北京某奶牛场新孢子虫病血清学调查

韩芳洁，刘 晶，南汇株，刘 群

（中国农业大学动物医学院，北京海淀100193）

北京某奶牛场新孢子虫病血清学调查

韩芳洁，刘 晶，南汇株，刘 群

（中国农业大学动物医学院，北京海淀100193）

新孢子虫病是由新孢子虫（Neospora caninum）引起的多种动物共患寄生原虫病，广泛流行于世界各地，主要引起怀孕母畜的流产、死胎以及木乃伊胎等，对畜牧业造成巨大经济损失，对牛的危害最为明显。新孢子虫可通过水平传播和垂直传播两种途径感染，一旦牛群中有牛食入新孢子虫卵囊，新孢子虫将会通过垂直传播在该牛群中散播，感染可持续存在多年。

已有报道，我国多地的奶牛中普遍存在新孢子虫感染。牛群中新孢子虫的传播来源较多，养殖方式、饲养管理等诸多因素影响着牛群新孢子虫的感染。我们随机采集北京某规模化奶牛场牛只血液，利用间接ELISA方法检测新孢子虫抗体，结合该奶牛群体资料信息，分析血清抗体阳性与奶牛年龄、流产发生以及奶牛之间血缘关系相关性，了解该牛场新孢子虫感染现状和感染来源，为进一步掌握新孢子虫在牛群中的感染规律以及防控牛新孢子虫病提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 血清某奶牛场奶牛存栏数约2 400头，牛场全群牛布鲁菌抗体阴性。一年四季均有流产发生，2014年3月有一流产高峰期，流产多发于妊娠5～6个月，死胎时有发生，没有明确原因。该奶牛场有3只犬和15只左右流浪猫。2014年8月至10月从该奶牛场随机采集不同年龄奶牛血样283份。

1.2 检测方法采用本实验室建立的检测牛血清新孢子虫抗体的间接ELISA试剂盒。

1.3 统计分析应用SPSS软件对不同年龄、流产发生史和母-犊奶牛的新孢子虫血清抗体阳性率进行差异性分析。

2 结果

所采集的283份血清新孢子虫阳性率为61.84%，其中成年母牛60.82%，后备牛为68.42%，二者差异不显著。见表1。

表1 奶牛新孢子虫血清抗体检测

2.1 不同年龄奶牛血清新孢子虫抗体检测对283头奶牛的血清新孢子虫抗体检测结果进行分析，发现各年龄段奶牛血清中均可检测到新孢子虫抗体，其中4岁龄奶牛的抗体阳性率最低，为41.79%，与其他各年龄组奶牛之间抗体阳性率差异极显著（P＜0.01）；其他各年龄段奶牛的血清抗体阳性率差异不显著（P＞0.05），见表2。

表2 各年龄组奶牛新孢子虫血清抗体检测

2.2 新孢子虫血清抗体与奶牛流产相关性283头被检奶牛中，有245头成年母牛，其中43头有流产史，202头无流产史，有流产史奶牛新孢子虫抗体阳性率高达81.40%，无流产史的奶牛阳性率为56.44%，见表3。经统计学分析，抗体阳性率与奶牛流产之间存在极显著差异（P＜0.01），说明奶牛感染新孢子虫是流产发生的主要因素。

表3 奶牛新孢子虫血清抗体阳性与奶牛流产相关性

2.3 母奶牛与其子代奶牛之间新孢子虫感染的相关性比对该牛场68对具有直系亲缘关系的母奶牛与其子代奶牛血清新孢子虫抗体的检测结果，发现新孢子虫抗体阳性奶牛所产子代牛的抗体阳性率为93.94%，明显高于新孢子虫抗体阴性奶牛所产子代牛的抗体阳性率20.00%，见表4。这一结果充分表明，垂直传播是该牛场新孢子虫感染的主要途径。

表4 母牛和子代牛血清抗体阳性的相关性

3 分析与讨论

自1988年新孢子虫被确认以来，世界各地陆续有关于各种动物新孢子虫感染的报道，由于新孢子虫对奶牛的危害最大，对奶牛新孢子虫感染的研究报道较多。刘群等（2003）首次报道了其对北京及山西5个奶牛场的40份新孢子虫血清抗体的检测结果，发现血清抗体阳性率为26.67%［2］。其后，国内有数篇关于奶牛新孢子虫感染和检测的报道，发现不同区域不同饲养方式的奶牛新孢子虫感染率变化较大，姚雷等2009年报道，北京地区奶牛新孢子虫抗体阳性率为43.4%，天津某养殖小区奶牛新孢子虫抗体阳性率为5.7%［3］。夏惠焰等2011年报道，我国南方某地奶牛新孢子虫抗体阳性率为18.9%［4］。郝攀等2013年报道，南京某奶牛场新孢子虫抗体阳性率为12.2%［5］。本试验利用前期构建的间接ELISA法检测了北京某奶牛场的部分血清样品，被检奶牛新孢子虫抗体阳性率为61.84%。该牛场建于上世纪50年代，设施较为陈旧，2013年之前，场内养殖多条犬并有多条流浪犬自由出入，为新孢子虫感染和传播创造了条件。

对照被检牛的背景资料，发现不同年龄奶牛的新孢子虫抗体阳性率不同，年龄较大的奶牛和后备牛的感染率较高，4岁龄奶牛的抗体阳性率最低。究其原因，可能是由于后备牛初次感染新孢子虫后抗体水平较高，随着年龄增长，抗体水平逐渐下降，机体处于隐性感染状态，导致不易检出，但随着年龄增长、妊娠增多或同时感染其他疾病，隐性感染虫体再次活跃，以致血清抗体水平升高；其次，随着奶牛饲养时间的增长，与环境中病原接触的机会越多，感染机会随之增加。已有研究表明，动物感染新孢子虫后可很快转为隐性状态，当抗体水平降至一定程度后，会持续保持较长时间，而当其他因素具备时，可引发隐性感染虫体繁殖，导致机体的抗体水平升高［6］。

奶牛感染新孢子虫的主要临床症状是流产，大量报道显示，奶牛流产与新孢子虫血清抗体阳性率密切相关，新孢子虫抗体阳性牛比抗体阴性牛更容易发生流产［7-8］。Koiwai等的研究发现，血清抗体阳性奶牛的流产率比阴性牛高9.2倍［9］。姚雷等（2009）对北京和天津奶牛研究发现，新孢子虫感染奶牛流产率是未感染新孢子虫奶牛的1.5倍到2.0倍［3］。本研究对比有流产史和无流产史奶牛的新孢子虫抗体检测结果，发现有流产史的牛抗体阳性率81.40%，无流产史的牛抗体阳性率56.44%，再次证明新孢子虫感染与奶牛流产的发生密切相关。

新孢子虫是机会性原虫，一般情况下感染牛并不表现可见症状。牛群中新孢子虫最有效的传播方式是经胎盘垂直传播给胎儿，一旦新孢子虫感染牛群，高达90%的子代牛可以经胎盘获得感染［10］，有报道可高达95%［7］。因此，环境中少量的卵囊就能导致新孢子虫在牛群中的散播。我们比较了有血缘关系的奶牛检测结果，血清抗体阳性母牛的子代牛阳性率高达93.94%，而血清抗体阴性母牛的子代阳性率为20.00%，二者之间差异极显著（P＜0.01）。推测该场奶牛群体最初的感染来源于犬，之后通过母代牛与子代牛之间的垂直传播进一步播散，因此该牛场当前的主要传播方式是垂直传播。

本次调查表明，该牛场存在严重的新孢子虫感染，奶牛流产与新孢子虫感染密切相关，垂直传播是新孢子虫感染奶牛的主要途径。

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S852.72+3

B

0529-6005（2015）12-0050-02

2015-07-20

国家奶牛产业技术体系（CARS-37-02A）

韩芳洁（1989-），女，硕士，研究方向为预防兽医学，E-mail：hanfangjie7549@163.com

刘群，E-mail：qunliu@cau.edu.cn