数据，捡胚和移植固定2 个人进行。通过试验数据可以看出，将胚胎移植至子宫角端的受胎率明显高于子宫体方向的受胎率。在今后的试验研究中将继续加大这方面的工作，为此提供更多的数据支撑。

3.2 不同打孔方式对胚胎移植受胎率的影响

本次试验中采用了两种不同的器械进行子宫角打孔，即回形针钝性打孔和子宫角打孔器(专利号: 201520272750.4)打孔。从试验结果看，子宫角打孔器明显优于回形针钝性打孔的方式。能够取得这样的结果主要是因为，回形针打孔时手术操作技术人员需要将子宫角捏在拇指、食指和中指之间，以固定子宫角避免其滑动。由于回形针需要一定的力度才能将子宫壁穿透，在这个过程中需要使用较大的力度，手指也要用力挤压子宫角避免滑落，因此子宫角受损伤程度较重。而子宫角打孔器则避免了以上所有不足，利用子宫角打孔器可以轻松将子宫壁穿透，且基本没有出血现象。另外，子宫壁上的小孔约5 ～15 s 即恢复为肉眼难以观察到，对子宫损伤恢复极为有利，且不易形成子宫角粘连。由此保障了受体羊的重复利用效率，降低了受体羊的饲养和淘汰成本。

［1］袁东波，尹念春，陈家树.影响羊胚胎移植受胎率的主要因素［J］.养殖与饲料，2014，9: 23-24.

［2］谷振慧，王志刚，张英杰，等.羊胚胎移植影响因素的研究进展［C］.2014年全国养羊生产与学术研讨会论文集，68-69.

［3］许斌，张秀陶，吕建明，等.品种和超排时间对羊胚胎移植效果的影响［J］.宁夏农林科技，2009，6: 8-9.

［4］谢献胜，卢炜，王洁.把好羊胚胎移植成功率的关键环节［J］.泰州职业技术学院学报，2006，6(4): 62-64.

［5］杨昇，冯建忠，张金龙，等.影响羊胚胎移植妊娠率的因素分析［J］.中国畜牧杂志，2005，7: 41-43.

［6］夏先林，张明忠，杨通宽，等.影响波尔山羊冷冻胚胎的因素分析［J］.畜牧生产，2005，5: 40-41.

［7］丁建平，章孝荣，琚书存，等.受体羊重复使用对同期发情和胚胎移植效果的影响［J］.中国畜牧兽医，2005，6: 31-32.

［8］孙尚信，黄玉琴.环境因素对羊胚胎移植妊娠率的影响［J］.中国畜牧兽医，2008，35(5): 149-152.